敲除SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因稳定HeLa细胞株的构建 |
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引用本文: | 孙瑜,陈红霞,齐永,李素芹,沈万鹏,饶继先,李佳萌,李晓玲,李越希.敲除SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因稳定HeLa细胞株的构建[J].粉末涂料与涂装,2018(11). |
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作者姓名: | 孙瑜 陈红霞 齐永 李素芹 沈万鹏 饶继先 李佳萌 李晓玲 李越希 |
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作者单位: | 南京医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系;南京军区军事医学研究所;中国药科大学生命科学与技术学院 |
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摘 要: | 目的构建SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因敲除的稳定HeLa细胞株。方法分别设计并合成SOSSB1、SOSSB2和SOSSC亚基的两对靶向基因特定外显子的A、B两个单导向核酸(single guide RNA,sgRNA)及其互补链,与含BbsⅠ黏性末端的PX462载体连接,构建重组质粒。重组质粒经酶切和测序鉴定正确后,分别转染至HeLa细胞,用2μg/mL的嘌呤霉素培养筛选出稳定HeLa细胞。采用Western blot法对敲除效果进行鉴定。结果 A、B sgRNA均成功插入至PX462载体,重组质粒经酶切和测序鉴定,证明构建正确。Western blot结果表明,筛选出的SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因敲除稳定HeLa细胞株分别不表达SOSSB1、SOSSB2、SOSSC蛋白。结论成功构建了SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因敲除的稳定HeLa细胞株。
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