人重组催乳素蛋白的原核表达、纯化及其稳定性分析 |
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引用本文: | 刘晓磊,张慧丽,王俊山,韩静,常丽青,鲁琨,王战争.人重组催乳素蛋白的原核表达、纯化及其稳定性分析[J].粉末涂料与涂装,2015(4):352-355. |
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作者姓名: | 刘晓磊 张慧丽 王俊山 韩静 常丽青 鲁琨 王战争 |
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作者单位: | 郑州人福博赛生物有限责任公司;郑州市第七人民医院;河南康鑫生物技术有限公司 |
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摘 要: | 目的 表达并纯化重组人催乳素(prolactin,PRL)蛋白,并检测其抗原性及稳定性。方法 以商品化的PRL c DNA为模板,PCR扩增目的基因,定向克隆至质粒p ET25中,构建重组原核表达质粒PRL-p ET25b,转化大肠埃希菌后诱导表达,产物经Ni-NTA亲和层析柱纯化,SDS-PAGE鉴定后,采用Bradford法测定蛋白浓度,PRL定量试剂盒分析抗原性,置-20、4和37℃9 d后,分析稳定性。结果 重组表达质粒经双酶切及测序鉴定证明构建正确,表达的重组PRL蛋白相对分子质量约30 000,以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的15%,纯度大于90%,总蛋白浓度为0.796 mg/ml。重组PRL蛋白于-20、4和37℃放置9 d,浓度变化较小,偏差在10%以内。结论 获得了高纯度的重组PRL融合蛋白,抗原性及稳定性均较好,可应用于试剂盒标准品或校准品的制备。
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关 键 词: | PRL 原核细胞 基因表达 纯化 抗原性 稳定性 |
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