| 二硫键异构酶DsbC介导重组瑞替普酶在E.coli中可溶表达 |
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| 引用本文： | 禚孝发,关怡新,姚善泾.二硫键异构酶DsbC介导重组瑞替普酶在E.coli中可溶表达[J].高校化学工程学报,2015(3):600-606. |
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| 作者姓名： | 禚孝发 关怡新 姚善泾 |
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| 作者单位： | 浙江大学 化学工程与生物工程学院,浙江杭州,310027 |
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| 摘 要： | 瑞替普酶(reteplase)是第三代溶血栓药物,其结构中含有9对二硫键,因而重组瑞替普酶在E.coli中表达时极易形成包涵体。研究引入二硫键异构酶Dsb C介导瑞替普酶折叠过程中错配二硫键的异构,从而促进其在E.coli中的可溶表达。首先分别构建了reteplase、Dsb C表达载体p BAD/His A-R及p ACYCDuet-1-Dsb C,并共转化入E.coli BL21菌株,获得了瑞替普酶的Dsb C共表达体系。在此基础上,考察了发酵过程中诱导方式及时间、培养温度、诱导剂浓度对瑞替普酶可溶表达量的影响。在37℃、200 r·min-1的条件下培养到OD600值为0.6左右时,加入0.1 mmol·L-1的IPTG诱导二硫键异构酶Dsb C的表达;在25℃、160 r·min-1的条件下培养1 h后,加入0.5 g·L-1的L-阿拉伯糖诱导目标蛋白瑞替普酶表达,继续培养10 h收获菌体,结果表明近60%的瑞替普酶实现了可溶表达,其产量约为70 mg·L-1发酵液,用平板溶圈法测得纯化后瑞替普酶的活性为2.35×105 IU·mg-1。通过共表达二硫键异构酶Dsb C实现了瑞替普酶在E.coli中的可溶表达,有助于瑞替普酶的临床及折叠机理研究,对其他富含二硫键的重组蛋白质生产具有一定的指导意义。
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| 关 键 词： | 瑞替普酶 二硫键异构酶 DsbC 共表达 可溶表达 |
Soluble Expression of Recombinant Reteplase in Escherichia coli by Co-Expression of Disulfide Bond Isomerase DsbC |
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| ZHUO Xiao-fa
,
GUAN Yi-xin
,
YAO Shan-jing.Soluble Expression of Recombinant Reteplase in Escherichia coli by Co-Expression of Disulfide Bond Isomerase DsbC[J].Journal of Chemical Engineering of Chinese Universities,2015(3):600-606. |
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| Authors: | ZHUO Xiao-fa GUAN Yi-xin YAO Shan-jing |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | reteplase disulfide bond isomerase DsbC co-expression soluble expression |
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