一种海洋黑曲霉耐盐内切纤维素酶的分离纯化和酶学性质研究

采用实验室从海底淤泥中筛选得到的海洋黑曲霉固态发酵生产纤维素酶,纤维素酶粗酶液经过硫酸铵分级沉淀、超滤、离子交换层析和疏水层析分离纯化后,得到了电泳纯的内切纤维素酶,酶的比活力由37.72 U·mg~(-1)提高到557.27 U·mg~(-1)。SDS-PAGE显示该内切纤维素酶的分子量约为34 kDa。考察了该酶的酶学性质,结果表明该酶的最适温度为60℃,最适pH为4.5,具有较好的热稳定性和p H稳定性。金属离子对该内切纤维素酶的酶活影响较大,Cu~(2+)、Fe~(2+)对内切纤维素酶具有一定的激活作用,Mn~(2+)、Ni~(2+)、Zn~(2+)对酶活性具有强烈的抑制作用。当NaCl浓度为40 g·L~(-1)时具有最佳酶活,在20~60 g·L~(-1)的高NaCl浓度环境下的酶活均高于不含NaCl环境下的酶活,在200 g·L~(-1) NaCl高盐浓度下,该酶尚能保持初始酶活的89%,是典型的耐盐型酶。对该酶的酶促进反应动力学进行研究发现其在pH4.5、60℃条件下米氏常数Km为11.7 mg·mL~(-1),Vmax为943.4 U·mg~(-1)。