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| 携带Herceptin-MICB融合蛋白基因的腺病毒载体的构建 | |
| 引用本文： | 贾玉,李林芳,钱其军.携带Herceptin-MICB融合蛋白基因的腺病毒载体的构建[J].浙江理工大学学报,2011,28(1). |
| 作者姓名： | 贾玉 李林芳 钱其军 |
| 作者单位： | 1. 浙江理工大学新元医学与生物技术研究所,杭州,310018 2. 第二军医大学东方肝胆外科医院,上海,200438 3. 浙江理工大学新元医学与生物技术研究所,杭州,310018;第二军医大学东方肝胆外科医院,上海,200438 |
| 基金项目： | 国家新药创制重大专项课题 |
| 摘 要： | 为了构建携带Herceptin-MICB融合蛋白基因的腺病毒载体,筛选出能表达该融合蛋白的重组腺病毒,检测其表达融合蛋白的情况及抗肿瘤特征.首先,通过PCR将NKG2D的配体MICB的基因片段插入含有全长抗体Herceptin基因的5型腺病毒穿梭载体pDC339-Her中,获得载体pDC339-Her-MICB与腺病毒骨架载体pBHGlox△E1,3Cr重组,然后在293细胞内进行病毒包装得到非增殖型腺病毒Ad-Her-MICB,纯化后测病毒滴度.双抗体夹心ELISA和Western blot检测融合蛋白的表达情况;间接免疫荧光实验(IFA)检测融合蛋白的特异性.酶切后DNA电泳鉴定证实载体构建成功,重组病毒经PCR鉴定携带融合蛋白基因.融合蛋白的表达量为(623.25±38.62)ng/mL;Westhern blot显示:该融合蛋白与商品化的Herceptin抗体轻链重链比较,大小一致,浓度匹配;间接免疫荧光检测(IFA)显示了融合蛋白与HER-2过表达的卵巢癌细胞株SK-OV-3结合的特异性.结果表明:腺病毒Ad-Her-MICB携带Herceptin-NKG2D配体融合蛋白基因能在体外正常表达且与商品化的Herceptin生物学特性相似,为融合蛋白的抗肿瘤治疗奠定基础. |
| 关 键 词： | 肿瘤 抗体治疗 融合蛋白 |
Construction and Identification of a Recombinant Adenovirus Vector Expressing Herceptin-MICB Fusion Protein |
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| JIA Yu,LI Lin-fang,QIAN Qi-jun.Construction and Identification of a Recombinant Adenovirus Vector Expressing Herceptin-MICB Fusion Protein[J].Journal of Zhejiang Sci-tech University,2011,28(1). | |
| Authors: | JIA Yu LI Lin-fang QIAN Qi-jun |
| Affiliation: | JIA Yu1,LI Lin-fang2,QIAN Qi-jun1,2(1.Xinyuan Institute of Medicine and Biotechnology,Zhejiang Sci-Tech University,Hangzhou 310018,China,2.Eastern Hepatobiliary Surgical Hospital,The Second Militaty Medical University,Shanghai 200438,China) |
| Abstract: | |
| Keywords: | Herceptin NKG2D |
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