| 嗜水气单胞菌RecA和Gap-2作为内参蛋白的评价 |
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| 引用本文： | 黄雁,李月,赵晶,陈明.嗜水气单胞菌RecA和Gap-2作为内参蛋白的评价[J].大连工业大学学报,2021,40(6):391-395. |
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| 作者姓名： | 黄雁 李月 赵晶 陈明 |
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| 作者单位： | 大连工业大学 生物工程学院,辽宁 大连 116034;大连民族大学 生命科学学院,辽宁 大连 116600 |
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| 摘 要： | 为确定嗜水气单胞菌中可用于Western Blot的适宜内参蛋白,考察了重组酶RecA和3-磷酸甘油醛脱氢酶Gap-2在该菌不同培养阶段及培养条件下的表达稳定性.以嗜水气单胞菌基因组为模板扩增recA和gap-2基因,并对蛋白进行异源表达.利用亲和层析和凝胶过滤层析技术纯化蛋白,制备多克隆抗体.通过Western Blot技术研究了RecA和Gap-2蛋白在嗜水气单胞菌不同培养时间、不同培养温度和培养环境中铁离子浓度差异条件下的表达情况.结果显示,重组表达载体pET-28a-recA和pET-28a-gap-2构建成功,可与His标签融合表达.纯化后得到了纯度较高的RecA和Gap-2,以二者为抗原制备的多克隆抗体效价均达到1:512000.Western Blot结果表明,RecA在细菌生长稳定期表达情况与前期有所差异,而Gap-2蛋白在该菌不同培养时期、温度及铁离子浓度差异的环境中表达较为恒定.研究表明,Gap-2更适合作为嗜水气单胞菌Western Blot检测用内参蛋白.
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| 关 键 词： | 嗜水气单胞菌 内参蛋白 重组酶RecA 3-磷酸甘油醛脱氢酶Gap-2 |
Evaluation of RecA and Gap-2 in Aeromonas hydrophila as internal reference proteins |
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| HUANG Yan,LI Yue,ZHAO Jing,CHEN Ming.Evaluation of RecA and Gap-2 in Aeromonas hydrophila as internal reference proteins[J].Journal of Dalian Dalian Polytechnic University,2021,40(6):391-395. |
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| Authors: | HUANG Yan LI Yue ZHAO Jing CHEN Ming |
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