| 金黄色葡萄球菌肠毒素SEK的纯化及DAS-ELISA检测方法的建立与应用 |
| |
| 引用本文： | 杨丹茹,赵燕英,唐俊妮. 金黄色葡萄球菌肠毒素SEK的纯化及DAS-ELISA检测方法的建立与应用[J]. 现代食品科技, 2019, 35(3): 225-233 |
| |
| 作者姓名： | 杨丹茹 赵燕英 唐俊妮 |
| |
| 作者单位： | 西南民族大学生命科学与技术学院,青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室,四川成都610041;西南民族大学生命科学与技术学院,青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室,四川成都610041;西南民族大学生命科学与技术学院,青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室,四川成都610041 |
| |
| 基金项目： | 国家重点研发计划项目（2018YFD0500500）；西南民族大学研究生创新项目（CX2018SZ20） |
| |
| 摘 要： | 本研究目的为建立一种快速检测金黄色葡萄球菌新型肠毒素SEK的双抗夹心酶联免疫吸附方法。将构建的原核表达载体pET-28a(+)-ΔNspSEK转化入BL 21(DE3)pLysS细胞中诱导表达,经Ni~(2+)-NTA亲和层析柱纯化获得重组SEK蛋白作为抗原。利用双抗夹心酶联免疫方法检测程序,确定抗SEK单克隆抗体及抗SEK多克隆血清的最佳稀释度,并使用该方法应用于检测SEK人工污染样品的加标回收率和茶多酚及乳酸链球菌素(Nisin)对7株sek阳性菌株的SEK蛋白分泌影响。结果表明,原核表达载体得到可溶性表达,重组SEK蛋白分子量约为27.7ku;建立的双抗夹心酶联免疫检测方法中,单克隆抗体最佳包被浓度为2.89μg/mL、抗血清的最佳稀释度为1:500,回归方程为y=0.2165x+0.1627,相关系数R~2=0.9993,最低检测限为0.1μg/mL;检测SEK人工污染脱脂奶、LB肉汤和牛肉糜中的加标回收率高达97%以上;并且,采用建立的方法测得茶多酚和Nisin的添加浓度在其MIC及以下浓度时,茶多酚对7株sek阳性菌株蛋白分泌抑制效果更明显。
|
| 关 键 词： | 金黄色葡萄球菌肠毒素SEK 原核表达 蛋白纯化 ELISA检测方法 |
| 收稿时间： | 2018-11-10 |
Prokaryotic Expression, Purification, Development and Application of a Double-antibody Sandwich Enzyme Linked Immunosorbent Assay for Staphylococcal Enterotoxin K |
| |
| YANG Dan-ru,ZHAO Yan-ying and TANG Jun-ni. Prokaryotic Expression, Purification, Development and Application of a Double-antibody Sandwich Enzyme Linked Immunosorbent Assay for Staphylococcal Enterotoxin K[J]. Modern Food Science & Technology, 2019, 35(3): 225-233 |
| |
| Authors: | YANG Dan-ru ZHAO Yan-ying TANG Jun-ni |
| |
| Affiliation: | (College of Life Sciences and Technology, Southwest Minzu University, Key Laboratory of Qinghai-Tibet Plateau Animal Genetic Resource and Utilization, Southwest Minzu University, Chengdu 610041, China),(College of Life Sciences and Technology, Southwest Minzu University, Key Laboratory of Qinghai-Tibet Plateau Animal Genetic Resource and Utilization, Southwest Minzu University, Chengdu 610041, China) and (College of Life Sciences and Technology, Southwest Minzu University, Key Laboratory of Qinghai-Tibet Plateau Animal Genetic Resource and Utilization, Southwest Minzu University, Chengdu 610041, China) |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Staphylococcal enterotoxin K prokaryotic expression protein purification ELISA |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《现代食品科技》浏览原始摘要信息 |
|
点击此处可从《现代食品科技》下载免费的PDF全文 |
|
