| 实时荧光单引物等温扩增检测阪崎克罗诺杆菌方法的建立 |
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| 引用本文： | 李静,段永生,王建昌,孙晓霞,胡连霞.实时荧光单引物等温扩增检测阪崎克罗诺杆菌方法的建立[J].中国食品卫生杂志,2015,27(5):524-530. |
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| 作者姓名： | 李静 段永生 王建昌 孙晓霞 胡连霞 |
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| 作者单位： | 河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心,河北 石家庄 050051,河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心,河北 石家庄 050051,河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心,河北 石家庄 050051,河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心,河北 石家庄 050051,河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心,河北 石家庄 050051 |
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| 基金项目： | 质检公益性科研专项项目(201210128；201310126) |
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| 摘 要： | 目的建立实时荧光单引物等温扩增(SPIA)检测阪崎克罗诺杆菌的方法。方法本文以阪崎克罗诺杆菌Omp A基因特异序列为靶序列,设计RNA-DNA组合引物和链终止序列,优化反应体系,对4株不同来源阪崎克罗诺杆菌和21株其他食源性致病菌进行实时荧光SPIA特异性分析,通过不同浓度梯度阪崎克罗诺杆菌菌悬液灵敏度的检测和添加有阪崎克罗诺杆菌的婴儿配方奶粉样品检出限的确定,评价方法的准确度。结果除4株阪崎克罗诺杆菌外,其他细菌均未出现特异性荧光扩增曲线,具有良好的特异性。在40 min内,实时荧光SPIA检测阪崎克罗诺杆菌纯培养基因拷贝灵敏度为每反应1 copies,相应活菌数为1.6×10-1cfu/ml;对婴儿配方奶粉模拟样品中阪崎克罗诺杆菌的检出限是1.5×100cfu/100 g。结论本研究建立的方法具有灵敏度高、特异性强、耗时短、操作简单等优点,适用于实验室快速检测阪崎克罗诺杆菌Omp A基因。
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| 关 键 词： | 实时荧光 单引物 等温扩增 阪崎克罗诺杆菌 OmpA基因 婴儿配方奶粉 食源性致病菌 |
| 收稿时间： | 2015/3/16 0:00:00 |
Establishment of the real-time fluorescence single primer isothermal amplification for the detection of Cronobacter sakazakii |
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| LI Jing,DUAN Yong-sheng,WANG Jian-chang,SUN Xiao-xia and HU Lian-xia.Establishment of the real-time fluorescence single primer isothermal amplification for the detection of Cronobacter sakazakii[J].Chinese Journal of Food Hygiene,2015,27(5):524-530. |
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| Authors: | LI Jing DUAN Yong-sheng WANG Jian-chang SUN Xiao-xia and HU Lian-xia |
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| Affiliation: | The Technical Center of Inspection and Quarantine,Hebei Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,Hebei Shijiazhuang 050051,China,The Technical Center of Inspection and Quarantine,Hebei Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,Hebei Shijiazhuang 050051,China,The Technical Center of Inspection and Quarantine,Hebei Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,Hebei Shijiazhuang 050051,China,The Technical Center of Inspection and Quarantine,Hebei Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,Hebei Shijiazhuang 050051,China and The Technical Center of Inspection and Quarantine,Hebei Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,Hebei Shijiazhuang 050051,China |
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