| 抗甲硝唑单链抗体融合蛋白的表达及其ELISA检测方法建立 |
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| 引用本文： | 何扩,张秀媛,王云峰,赵瑞平,李育峰.抗甲硝唑单链抗体融合蛋白的表达及其ELISA检测方法建立[J].食品研究与开发,2019,40(9):46-50. |
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| 作者姓名： | 何扩 张秀媛 王云峰 赵瑞平 李育峰 |
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| 作者单位： | 河北省农产品食品质量安全分析检测重点实验室河北北方学院 |
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| 基金项目： | 河北省高等学校科学技术研究项目（QN2016242） |
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| 摘 要： | 为实现甲硝唑单链抗体(single-chain variable fragment,scFv)在大肠杆菌中的可溶性表达,以甲硝唑抗体可变区基因(VH、VL)为模板,扩增甲硝唑的scFv基因,scFv双酶切后与PLIP6/GN载体重组,构建重组质粒PLIP6/GNscFv,转化大肠杆菌JM109,阳性克隆转大肠杆菌BL21经温度诱导表达重组单链抗体,并通过聚丙酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)对其鉴定。采用竞争酶联免疫(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测重组单链抗体的抗原结合活性。结果表明诱导表达的scFv分子量接近33 kDa,能够特异性识别兽药甲硝唑,半抑制率(IC50)为(0.72±0.04)ng/mL。选择虾样品进行添加回收试验,建立的方法检测其回收率在88.54%到113.27%之间。这说明成功构建重组质粒PLIP6/GN-scFv并实现可溶性表达并可用于实际样品检测。
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| 关 键 词： | 甲硝唑 单链抗体 融合蛋白 诱导表达 酶联免疫吸附 |
| 收稿时间： | 2019/1/29 0:00:00 |
Fusion Protein Expression and ELISA Detection Method Construction of Single Chain Fv Against Metronidazole |
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| HE Kuo,ZHANG Xiu-yuan,WANG Yun-feng,ZHAO Rui-ping,LI Yu-feng.Fusion Protein Expression and ELISA Detection Method Construction of Single Chain Fv Against Metronidazole[J].Food Research and Developent,2019,40(9):46-50. |
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| Authors: | HE Kuo ZHANG Xiu-yuan WANG Yun-feng ZHAO Rui-ping LI Yu-feng |
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