| 嗜热厌氧乙醇杆菌组氨酸融合双活性乙醇脱氢酶的克隆、表达和酶学性质 |
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| 引用本文： | 蒋宇,邵蔚蓝.嗜热厌氧乙醇杆菌组氨酸融合双活性乙醇脱氢酶的克隆、表达和酶学性质[J].食品与生物技术学报,2006,25(5):15-19. |
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| 作者姓名： | 蒋宇 邵蔚蓝 |
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| 作者单位： | 1. 江南大学,工业生物技术教育部重点实验室,江苏,无锡,210046
2. 江南大学,工业生物技术教育部重点实验室,江苏,无锡,210046;南京师范大学,生命科学学院,江苏,南京,210097 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划(973计划);国家自然科学基金 |
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| 摘 要： | 乙醛脱氢酶和乙醇脱氢酶是嗜热厌氧乙醇菌Thermoanaerobacter ethanolicus乙醇代谢途径中的关键酶。根据高同源性的NADP(H)依赖型Ⅱ型乙醇脱氢酶(S-ADH)的序列设计引物,从T.ethanolicusJW200基因组中PCR扩增出编码S-ADH的基因,插入带组氨酸标签的pET-20(b),测序获得基因大小为1 059 bp,并在大肠杆菌JM109(DE3)中表达。表达产物经Ni亲和柱提纯达电泳纯。带组氨酸标签的重组NADP(H)依赖型乙醇脱氢酶具乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶双活性,能将乙酰辅酶A转化成乙醇.带组氨酸标签的重组酶酶学性质为乙醛脱氢酶活性最适值为pH 8.4,最适温度70℃;乙醇脱氢酶活性正、逆反应分别最适pH 8.0,最适T 55℃;最适pH8.9,最适为T 60℃。以乙酰辅酶A(Aceyl-CoA)为底物,该酶的Km为3.32 mmol/L,Vmax为12.5μmol/(min.mg)。T.ethanolicusJW200中双活性S-ADH的首次发现,建立了该菌乙醇代谢途径中从乙酰辅酶A到的乙醇的另一条通路。
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| 关 键 词： | 嗜热厌氧乙醇菌 双活性 乙醛脱氢酶 乙醇脱氢酶 |
| 文章编号： | 1673-1689(2006)05-0015-05 |
| 修稿时间： | 2005年9月28日 |
Cloning, Expression and Characterization of Histag Fusion Biofunctional Alcohol Dehydrogenase from Thermoanaerobacter ethanolicus JW200 |
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| JIANG Yu,SHAO Wei-lan.Cloning, Expression and Characterization of Histag Fusion Biofunctional Alcohol Dehydrogenase from Thermoanaerobacter ethanolicus JW200[J].Journal of Food Science and Biotechnology,2006,25(5):15-19. |
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| Authors: | JIANG Yu SHAO Wei-lan |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Thermoanaerobacter ethanolicus bifunctional alcohol dehydrogenase aldehyde dehydrogenase |
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