绿豆环氧化物水解酶基因的克隆、分析及表达

环氧化物水解酶可催化制备高光学纯度的环氧化物及邻二醇等高价值手性药物中间体。本研究采用RT-PCR和THSO-PCR扩增侧翼未知DNA序列技术从绿豆(Vigna radiata)中克隆了一种新型环氧化物水解酶Vr EH3的基因Vreh3,Vreh3编码区DNA序列长度为1 178 bp,包含2个142 bp和79 bp的内含子,以及957 bp的开放阅读框,编码318个氨基酸。Vr EH3的理论相对分子质量和等电点分别为36.2×103和5.59;保守的催化三联体为Asp101-Asp262-His297。将Vreh3与表达载体p ET-28a(+)连接,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得重组Vr EH3。该酶可对映归一性水解外消旋环氧苯乙烷((R,S)-SO)产生(R)-苯基乙二醇,得率高达79.4%,对映体过量值(e.e.值)为94.7%。