| C4ST-1在大肠杆菌中的可溶性表达 |
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| 引用本文： | 李青,周正雄,堵国成,李江华,康振.C4ST-1在大肠杆菌中的可溶性表达[J].食品与生物技术学报,2020,39(6):68-75. |
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| 作者姓名： | 李青 周正雄 堵国成 李江华 康振 |
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| 作者单位： | 江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122;江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122; 江南大学 糖化学与生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122 |
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| 摘 要： | 软骨素-4-O-硫酸转移酶-1 (Chondroitin-4-O-sulfotransferase-1,C4ST-1,EC 2.8.2.5)催化软骨素N-乙酰半乳糖胺(N-Acetylgalactosamine,GalNAc)4号位羟基硫酸化生成硫酸软骨素A(chondroitin sulfate A,CSA)。C4ST-1含3对二硫键,在Escherichia coli细胞质内二硫键难以正确形成,故在E. coli中表达时主要以包涵体形式存在。为提高胞内可溶性蛋白质的表达水平,共表达了催化二硫键从头形成的巯基氧化酶(Erv1p)或/和促进二硫键正确折叠的二硫键异构酶(DsbC)。结果表明共表达DsbC可使C4ST-1融合蛋白的胞内可溶性表达水平显著提高,但C4ST-1和Erv1p共表达对胞内可溶性蛋白质的表达影响相对较小。C4ST-1和Erv1p或C4ST-1和DsbC共表达菌株的酶活分别为原始菌株的1.30和2.33倍,活力达到(12.32±0.76) U/L和(21.99±0.42) U/L。挑取同时共表达C4ST-1、Erv1p和DsbC的菌株进行摇瓶水平和3 L发酵罐放大培养,酶活分别达到(29.12±0.66) U/L和49.97 U/L。本研究为C4ST-1的大规模应用奠定了一定的基础。
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| 关 键 词： | 软骨素-4-O-硫酸转移酶-1 硫氧还蛋白还原酶 巯基氧化酶 二硫键异构酶 可溶性表达 |
Soluble Expression of C4ST-1 in Escherichia coli |
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| LI Qing,ZHOU Zhengxiong,DU Guocheng,LI Jianghu,KANG Zhen.Soluble Expression of C4ST-1 in Escherichia coli[J].Journal of Food Science and Biotechnology,2020,39(6):68-75. |
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| Authors: | LI Qing ZHOU Zhengxiong DU Guocheng LI Jianghu KANG Zhen |
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| Affiliation: | School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, China;School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, China; Key Laboratory of Carbohydrate Chemistry and Biotechnology, Ministry of Education, Jiangnan University, Wuxi 214122, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | chondroitin-4-O-sulfotransferase-1 thioredoxin reductase sulfhydryl oxidase disulfide isomerase soluble expression |
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