基于RPA-LFD法的多黏菌素耐药基因mcr-1可视化快速检测方法建立与应用 |
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引用本文: | 焦雪,董羽织,王靖雯,吕晨泽,方结红,蒋晗.基于RPA-LFD法的多黏菌素耐药基因mcr-1可视化快速检测方法建立与应用[J].食品工业科技,2023(18):209-216. |
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作者姓名: | 焦雪 董羽织 王靖雯 吕晨泽 方结红 蒋晗 |
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作者单位: | 中国计量大学生命科学学院浙江省特色农产品品质及危害物控制技术重点实验室 |
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基金项目: | 国家自然科学基金(31901792,31801655); |
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摘 要: | 目的:建立一种快速、高效、可视化的细菌多黏菌素耐药基因mcr-1检测方法,为其基层检测的展开提供依据和便利。方法:利用重组酶聚合酶扩增结合胶体金侧向流试纸条技术(Recombinase polymerase amplification combined with a lateral flow dipstick,RPA-LFD),辅以手持式胶体金读数仪;根据mcr-1基因保守序列设计合成一对特异性RPA引物,通过对反应条件和体系的优化,以及特异性试验、灵敏度试验、模拟食样试验和实际样品试验,成功建立了可视化定量检测细菌多黏菌素耐药基因mcr-1的RPA-LFD方法。结果:在引物浓度400 nmol/L,引物比例1:1时,该方法最佳反应条件为Mg2+浓度14.0 mmol/L,反应温度37℃,反应时间20 min;灵敏度好,标准曲线方程为y=0.117x+0.051,定量限为101~108 copies/μL,检出限为101 copies/μL,比PCR法低一个数量级且模拟样品检出结果与PCR法一致。利...
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关 键 词: | 多黏菌素耐药基因mcr-1 重组酶聚合酶扩增技术 胶体金侧向流试纸条 快速检测 可视化 定量 |
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