外切型琼胶酶AgaO的高效表达及酶学性质表征 |
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引用本文: | 程媛媛,陈庆敏,李俊鸽,李淑焕,王延辉,韩文君.外切型琼胶酶AgaO的高效表达及酶学性质表征[J].食品工业科技,2019(7). |
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作者姓名: | 程媛媛 陈庆敏 李俊鸽 李淑焕 王延辉 韩文君 |
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作者单位: | 山东农业工程学院食品科学与工程学院山东省教育厅特色农产品采后品控与综合利用重点实验室;山东大学国家糖工程技术研究中心糖化学与生物学山东省重点实验室 |
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摘 要: | 根据大肠杆菌的密码子偏好性,优化外切型琼胶酶AgaO的基因并人工全合成,克隆入表达载体质粒pET-30a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),优化表达条件即诱导温度、诱导时间和诱导剂IPTG终浓度,纯化重组蛋白rEAgaO,并分析其酶学性质变化。结果表明,重组酶rEAgaO在16℃、IPTG终浓度0.1 mmol/L条件下诱导20 h时表达量最高;95%以上的重组蛋白质为水溶性表达,产量约为1432.7 mg/L,较优化前原始基因的产量提高了10.9倍;重组酶rEAgaO的最适反应温度为45℃,在低于40℃的温度下预处理2 h后,仍然具有90%以上的残余活性,最适pH为7.0,在pH6.0~10.0不同缓冲体系4℃处理2 h仍保留69.5%以上的活性;该酶降解琼脂糖后的最终产物经TLC分析鉴定为新琼二糖。基因密码子优化虽不改变蛋白质氨基酸序列,但可明显提高水溶性重组蛋白质的产率及酶活,对促进相关酶类的生产和应用具有借鉴意义。
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