多点突变提高α-L-鼠李糖苷酶热稳定性 |
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引用本文: | 刘小琴,杨岩,吴喆瑜,巩建业,刘嘉男,廖辉,李文静,李利君.多点突变提高α-L-鼠李糖苷酶热稳定性[J].食品与发酵工业,2019(6):23-29. |
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作者姓名: | 刘小琴 杨岩 吴喆瑜 巩建业 刘嘉男 廖辉 李文静 李利君 |
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作者单位: | 集美大学食品与生物工程学院;福建省食品微生物与酶工程重点实验室;厦门市食品与生物工程技术研究中心 |
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基金项目: | 国家自然科学基金(31371751) |
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摘 要: | 为了提高α-L-鼠李糖苷酶的热稳定性,对实验室前期构建的K406R、K440R、K573V、E631F四个不同氨基酸位点的单点突变体进行联合突变,得到了K406R-K573V、K406R-E631F、K440R-K573V、K440R-E631F四个联合突变体。结果表明,相比于野生型(wild type,WT),联合突变体K440R-K573V和K440R-E631F的热稳定性有所提高,在60℃时半衰期分别提高了1. 13倍,1. 44倍;在65℃的半衰期分别提高了1. 64倍,1. 64倍;在70℃的半衰期分别提高了1. 88倍,1. 68倍。对突变体K440R-E631F进行圆二色谱分析、分子动力学以及分析微观结构变化分析可知,K440R-E631F突变体与WT相比,内部疏水性有所提高,二级结构中α-螺旋、"-转角、无规则卷曲含量增多,可能与热稳定性的提高相关。
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关 键 词: | α-L-鼠李糖苷酶 联合突变 热稳定性 |
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