| 产紫青霉β-葡萄糖醛酸苷酶基因的克隆与原核表达 |
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| 作者姓名： | 宋占科 王小艳 陈国强 李春 |
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| 作者单位： | 北京理工大学生命科学与技术学院,北京,100081;石河子大学化学化工学院,新疆,石河子,832003;北京理工大学生命科学与技术学院,北京,100081;石河子大学化学化工学院,新疆,石河子,832003 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，北京市自然科学基金，北京理工大学基础研究项目 |
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| 摘 要： | 产紫青霉（Penicillium purpurogenum Li-3）β-葡萄糖醛酸苷酶可定向转化甘草酸生成单葡萄糖醛酸基甘草次酸。根据β-葡萄糖醛酸苷酶氨基酸序列的同源保守区设计简并引物，PCR扩增克隆得到β-葡萄糖醛酸苷酶编码基因pgus(GenBank登录号：EU095019)，该基因全长1815bp，编码604个氨基酸，理论单亚基分子量为67.77×103，含有4个潜在的N-糖基化位点。构建原核表达载体pET-28a(+)-pgus，转化大肠杆菌BL21（DE3），获得高效表达pgus基因的重组菌。经IPTG诱导表达、Ni2+-NTA亲和层析柱纯化的重组酶PGUS-E，纯度达到95%以上，得率为25.6 mg•L-1，SDS-PAGE分析检测分子量约为70×103，比酶活达到6368 U•mg-1。
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| 关 键 词： | 甘草酸 β-葡萄糖醛酸苷酶 克隆 产紫青霉 |
| 收稿时间： | 2008-05-13 |
| 修稿时间： | 2008-7-29 |
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