体外抗坏血酸诱导中脑源神经干细胞向多巴胺能神经元的分化

为探索抗坏血酸(ascorbic acid,AA)对小鼠胚中脑区来源的神经干细胞向多巴胺能神经元诱导分化的影响,本研究于体外培养小鼠胚中脑区来源的神经干细胞,传代纯化并分为四组,在有血清条件下分别给予10 μM、100 μM、200 μM AA诱导分化,并设空白组对照,DAPI细胞核标记,抗酪氨酸羟化酶免疫荧光细胞化学技术鉴定分化结果,荧光显微镜下计数阳性细胞比例.结果显示:在本诱导分化实验中,AA作用下中脑神经干细胞分化出多巴胺能神经元比例最高约为9%,明显高于空白对照组(约1%,P＜0.01).     

无血清条件下LIF对小鼠胚胎干细胞增殖及多能性的影响

在无血清条件下培养KES小鼠胚胎干细胞,研究LIF在无血清条件下对小鼠胚胎干细胞增殖及多能性维持的影响。联合使用小分子物质SU5402、PD184352和CHIR99021或单独使用LIF培养小鼠胚胎干细胞,检测无血清条件下LIF对小鼠胚胎干细胞自我更新能力和全能性的影响。结合使用极限稀释法培养KES细胞单克隆,统计不同培养体系下单克隆的形成率。结果显示:无血清条件下,单独使用LIF,不能维持小鼠胚胎干细胞的自我更新能力和全能性;使用含有3种小分子药物SU5402,PD184352和CHIR99021(3i)的无血清培养液可以维持小鼠胚胎干细胞的自我更新,传代60代以上仍可保持全能性;添加LIF的3i培养系统显著提高了小鼠胚胎干细胞的单克隆形成率。表明在无血清条件下,LIF不能单独维持小鼠胚胎干细胞的多能性。3i培养体系可以维持胚胎干细胞的全能性而不需要LIF;3i条件下,LIF可以显著促进胚胎干细胞体外增殖和单克隆形成。     

体外培养成骨细胞的生长状态

目的:了解体外培养成骨细胞的生长状态,为其作为细胞模型研究骨替代材料提供依据。方法:将传代5次的兔成骨细胞,以1×105/mL、5×104/mL和1×104/mL的细胞密度接种于六孔板内,连续培养,倒置相差显微镜观察成骨细胞的生长状态。结果:各组成骨细胞在细胞贴壁、细胞形态、生长方式、增殖能力、钙化等方面有差异。结论:体外培养成骨细胞受接种时细胞密度的影响而呈现不同的生长状态。     

体外建立灵长类动物滋养层细胞系的研究进展

滋养层(Trophoblast)是构成胎盘的主要细胞类型,但调节灵长类动物滋养层细胞特别是滋养层干细胞(Trophoblast Stem Cell, TSC)发育的分子机制的研究因为材料来源和伦理的限制,目前知之甚少.因此,建立灵长类动物滋养层细胞模型对胎盘发育以及胎盘相关疾病的研究极为重要,目前已经建立了多种不同的灵长类滋养层细胞系模型.本文分别从：组织来源的灵长类滋养层细胞、灵长类胚胎干细胞诱导的滋养层细胞、灵长类胚胎直接来源的滋养层干细胞以及从体细胞中重编程得到的滋养层干细胞4种不同来源的滋养层细胞进行综述,回顾并探索其建立过程、优缺点,以及滋养层细胞系应用的研究进展.     

培养方法对发菜细胞中多糖和蛋白含量影响的研究

以BG110 (不含氮)作培养液,通过对发菜的液体培养以及在3种不同润湿性固体依附基质材料粗沙、PA6和玻璃渣上的固体培养,研究了不同培养方法对发菜的生长、多糖分泌和蛋白质生成的影响.实验结果表明,发菜细胞在液体培养的条件下生长速率最高,粗沙上次之,在PA6上再次之,在玻璃渣上最低;在液体培养下,发菜细胞荚膜多糖分泌和蛋白质生成最高,分别占菌体干重的5.5%和38.7%,而在固体材料玻璃渣上培养的发菜细胞胞外多糖分泌量最高,占菌体干重的4%.     

磷酸三钙陶瓷人工骨的细胞相容性研究

将磷酸三钙（ＴＣＰ）陶瓷与Ｌ９２９细胞体外混合培养，ＭＴＴ法检测显示细胞增殖活性未受抑制；ＴＣＰ陶瓷与成骨细胞体外混合培养，扫描电镜观察见细胞长满培养孔底玻片上，其生长行为与单纯成骨细胞组无区别；ＴＣＰ陶瓷与骨髓细胞体外混合培养，倒置相差显微镜观察见大量骨髓细胞生长贴附于材料表面、孔道内及培养孔底，其生长行为与单纯骨髓细胞组无差异。这些结果表明ＴＣＰ陶瓷无细胞毒性，具有良好的细胞相容性。     

卵巢癌病人腹水细胞的培养及其分化研究

肿瘤干细胞是指能分化出不同表型、自我更新和不断分化的肿瘤细胞群,具有与干细胞相似的特征。文章通过流式细胞术分析从人卵巢癌腹水分离所得的细胞表面蛋白的分化特征,发现这些腹水细胞具有部分干细胞表面标志(CD44+,CD90+,β2M+)蛋白,但却不表达CD133和CD34,且体外培养2周后,腹水细胞表面标志发生了变化,这些结果为卵巢癌干细胞研究提出了新的启示。     

水溶性甲壳素-丝素复合膜的制备及生物相容性

采用水溶性甲壳素6-O-羟乙基甲壳素（6-O-GC,DS=1.0）与丝素（SF）混合,制备了水溶性均相混合的复合膜,并通过体外细胞培养法研究了其生物相容性.复合膜的表面形貌观察表明：均相混合的复合膜表面比单纯膜分布均匀、平坦光滑;红外光谱（FT-IR）证明了均相混合的复合膜中两种天然高分子之间形成了氢键结合,成为均一的混合体;人皮肤纤维芽细胞在复合膜上能正常生长、增殖和分化,表明6-O-GC/SF复合膜具有良好的生物相容性,是一种有应用前景的生物组织再生膜材料.     

新生小鼠骨骼肌成肌细胞分离和分化方法研究

建立一个高效的分离和分化小鼠成肌细胞的方案,以便探讨MAML1在转基因小鼠中肌管的形成和肌肉发生中的作用。使用细胞分化方法鉴定MAML1在肌肉发生中的作用。使用Western blot检测肌肉发生的标志蛋白肌球蛋白Myosin的表达。研究发现,传代次数少于5次及卫星细胞对成肌细胞在体外形成正确的肌管非常重要。不传代直接进行诱导分化,能促使成肌细胞形成更多的肌管。在MAML1转基因小鼠中,MAML1通过促进形成更多、更粗壮而长的肌管,提高肌球蛋白的蛋白水平来促进肌肉发生。这些MAML1转基因的肌管能够持续存在超过5天,然后才会降解。     

兔成骨细胞体外培养体系的研究

为了建立兔成骨细胞体外培养模型，为骨替代材料的研究提供成骨细胞，选用了新生15d兔颅盖骨，采用酶消化法和组织块法相结合的方法进行成骨细胞的体外分离和培养，通过倒置显微镜观察其形态，并对其碱性磷酸酶（ALP）活性及矿化能力进行鉴定，结果显示培养细胞具有体内成骨细胞的形态学特征和生物学行为。体外培养兔成骨细胞的实验方法切实可行，成功建立了兔成骨细胞体外培养模型，为骨替代材料的实验研究提供了一种客观而有效的手段。     

适宜不同种类细胞的温敏性共聚物膜的筛选

以温敏性聚N-异丙基丙烯酰胺(poly(N-isopropylacrylamide),PNIPAAm)为主体的细胞培养基底通过温度的改变来调控细胞在其上的黏附和脱附,有效替代传统酶解法实现贴壁细胞的非酶解收获,同时,贴壁细胞对温敏性基底具有选择性。选取贴壁型HeLa细胞、HEK293细胞、骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)和脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)作为考察对象,采用具有不同表面润湿性、表面形貌和膜厚度等特征的系列PNIPAAm共聚物膜作为备选培养基底,考察查适合这四种细胞黏附和脱附的共聚物膜性能范围。实验结果表明,不同种类细胞对温敏性基底具有不同的选择性,同时为上述细胞分别选取了适宜的温敏性共聚物膜。     

肺泡巨噬细胞在低氧诱导肺动脉内皮细胞向平滑肌样细胞转分化中的作用

研究低氧条件下肺动脉内皮细胞（PAEC）向平滑肌样细胞的转分化及肺泡巨噬细胞（PAM）在此转分化过程中的作用。将经免疫磁珠法（用血小板-内皮细胞粘附分子PECAM-1做免疫分选标记）纯化后的原代肺动脉内皮细胞分别在常氧（含21％O2、5％CO2和74％N2）和低氧（含1％O2、5％CO2,94％N2）条件下培养1、4、7d,并在低氧条件下用肺泡巨噬细胞条件培养基与肺动脉内皮细胞共培养,用免疫组化法检测平滑肌细胞标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白（α-SM-actin）的表达,结合形态学观察从而判定有无平滑肌样细胞的转分化。结果显示：随着低氧培养时间的延长,肺动脉内皮细胞转分化为平滑肌样细胞的比率逐渐增加（P〈0．05）;与肺泡巨噬细胞条件培养基共培养后,平滑肌样细胞的转化率明显升高（P〈0．05）。肺动脉内皮细胞中存在具有转分化为平滑肌样细胞潜能的细胞;低氧可明显促进转分化,肺泡巨噬细胞在此转分化过程中起重要作用。     

CHO DG44细胞无血清培养基关键组分的优化与替代

以悬浮CHO DG44细胞为对象,采用central composite响应面分析法,以活细胞密度为评价指标,确定了3种对细胞生长有明显促进作用的培养基关键组分——胰岛素、转铁蛋白及亚硒酸钠（简称ITS）的最优浓度及其相互影响模式,并设计了一种有效的低成本ITS替代混合物。同时在添加25 mg/L硫酸葡聚糖条件下成功解决细胞高密度悬浮培养的成团问题,为CHO细胞低成本无血清培养基的研制提供了理论依据。     

肾下腹主动脉移植骨髓间充质干细胞治疗脊髓缺血再灌注损伤大鼠模型的建立

干细胞移植是治疗脊髓损伤的研究热点和重要方向,目前移植途径多为局部注射和静脉注射.本研究在建立大鼠脊髓缺血再灌注损伤(SCIRI)改良模型基础上,经肾下腹主动脉向缺血节段脊髓分别输注不同数量Hochest 33342标记的骨髓间充质干细胞(BMSCs)悬液.采用BBB评分观察大鼠后肢功能变化,镜下观察BMSCs体内分布情况.结果显示,移植100万和200万细胞数组L2脊髓内荧光细胞分布率和术后6d、12d BBB评分显著高于50万细胞数组和培养基输注组.以上结果说明经肾下腹主动脉输注的BMSCs能够在缺血再灌注损伤脊髓内存活并促进脊髓功能恢复,最佳移植细胞数为每只大鼠推注100万细胞.     

间型脉孢菌产类胡萝卜素研究

筛选了一株产类胡萝卜素的间型脉孢菌（Neurosporaintermedia）,研究了该菌发酵过程中培养条件、添加物和光照条件对类胡萝卜素产量的影响．实验结果表明,间型脉孢菌产类胡萝卜素的适宜温度为30℃;当培养基中添加了1.5mg／L没食子酸和0．05g／L植酸钙后,所培养菌丝中类胡萝卜素含量分别可达46．44和54．03（μg／g干菌体）,比对照产量分别提高了100％和133％（以干菌体计）;增加光照对菌体产类胡萝卜素也有明显的促进作用,与对照相比,类胡萝卜素产量提高了73．7％．间型脉孢菌孢子中类胡萝卜素含量明显高于菌丝含量,达145．5μg／g孢子．固体培养时产孢量大,因此物料中类胡萝卜素产量可达81．94μg／g干曲．     

突变型P53特异性活化T细胞的诱导与扩增

采用多种细胞因子诱导外周血单核细胞分化为成熟的树突状细胞（DC,Dentritic Cell）,将成熟DC与初始T细胞共培养,并连续加入DC刺激从而避免活化的T细胞凋亡。将活化的T细胞转入包被有CD3和CD28抗体的板中,使活化T细胞进一步大量扩增。流式检测多因子诱导后DC表型发现,高表达CD83、CD11c、CD11b、CD80、CD86、CCR7、CD54,低表达CD14、CD3、CD33,说明因子成功诱导单核细胞为成熟DC。流式检测扩增的活化T细胞发现高表达CD3、CD8,含有很低量的调节性T细胞（Treg）,分泌大量的IFN-γ,表明扩增出的细胞中活化T的含量很高,为临床研究提供参考。     

氧化辅助脱合金法制备Cu_xO多孔纳米结构薄膜

采用课题组新发展的氧化辅助脱合金（OAD）技术,对由磁控溅射设备在不锈钢衬底上沉积的Cu0.54Al0.46合金薄膜进行化学腐蚀处理,从而得到CuxO多孔纳米结构薄膜。利用粉末X射线衍射仪、扫描电子显微镜和透射电子显微镜对腐蚀产物的晶体结构、微观形貌和化学成分进行了表征分析。研究结果表明,腐蚀产物为一大面积且均匀的CuxO多孔纳米结构薄膜,它主要由片状结构的Cu8O7和棒状结构的Cu2O共同组成。进一步地,对CuxO多孔纳米结构薄膜的形成机理进行了初步探讨。     

黄颡鱼优质高效养殖模式鲢最适混养密度研究

通过开展黄颡鱼养殖池塘水质调控试验,研究黄颡鱼优质高效养殖模式鲢最适混养密度．在黄颡鱼养殖池塘安装围隔（3m×9m×1．7m）6个,引入黄颡鱼养殖肥水,以不投放任何鱼类亦不投饵的围隔Ⅰ为对照组,围隔Ⅱ不投饵放养白鲢25．70g／m2,围隔Ⅲ～Ⅵ投饵养殖黄颡鱼4．8尾／m2,并分别混养鲢鱼0、51．85、105．19、150g／m2．黄颡鱼平均规格为13．7±0．8g,鲢平均规格为157．0±8．5g．监测浮游动物（ind．／L）、浮游植物（mg／L）、叶绿素aChla．（μg／L）、透明度SD（cm）、化学耗氧量CODMn（mg／L）、总氮TN（mg／L）、总磷TP（mg／L）等指标,并收集成活率、收获量等数据．综合试验结果可以得出：黄颡鱼养殖密度4．8尾／m2、混养鲢密度105．19g／m2的养殖模式,水体Chla．、SD、TN、TP、CODMn指标与对照组相比差异不显著（P〉0．05）,水质环境良好;与其余养殖模式相比,其鲢生物量增幅最大,黄颡鱼成活率、增重率均最大,养殖产量高．     

推理闭包系统的一些性质

证明了对于一个给定的非空集合X,可以在RCL（X）（X上的推理闭包算子的全体）、R IN（X）（X上的推理内部算子的全体）、ROU（X）（X上的推理外部算子的全体）、RB（X）（X上的推理边界算子的全体）上定义适当的序关系,使它们与（RCS（X）,真包含）序同构,其中RCS（X）是给定集合X上的推理闭包系统的全体.     

抗肿瘤海洋真菌的筛选及菌株HGQ6的初步研究

筛选抗肿瘤活性海洋真菌,鉴定活性菌株并初步研究其活性代谢产物的理化性质。从连云港近岸海域沉积物中共分离得到真菌31株,发现它们的培养物普遍具有抗肿瘤活性,其中4株真菌的培养物具有显著的细胞毒活性（抑制率〉80%）。对活性菌株HGQ6的研究表明,其发酵液对多种肿瘤细胞呈现显著的细胞毒活性,活性产物为极性中等、热稳定性较好和耐酸不耐碱的物质。根据菌株的形态学特征和ITS序列分析结果,将菌株HGQ6鉴定为产黄青霉（Penicillium chryso-genum）。