产细菌素乳酸菌的筛选及鉴定

采用琼脂平板扩散实验,从湖南传统发酵腊肉和香肠中筛选出3株对单核增生李斯特菌(Listeria monocytogene54002)具有明显抑制作用的乳酸菌,排除酸和过氧化氢的干扰后,仍具有抑菌活性,而用胰蛋白酶和胃蛋白酶处理以后,其抑菌活性消失,因此确定该抑菌物质为蛋白质类物质,即细菌素。三株菌所产细菌素具有一定热稳定性,在pH5~10之间仍具有一定的抑菌活性。通过生理生化实验和16S rRNA基因序列分析对3株菌进行了鉴定。PCR扩增得到1600bp左右的16S rRNA基因序列,将序列通过BLAST软件在NCBI网站上进行同源性对比,并通过MEGA5.0软件绘制系统发育树。结果显示3株菌的16S rRNA序列和数据库中的屎肠球菌的序列同源性均在99%以上,这与生理生化实验初步鉴定结果一致。      

产细菌素乳酸菌的筛选与鉴定

从蒙古国风干牛肉中分离出28株乳酸菌,以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和单核增生李斯特菌为指示菌检测28株乳酸菌的抑菌活性,其中菌株37X-3和菌株37X-13对3种指示菌的抑菌能力较强,且经胃蛋白酶和蛋白酶K处理后抑菌活性全部丧失,表明2株乳酸菌通过产细菌素的方式发挥抑菌作用。再经表型、生理生化和基因型鉴定,确定菌株37X-3为戊糖片球菌,菌株37X-13为乳酸片球菌。2种片球菌素在121 ℃,15 min,pH 2～6范围均能抑制3种指示菌的生长,且对单核增生李斯特菌抑菌作用最强。2种片球菌素抑菌谱广,不仅能抑制枯草芽孢杆菌、屎肠球菌等革兰氏阳性菌,还能抑制沙门氏菌、志贺氏菌等革兰氏阴性菌。     

产细菌素乳酸菌的筛选及鉴定

从传统发酵制品中分离筛选到50株乳酸菌,通过琼脂扩散法从中筛选出5株对指示菌具有明显抑菌作用的菌株,通过排除酸和过氧化氢的作用后,其中一株菌仍具有一定的抑菌活性。用胰蛋白酶对其发酵液进行处理后,活性下降很大,说明代谢产物中含有蛋白性质的抑菌物质,可能是细菌素。对此菌株进行鉴定,初步认为是戊糖乳杆菌,并对其生长能力和产酸能力进行了测定。      

传统干酪中一株产IIa类细菌素乳酸菌的分离与鉴定

从内蒙古传统干酪中分离到一株产抑菌活性物质的乳酸菌M-2，其对单核细胞增生李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌等食品中常见致病菌和腐败菌都有抑制作用。排除有机酸、H202等的干扰后，仍有抑菌活性：进一步硫酸铵沉淀、透析及浓缩处理后，其抑菌活性显著增强；用蛋白酶K处理后，其抑菌活性消失，因此确定该抑菌活性物质为蛋白类物质，进而确定乳酸菌M-2为细菌素产生菌。通过生理生化实验和16SrRNA基因序列分析对该菌株进行了鉴定。PCR扩增得到1675bp的16SrRNA序列，并将其通过BLAST软件在NCBI网站中进行同源性比，同时，通过Bioedit7．0和Treedrawing软件绘制系统发育树。结果显示，M-2的16SrRNA序列和数据库中的屎肠球菌SF菌株的序列的同源性为99．87％。在细菌系统发育分类学上，M-2菌株归属屎肠球菌（Enterococcus faecium）。这与生理生化实验初步鉴定结果一致。根据细菌素的分类原则，将该细菌素归类为IIa类细菌素。     

产细菌素的饲用乳酸菌的分离与鉴定

禽畜产品中的抗生素残留严重威胁人类的健康,推行无抗养殖的重要途径就是发展发酵饲料。从饲料原料中分离得到能够抑制大肠杆菌生长的乳酸菌,通过排除发酵液中有机酸和H2O2的干扰,初步确定4株具有较强抑菌功能的乳酸菌。分别采用胰蛋白酶、蛋白酶K和胃蛋白酶处理发酵上清液后,其抑菌活性减小,初步确定抑菌活性物质为细菌素。进一步通过耐酸、耐胆盐和耐热实验确定1株适合动物肠道定植的乳酸菌R16,生理生化实验和16S rDNA基因序列分析鉴定该菌株为乳酸片球菌R16。筛选获得具有抑菌功能的、适合动物肠道定植和耐饲料加工的饲用乳酸菌对开发无抗发酵饲料具有重要的实用价值。     

产细菌素乳酸菌的筛选与鉴定

利用溶钙圈法及牛津杯双层平板法,从欧洲萨拉米香肠、新疆奶酪、自发酵泡菜和韩式辣白菜中分离筛选产细菌素的乳酸菌,通过形态学、生理生化鉴定、16S rDNA将菌株鉴定到种,并对其细菌素基因进行克隆,确定细菌素种类。结果表明:从分离纯化到的206株乳酸菌中筛选出抑菌效果较好的菌株SA102、SA104、N105、N107、N108,在排除酸、过氧化氢等干扰因素后,菌株所产抑菌物质对蛋白酶敏感,初步判定起抑菌作用的是细菌素。16S r DNA结果表明这5株产细菌素的菌株2株为乳酸乳杆菌,3株为植物乳杆菌,通过设计引物对菌株细菌素基因进行PCR快速筛选,结果表明菌株N107、N108含有IIb类细菌素Plantaricin KJ基因编码序列,生理生化指标测试证实这些产细菌素菌株不产气、不产氨、不产硫化氢、不产粘、不产色素,具有较好的生物安全性。最后对发酵液中细菌素粗提物的酸碱稳定性和温度稳定性进行了初步探究,以期为将来细菌素的进一步实际应用提供一定的理论借鉴。      

传统干酪中一株产Ⅱa类细菌素乳酸菌的分离与鉴定

从内蒙古传统干酪中分离到一株产抑菌活性物质的乳酸菌M-2,其对单核细胞增生李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌等食品中常见致病菌和腐败菌都有抑制作用.排除有机酸、H2O2等的干扰后,仍有抑菌活性;进一步硫酸铵沉淀、透析及浓缩处理后,其抑菌活性显著增强;用蛋白酶K处理后,其抑菌活性消失,因此确定该抑菌活性物质为蛋白类物质,进而确定乳酸菌M-2为细菌素产生菌.通过生理生化实验和16SrRNA基因序列分析对该菌株进行了鉴定.PCR扩增得到1675bp的16SrRNA序列,并将其通过BLAST软件在NCBI网站中进行同源性比,同时,通过Bioedit 7.0和Treedrawing软件绘制系统发育树.结果显示,M-2的16S rRNA序列和数据库中的屎肠球菌SF菌株的序列的同源性为99.87%.在细菌系统发育分类学上,M-2菌株归属屎肠球菌(Enterococcus faecium).这与生理生化实验初步鉴定结果一致.根据细菌素的分类原则,将该细菌素归类为IIa类细菌素.     

产Ⅱa类细菌素乳酸菌的筛选、鉴定与生物学特性的研究

使用牛津杯筛选法从发酵泡菜中筛选到1株对大肠杆菌、单核细胞增生李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌和米曲霉具有抑制作用的乳酸菌BC-3,排除有机酸、H2O2干扰及蛋白酶处理失活,确定了抑菌物质为细菌素,发现该细菌素在pH5.0～12.0的条件下都有抑菌活性;在100℃热处理20min后活性基本不变。通过生理生化试验对该菌株进行了初步鉴定,结果显示,BC-3菌株归属为屎肠球菌(Entorococcus faecium),根据细菌素的一般分类原则将该细菌归类为IIa类细菌素。     

一株产细菌素乳酸菌的分离和鉴定

从市售3种酸乳中分离得到4株乳酸菌,通过发酵液的抑菌实验确定S1菌株为细菌素产生菌,综合S1菌株的形态学特征、生理生化特征将其初步鉴定为乳酸乳球菌(Lactococcus lactis.)。在排除过氧化氢和有机酸对指示菌的抑制作用后,确定该菌株产生的抑菌物质为细菌素,该细菌素对大肠杆菌具有较好抑制作用。     

产宽谱pH 细菌素乳酸菌的筛选鉴定、毒力检测及细菌素特性研究

采用琼脂扩散法从分离自川西高原奶渣的34株疑似乳酸球菌中筛选细菌素产生菌,初筛检测发酵上清液抑菌活性,复筛排除有机酸和H2O2干扰,检测蛋白酶敏感性,测定抑菌物质盐析液和粗提液抑菌活性,确定菌株SAU-2为细菌素产生菌。根据形态、生理生化指标和16S rDNA序列系统发育分析,将其鉴定为Enterococcus。肠球菌SAU-2溶血素表型阴性,agg、gelE、cylM、cylB、cylA、esp、efaAfm、cpd、cob、ccf、cyILL、cyILS、fsrB和hyLEfm等毒力因子基因型阴性,表明肠球菌SAU-2是安全的。所产细菌素可耐受121℃条件20min;在pH2.0～12.0有抑菌活性;对胰蛋白酶和蛋白酶K敏感,对木瓜蛋白酶和胃蛋白酶不敏感;主要对近缘乳酸菌和G+细菌有抑菌活性,除对1株铜绿假单胞菌和1株红酵母有抑菌活性外,对其余G－细菌和真菌无抑制作用。     

马奶酒中抗单增李斯特氏菌细菌素产生菌的筛选及鉴定

从内蒙古传统乳制品酸马奶酒中分离出144株乳酸菌,通过双层琼脂平板扩散法筛选出具有明显抑菌作用的菌株.在排除有机酸、H2O2等的干扰后,其中1株乳酸菌的发酵上清液对受试的单核细胞增生李斯特氏菌表现出明显抑制作用;进一步硫酸铵沉淀、透析及浓缩处理后,其抑菌活性显著增强,说明其代谢产物中含有蛋白质类抑菌物质,可能是细菌素.经生理、生化试验和形态学观察,将该菌株鉴定为屎肠球菌(Enterococcus faecium).     

传统牦牛酸奶中产细菌素乳酸菌的筛选及鉴定

采用溶钙圈法对来自青海海南藏族自治区、四川阿坝、甘孜理塘的牦牛酸奶样品的菌株进行分离筛选,采用形态学观察和16S rRNA序列分析进行鉴定;测定筛选菌株上清液对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大肠杆菌（Escherichia coli）抑菌活性;考察筛选菌株上清液对蛋白酶的耐受性及对抗生素的敏感性,并确定细菌素种类。结果表明,共分离筛选出6株菌（编号为A1～A2及G1～G4）,其中菌株A1～A2被鉴定为嗜热链球菌（Streptococcus thermophilus）,菌株G1～G4被鉴定为屎肠球菌（Enterococcus faecium）;菌株G3对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌圈直径＞20 mm,且对蛋白酶不耐受,表明该菌株产细菌素,对常见抗生素敏感,经细菌素基因鉴定证实,该菌株产肠球菌素A和肠球菌素P。综上,菌株G3可作为产细菌素益生菌的候选菌株。     

产细菌素弯曲乳杆菌的分离鉴定及细菌素特性初步研究

从西班牙传统色拉米香肠中分离到一株产细菌素菌株RX-6,其发酵液在排除有机酸、过氧化氢及菌体细胞干扰后,抑菌活性基本无变化;经硫酸铵盐析及透析处理后,抑菌活性明显增强;蛋白酶K处理后,抑菌活性消失,表明起抑菌作用的是蛋白类物质。通过菌体形态观察、生理生化特征实验、16SrRNA序列比对及系统发育分析,鉴定菌株RX-6为弯曲乳杆菌（Lactobacillus curvatus）。抑菌特性研究结果显示该菌株所产细菌素具有很好的热稳定性和酸碱耐受性,在121℃20min的高温处理后仍能保持一定活性,活性pH范围为3¹0;使用安全性高,胃蛋白酶和胰蛋白酶可将其完全分解,而酸性蛋白酶可将其部分分解;抑菌谱较广,对受试的7株李斯特菌（Listeria spp.）、3株金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aereu）、1株大肠杆菌（Escherichia coli）及1株假单胞菌（Pseudomonas spp.）等都有明显抑制作用,显示出作为天然食品生物防腐剂的巨大应用潜力。      

发酵面团中抗单增李斯特氏菌乳酸菌的筛选及鉴定

以单增李斯特氏菌为指示菌,通过牛津杯双层平板法对从发酵面团样品中分离出的54株乳酸菌进行抑菌试验。在排除有机酸,过氧化氢的干扰后,其中1株乳酸菌的发酵上清液对单增李斯特氏菌仍然表现出明显的抑制作用。其抑菌活性在酸性条件下较强,在加入蛋白酶K和胰蛋白酶以及100℃以上热处理时明显下降甚至消失,说明其代谢产物中含有蛋白质类抑菌物质,是一类细菌素。经Trcine-SDS-PAGE试验分析该细菌素分子质量为25 kDa;经过生理生化试验及16S rDNA序列同源性分析,该菌被鉴定为Lactobacillus curvatus。     

产细菌素乳酸菌的选育及其抑菌特性的研究

采用牛津杯琼脂扩散法,从实验室保存的乳酸菌中筛选到具有较高抑菌活性的菌株嗜酸乳杆菌A、戊糖片球菌M和戊糖片球菌T,它们产生的抑菌物质经排除酸、过氧化氢后,仍具有抑菌活性,然而经蛋白酶处理后其抑菌活性明显下降,确定其抑菌物质为细菌素,进一步的抑菌实验表明,3株菌所产细菌素具有较宽的抑菌谱,适宜用作生物型防腐剂。     

乳酸菌中抗李斯特细菌素的筛选及理化性质分析

从鱼肉丸中分离筛选到1株具有抑菌活性的乳酸菌菌株Y153,对单核细胞增生李斯特菌ATCC54003的生长具有良好的抑制作用。16SrRNA序列同源性分析鉴定乳酸菌Y153为乳酸链球菌属（Streptococcus）。在排除有机酸、过氧化氢的干扰后,确定该抑菌物质为蛋白类物质,即细菌素,命名为细菌素Y153。理化性质分析表明,细菌素Y153具有较好的热稳定性、酸碱稳定性可被人体内蛋白酶降解的特性。由此对乳酸链球菌所产细菌素Y153有了初步的研究,为开发天然的食品防腐剂奠定理论基础。     

泡菜中产细菌素菌株的分离及细菌素性质的初步研究

从四川泡菜中分离得到一株产细菌素的菌株,经形态学、生理生化鉴定等试验,初步鉴定此菌株为乳酸菌。对其所产细菌素做温度、pH、蛋白酶的敏感性试验,实验结果表明,发酵上清液中的抑菌物质对胃蛋白酶、木瓜蛋白酶较敏感,菌株所产细菌素在高温(121℃20min)和酸性条件(pH 3.0～5.0)下均有较强的抑菌活性,可以较好地抑制革兰氏阳性、阴性菌,筛选得到的菌株所产细菌素是一类具有广谱抑菌活性的细菌素。     

和田地区酸奶中产细菌素乳酸菌的筛选及细菌素特性的研究

从和田地区酸奶中筛选出了乳酸菌A3,其所产抑菌物质在排除过氧化氢和有机酸的干扰及蛋白酶失活实验后,可以初步确定是一种细菌素。该细菌素对热较稳定,在酸性条件下表现出很好的抑菌活性,同时具有广谱的抑菌活性。根据该菌株的形态和生理生化特性,将A3菌株初步鉴定为肠膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)。     

一株产细菌素乳酸菌的分离、鉴定及生物学特性研究

从豆制品工厂自然发酵的豆清蛋白发酵液中分离得到一株产细菌素的乳酸菌,编号为NLB-3。通过排除发酵液中有机酸、过氧化氢对指示菌的抑菌作用,及抑菌物质的蛋白酶稳定性试验,初步确定菌株NLB-3的抑菌物质为细菌素。结合菌株NLB-3的菌落及菌体形态、生理生化特征及16SrDAN测序结果,初步将其鉴定为乳杆菌属NLB-3(Lactobacillus sp.NLB-3)。菌株NLB-3的生物学特性表明,该菌株最适生长温度为35℃,菌株在该温度下发酵16h后菌液pH低至3.45,菌株NLB-3有较广的盐耐受范围,当NaCl浓度大于10%时,菌株的生长受到明显抑制。     

传统发酵牦牛酸乳中细菌素产生菌的筛选与鉴定

从西藏羊八井地区、云南香格里拉的传统牦牛酸乳中分离出26株乳酸菌,以枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌以及酿酒酵母为指示菌。采用牛津杯双层琼脂扩散法检测菌株的抑菌谱大小,并经过有机酸排除、过氧化氢排除、蛋白酶水解检测试验,最终筛选得到5株产细菌素的菌株,编号分别为3、23、24、21和25。通过微生物形态学与16SrDNA序列同源性分析,鉴定这些菌株分别为干酪乳杆菌、植物乳杆菌和乳酸乳球菌乳球亚种。抑菌谱试验表明,这些细菌素能够抑制部分食源性革兰氏阳性菌和阴性致病菌,对真菌无抑菌活性。