大米活性肽对H2O2诱导HUVEC氧化损伤的保护作用研究

观察和分析了RBP处理前后对氧化损伤的HUVEC细胞生长、凋亡及超微结构的影响。MTT检测结果显示:RBP保护组与正常对照组生长状况相似、生长趋势相同、增殖能力相当。HE染色结果显示:RBP保护组细胞形态与正常对照组细胞形态相似,整体完整性较好,细胞形态及分布规则,细胞数较多,与损伤组比较保护作用明显;细胞凋亡流式检测结果显示:损伤组凋亡率为93.7%,RBP保护组的细胞存活率占72.6%,比H2O2损伤组细胞存活率高出66.6%,保护作用明显;扫描电镜结果显示:RBP保护组细胞损伤程度降低,完整性较好,胞间连接紧密,说明RBP对氧化损伤的HUVEC细胞有很好的保护作用。RBP在体外对H2O2诱导的HUVEC细胞氧化损伤有一定的保护作用。     

大米活性肽的抗氧化作用及其对HUVEC细胞增殖的影响

本试验测定了大米活性肽(RBP)对自由基的体外清除能力,观察和分析了大米活性肽处理前后对氧化损伤的血管内皮细胞形态及增殖的影响。结果表明:RBP对DPPH·、·OH的清除能力较高,分别可达46.76%和68.23%。MTT检测结果显示:RBP对照组与正常对照组HUVEC细胞增殖能力相当,说明RBP对正常HUVEC无明显影响。而RBP保护组细胞增殖能力显著高于H_2O_2氧化损伤组,在培养48 h后高出损伤组48.5%。光镜及荧光显微镜观察结果显示:RBP保护组细胞形态相较氧化损伤组更趋于扁平铺展,形态规则、完整,且贴壁细胞形态与正常对照组相似,说明大米活性肽对H_2O_2损伤的HUVEC有一定的保护作用。这一结果将为以大米活性肽为原料的功能性食品的开发提供有益提示和理论基础。     

绿豆皮黄酮对H2O2诱导人脐静脉血管内皮细胞损伤的保护作用

目的:研究绿豆皮黄酮对H2O2诱导损伤人脐静脉血管内皮细胞的保护作用及其机制。方法:用体积分数70%的乙醇提取绿豆皮中黄酮,采用高效液相色谱法测定其有效成分;通过H2O2诱导HUVEC细胞损伤,建立细胞氧化损伤模型。试验被分为正常对照组、H2O2组、维生素C组、绿豆皮黄酮低、中、高剂量组(20,60,80μg/m L),通过MTT法测定细胞增殖能力,生化比色法检测各组细胞及培养液中的超氧化物酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乳酸脱氢酶(LDH)活性以及谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量。结果:H2O2呈剂量依赖性降低内皮细胞活力,并引起细胞凋亡。其中1 000μmol/L H2O2处理HUVEC后,与正常组相比,细胞存活率明显受到抑制,而绿豆皮各剂量组能显著提高细胞和细胞培养液中的GSH-Px、SOD、GSH活性,降低MDA含量,同时降低细胞中LDH活性并增强细胞培养液中的LDH含量。结论:绿豆皮黄酮能抑制H2O2诱导的内皮细胞凋亡,减轻H2O2对内皮细胞的损伤作用,其机制是:绿豆皮黄酮抑制损伤细胞脂质过氧化,提高机体抗氧化酶活性,清除自由基。     

榛仁五肽对HUVEC细胞氧化应激损伤的保护作用

本文以长白山榛仁五肽Ala-Trp-Asp-Pro-Glu(AWDPE)为研究对象,利用体外化学和细胞实验,研究AWDPE抗氧化活性及对HUVEC细胞氧化应激损伤的保护作用。结果显示:AWDPE浓度为1 mg/mL时对DPPH和ABTS自由基清除率分别达到63.38±2.44%和69.38±1.96%;实验范围内,不同浓度AWDPE对HUVEC细胞无生长抑制作用,亦无生长促进作用;与血管紧张素Ⅱ氧化损伤组相比,AWDPE保护组细胞活力高于AngⅡ损伤组1.51倍(p0.01);100μg/mL AWDPE保护组细胞内,LDH释放率为27.14±1.16%,为AngⅡ损伤组0.62倍(p0.01);500μg/mL AWDPE保护组细胞内,MDA含量为3.47±0.28 nmol/mg,为AngⅡ损伤组0.73倍;100μg/mL AWDPE保护组细胞内,CAT含量为2.34±0.11 U/mg,为AngⅡ损伤组1.39倍(p0.05);500μg/mL AWDPE保护组细胞内,T-SOD含量为23.55±1.26 U/mg,为AngⅡ损伤组2.48倍(p0.01);500μg/mL AWDPE保护组细胞内,GSH-PX含量为33.9±2.75 nmol/L,为AngⅡ损伤组1.91倍(p0.01)。上述实验证明AWDPE五肽对HUVECs细胞氧化应激损伤具有显著的保护作用。     

酪蛋白水解物类蛋白反应修饰产物对H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞(HUPVC)氧化损伤的保护作用

本研究以Neutrase 0.8 L对酪蛋白进行水解,水解后的酪蛋白(HC)分别导入外源性氨基酸苯丙氨酸、组氨酸与脯氨酸进行类蛋白反应。所得的修饰产物(HCPHE、HCHIS和HCPRO)体外的DPPH?清除活性,羟自由基清除能力和还原能力与HC相比最大可分别提高30.51%、45.83%和42.81%(p0.05)。HUPVC与修饰产物单独预孵育24 h后经300μmol/L H2O2氧化损伤考察修饰产物对HUPVC的保护作用,CCK-8法测定细胞存活率结果表明修饰产物高剂量组的细胞成活率分别高于HC组7.86%、5.21%和10.52%(p0.05),与茶多酚(TP)给药组无明显差异(p0.05),并存在剂量依赖关系。与氧化损伤模型组相比,HCPHE、HCHIS和HCPRO可有效降低LDH渗出率,MDA生成量,SOD活力,降低效果强于同浓度的HC组,与此同时可使GSH-Rd,CAT的活力显著增强,然而细胞内GSH的含量变化不明显。综上所述,三种类蛋白反应修饰产物对H2O2诱导的HUPVC损伤具有很好的保护作用,且保护效果高于HC。     

山杏仁蛋白酶水解物抑制炎症因子NO、TNF-α和IL-1β的产生

分别用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶制备山杏仁蛋白酶水解物,通过格里斯实验和ELISA方法,研究山杏仁蛋白酶水解物对巨噬细胞产生炎症因子NO、TNF-α和IL-1β的影响。结果表明山杏仁木瓜蛋白酶水解物显著抑制炎症因子NO、TNF-α和IL-1β产生,其抑制率分别为62%、11%和21%,而其它四种蛋白酶水解物没有显示明显的抗炎作用。将山杏仁木瓜蛋白酶水解物分离制备为5~10,3~5,1~3 kDa和小于1 kDa等不同分子量组分,进一步研究其抗炎活性,结果表明小于1 kDa低分子量组分具有较高抗炎活性,其对NO、TNF-α和IL-1β产生的抑制率分别为81%、59%和46%。分析氨基酸组成与含量结果表明,抗炎活性较强的小于1 kDa组分中,疏水性氨基酸和亲水性氨基酸含量均较高,同时谷氨酸、天冬氨酸和精氨酸等具有抗炎作用的氨基酸含量也较高。以上结果表明,山杏仁蛋白被木瓜蛋白酶水解后能够释放抗炎生物活性肽,该活性肽的分子量小于1 kDa,可能是具有两亲性的结构。     

圣草次苷的合成及其对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用

以橙皮苷为原料,经三氯化铝-吡啶去甲基反应合成药用天然产物圣草次苷,产物通过1H核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)和13C NMR进行结构确证,并探究其对过氧化氢(H2O2)诱导氧化应激损伤的人脐静脉内皮细胞系(human umbilical vein endothelial ce...     

不同形态硒与VE联用对H_2O_2诱导人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤的保护作用

目的:研究不同形态硒化合物(有机硒:L-硒甲基硒代半胱氨酸;无机硒:亚硒酸钠)单独使用及其与VE联合使用后对H_2O_2诱导人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)产生氧化应激损伤的保护作用。方法:采用体外细胞培养方法,将HUVECs随机分为7组:对照组、H_2O_2组、L-硒甲基硒代半胱氨酸(L-Se-methylselenocysteine,L-Se MSC)组、亚硒酸钠(sodium selenite,SS)组、VE组、L-Se MSC+VE联用组、SS+VE联用组。经不同样品干预处理后,采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测HUVECs存活率;检测各组细胞内脂质氧化终产物丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性的变化。结果:各处理组HUVECs存活率之间没有显著差异;与H_2O_2组比较,0.1 mg/L亚硒酸钠、10 mg/L VE处理能使HUVECs内MDA生成量显著减少,SOD和GSH-Px活性显著升高,并且亚硒酸钠和VE联合使用在细胞水平上具有显著的协同作用,而L-Se MSC组与对照组无显著差异。结论:亚硒酸钠和VE均可保护由H_2O_2诱导引起的HUVECs氧化损伤,提高HUVECs抗氧化能力,并且亚硒酸钠和VE联用具有明显的协同抗氧化作用。     

蜂胶乙醇提取物对小鼠主动脉内皮细胞损伤的保护作用

目的:探究蜂胶乙醇提取物（ethanol extracts of propolis,EEP）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的小鼠主动脉内皮细胞（mouse aortic endothelial cell,MAEC）炎症因子损伤的保护作用。方法:将细胞分为对照组,LPS模型组,蜂胶低（2.5 μg/mL）、中（5 μg/mL）、高（10 μg/mL）剂量组。采用CCK-8检测MAEC的细胞增殖率,ELISA酶联免疫吸附实验测定MAEC炎症细胞中TNF-α、IL-6的含量,Western Blot法测定MAEC炎症细胞中ICAM-1、VCAM-1、MCP-1的表达水平。结果:与对照组相比,LPS组MAEC的细胞增殖率极其显著降低（P<0.001）,ICAM-1、VCAM-1、MCP-1、TNF-α以及IL-6的水平极其显著升高（P<0.001）。经不同浓度EEP处理后,MAEC的细胞增殖率显著上升（P<0.05或P<0.01）,TNF-α、IL-6的含量以及ICAM-1、VCAM-1、MCP-1表达水平降低,各蜂胶组与LPS组相比均有显著性差异（P<0.01或P<0.001）。结论:EEP能够抑制LPS诱导的MAEC中炎症因子的表达,对血管内皮细胞具有保护作用。     

羊栖菜多酚通过核转录因子-κB/丝裂原活化蛋白激酶通路缓解脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症反应

目的：研究羊栖菜多酚对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7细胞炎症反应的影响。方法：噻唑蓝法测定细胞活力;Griess法测定一氧化氮（NO）水平;实时荧光定量聚合酶链式反应测定白细胞介素（interleukin,IL）-6、IL-1β、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）-α、环氧合酶2（cyclooxygenase-2,COX-2）和诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）的基因相对表达量;流式细胞术测定细胞吞噬能力;蛋白免疫印迹法测定信号通路丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases,MAPKs）和核转录因子（nuclear factor,NF）-κB信号通路关键蛋白表达水平。结果：羊栖菜多酚对RAW264.7细胞的安全质量浓度范围为0～160 μg/mL。与LPS组相比,羊栖菜多酚剂量依赖性降低巨噬细胞吞噬能力并抑制NO的生成。同时,羊栖菜多酚下调促炎细胞因子（IL-1β、IL-6、TNF-α）和炎症诱导酶（iNOS、COX-2）的mRNA水平,且作用效果与给药剂量及LPS刺激时间相关。这些炎性介质的表达与羊栖菜多酚抑制p38 MAPK和NF-κB p65的激活有关。结论：羊栖菜多酚可通过减弱p38 MAPK和NF-κB p65信号通路的激活水平,抑制下游炎症介质的转录表达,从而缓解LPS诱导的巨噬细胞炎症反应。     

大蒜素对脂多糖诱导腹腔巨噬细胞炎症反应的抑制作用及机制

目的:探讨大蒜素对脂多糖(LPS)诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应的抑制作用及机制。方法:建立LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应细胞模型,并用地塞米松和不同浓度大蒜素处理,MTT法检测细胞活力,中性红吞噬实验检测吞噬能力,Griess法检测一氧化氮(NO)及ELISA法检测COX-2酶活性和IL-6的分泌,qPCR检测环氧合酶2(COX-2)、一氧化氮合酶(iNOS)和IL-6的mRNA表达水平,Western Blot检测COX-2、iNOS和IL-6的蛋白表达以及核转录因子NF-κB p65及其磷酸化产物的相对表达。结果:大蒜素浓度在40~160 μg/mL范围内对腹腔巨噬细胞均无细胞毒性;与LPS组比较,大蒜素处理组能促进腹腔巨噬细胞的吞噬能力,能显著(P<0.05)抑制炎症因子COX-2酶活性、NO和IL-6的分泌,能显著(P<0.05)抑制基因COX-2、iNOS和IL-6 mRNA和蛋白的相对表达,并极显著(P<0.01)抑制NF-κB p65信号通路的磷酸化。结论:大蒜素能显著抑制LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞的炎症反应,其机制可能与抑制NF-κB信号通路激活有关。     

粗壮女贞水提物对氧化三甲胺诱导的血管内皮细胞炎症保护作用及机制

目的 探究粗壮女贞(Ligustrum robustum,LR)水提物对氧化三甲胺(trimethylamine N-oxide,TMAO)诱导的血管内皮细胞炎症反应的抑制作用及机制。方法 采用TMAO诱导EA.hy926细胞炎症反应,设置对照组、TMAO组(800μmol/L TMAO)、LR低、中、高剂量组(0.5、1.0、2.0 mg/m L)、香蜂草苷低、中、高剂量组(20、40、60μmol/L)和芦丁低、中、高剂量组(20、40、60μmol/L)。酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent sorbent assay,ELISA)测定各组细胞培养上清液中白细胞介素6 (interleukin-6,IL-6)、白细胞介素8(interleukin-8,IL-8)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、细胞间黏附分子(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的分泌量。实时荧光定量聚合酶链式反应(realtime fluorescence quantitative pol...     

黑果枸杞花色苷纳米颗粒的制备及其对氧化低密度脂蛋白诱导的人脐静脉融合细胞氧化损伤的保护作用

为了提高黑果枸杞花色苷的稳定性和活性,利用壳聚糖（chitosan,CS）与酪蛋白磷酸肽（casein phosphopeptide,CPP）复合凝胶体系制备CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒。所得最佳制备条件为：pH?4、室温条件下搅拌,2?mg/mL黑果枸杞花色苷溶液等体积添加到质量分数0.5%?CPP溶液中,然后添加等体积0.20～0.30?mg/mL?CS溶液至上述花色苷-CPP溶液中,由离子凝胶机制自发形成CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒。所得CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒粒径为215.3?nm,表面电势为36?mV,包封率为65.0%～72.2%;体外释放实验结果表明,在pH?7.0时该CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒的释放率为24.3%～64.2%。体外细胞实验结果表明,黑果枸杞花色苷质量浓度为100～200?μg/L的CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒能够显著提高氧化低密度脂蛋白诱导的氧化损伤人脐静脉融合EAhy926细胞的存活率（P＜0.05）。因此,CS-CPP复合凝胶体系能够包封黑果枸杞花色苷,其制备的CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒具有较好的体外抗氧化能力。