多孔壳聚糖微球固定化碱性蛋白酶的研究

采用自制的多孔壳聚糖微球固定化碱性蛋白酶,以酶活回收率为参考指标,分别对酶浓度、酶与栽体用量比、戊二醛浓度、吸附时间、交联时间、BSA浓度等进行了单因素试验,考察了其对碱性蛋白酶固定化的影响,确定了较好的固定化碱性蛋白酶的工艺条件.结果表明,碱性蛋白酶固定化的最佳工艺条件为:酶与栽体用量比315 U/g、酶浓度45 mg/mL、固定化温度4℃、固定化pH7.2、吸附时间48 h、交联时间8 h、戊二醛浓度为1%、BSA浓度4.5 mg/mL,此时RRA达到65.46%,固定化碱性蛋白酶也具有较好的理化性质.     

脱乙酰壳聚糖固定碱性蛋白酶的研究

以脱乙酰壳聚糖为载体，戊二醛为交联剂制备固定化碱性蛋白酶。研究了戊二醛的浓度、给酶量、固定化温度、时间、pH对固定碱性蛋白酶的影响。结果表明：碱性蛋白酶最佳固定化条件是戊二醛浓度为0．2％：给酶量11000U／g；pH为10；在温度为50℃交联时间12h。     

壳聚糖微球固定碱性蛋白酶的研究

利用乳化交联法制得壳聚糖微球并用于碱性蛋白酶的固定,借助正交试验设计优化酶固定化条件,结果表明：常温条件下,戊二醛浓度为1％,以给酶量240U／g载体加酶,在pH10缓冲液中,交联20h时,固定化碱性蛋白酶的活力和活力回收率可达到119U／g和49．6％;固定化碱性蛋白酶耐热性较游离碱性蛋白酶较强,4℃的半衰期可达14d。     

壳聚糖微球固定化蛋白酶的制备及其在羊毛织物抗起毛起球整理中的应用

以壳聚糖微球为载体、戊二醛为交联剂,制备纺织用固定化蛋白酶.考察固定化蛋白酶的最佳制备条件及其稳定性,并将其应用于毛织物抗起毛起球整理中.结果表明:戊二醛用量为1.0%,交联时间为5 h,反应温度30℃,每g载体固定20 mL酶(稀释后),制备的固定化蛋白酶的固载率为84.4%,酶活回收率可达57.2%.与游离蛋白酶相比,固定化蛋白酶的耐酸碱稳定性、耐热稳定性与储存稳定性均有所提高,且可循环使用.将制备的固定化蛋白酶用于羊毛织物的抗起毛起球整理中,其抗起毛起球等级提高1.5级.     

溶菌酶在羊毛织物上的固定化

以羊毛织物为载体,研究了戊二醛交联固定溶菌酶的工艺条件。结果表明,戊二醛交联工艺的最佳条件为：戊二醛0.2%,交联时间2 h。溶菌酶固定化的条件为：溶菌酶5 g/L,固定化时间6 h,固定化pH值7.0,固定化温度4℃。在此工艺条件下制得的固定化溶菌酶的操作稳定性较好,使用6次后相对酶活仍保持在30%左右。     

菠萝皮渣羧甲基纤维素/海藻酸钠复合水凝胶珠固定化菠萝蛋白酶的制备及稳定性研究

本实验以菠萝皮渣羧甲基纤维素、海藻酸钠为原料,制备了菠萝皮渣羧甲基纤维素/海藻酸钠复合水凝胶珠,用于固定化菠萝蛋白酶。采用单因素法分析菠萝皮渣羧甲基纤维素与海藻酸钠的质量比、氯化钙的浓度、菠萝蛋白酶浓度、戊二醛体积分数和交联时间对固定化酶活性的影响。结果表明,固定化酶的优化制备工艺为:菠萝皮渣羧甲基纤维素与海藻酸钠的质量比为2:3,氯化钙的浓度为1.0%,菠萝蛋白酶浓度为2.0 mg/mL,戊二醛体积分数为1.0%,交联时间为60 min。制备的固定化酶比游离酶具有更好的热稳定性,在80℃环境下放置2.0 h后,固定化酶的相对酶活性为35.1%,而游离菠萝蛋白酶在此条件下几乎失活;在pH为11条件下放置24 h后,游离酶的相对酶活性为43.2%,而固定化酶相对酶活性为85.1%,说明固定化酶比游离酶更耐受碱性环境。另外,固定化酶重复使用7次后,相对酶活性为60.5%,说明制备的固定化酶具有较好的重复使用性能。     

多孔壳聚糖固定酵母蛋白酶条件的优化及酶学性质分析

以多孔壳聚糖微球固定酵母蛋白酶,通过对戊二醛含量、吸附时间、固定化温度、pH进行了单因素试验及正交试验,以蛋白酶酶活回收率为评价指标,确定的固定化条件为戊二醛含量1.4%,吸附温度27 ℃,pH值为10,吸附时间24 h。在此最佳条件下,固定化酵母蛋白酶酶活回收率为68.8%。酶学性质分析结果表明,固定化酶最佳反应温度较游离酶升高10 ℃,最佳作用pH较游离酶向碱性方向偏移1个pH单位。因此,用多孔壳聚糖对酵母蛋白酶进行包埋可以提高蛋白酶活性。     

固定化碱性蛋白酶制备麦胚降血压肽研究

采用中空壳聚糖作为载体,通过双功能试剂戊二醛作偶联剂,将碱性蛋白酶连接到中空壳聚糖,制备固定化碱性蛋白酶。研究固定化碱性蛋白酶的部分性质及水解麦胚蛋白质条件。实验结果显示,1.5% 戊二醛溶液活化的壳聚糖偶联1mg 碱性蛋白酶,酶催化相对活性可达90%;固定化酶最适pH 值为9.5,最适反应温度约65℃,催化水解麦胚蛋白质的水解率达16.5% 约需10min;固定化酶与麦胚蛋白质的比达到1:5 时,一次性获取含降血压肽水解物质的得率为15.6%。     

壳聚糖固定瑞士乳杆菌蛋白酶的条件研究

以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂,采用交联-吸附法对瑞士乳杆菌蛋白酶的固定化条件进行研究。在单因素试验基础上,以固定化酶活力为主要指标,研究凝结液、壳聚糖质量浓度、酶用量、交联时间、戊二醛质量浓度对瑞士乳杆菌蛋白酶固定化的影响。运用响应面对固定化条件进行优化,确定瑞士乳杆菌蛋白酶的最优固定条件：凝结液为4g/100mL NaOH-甲醇(体积比3:1)、壳聚糖质量浓度2.89g/100mL、酶用量2.95mg、交联时间1h、戊二醛质量浓度0.40g/100mL,此时固定化酶活力为28.67U。     

磁性壳聚糖微球固定化脂肪酶研究

以磁性壳聚糖微球为载体,通过戊二醛交联进行脂肪酶固定化,对影响脂肪酶固定化各种因素进行考察,确定最佳条件,并比较游离酶与固定化酶pH和热稳定性。结果表明,固定化适宜条件为:脂肪酶加入量5.0 mg/100 mg载体、温度40℃、时间5 h、pH 8.04、戊二醛浓度10%、最高固载率可达90.56%,酶活4034 U/g载体;与游离酶相比,固定化酶pH和热稳定性都有较宽适用范围。     

D-塔格糖3-差向异构酶的固定化研究

从14种离子交换树脂和吸附树脂中,筛选出固定化效果较好的大孔弱碱性苯乙烯系阴离子交换树脂D301-Ⅲ为载体,以戊二醛为交联剂,通过先吸附后交联的方法对D-塔格糖3-差向异构酶的固定化进行研究。结果表明,最佳固定化条件为：加酶量为2.00mL/g（粗酶液/树脂）,吸附pH7.5,吸附时间为8h,吸附温度为30℃,戊二醛浓度为0.05%,交联时间为3h,固定化酶活回收率可达50%以上。固定化酶重复使用10次,酶活仍能稳定保持在初始酶活的65%以上,具有良好的操作稳定性。     

阴离子交换树脂固定化果糖基转移酶的研究

从13种离子交换树脂和吸附树脂中,筛选出固定化效果较好的大孔弱碱性苯乙烯系阴离子交换树脂D380为载体,以戊二醛为交联剂,通过先吸附后交联的方法对果糖基转移酶的固定化进行分析,并对固定化条件进行了优化。结果表明,最佳固定化条件为:加酶量为200U/g树脂,吸附pH为6.0,吸附时间为6h,吸附温度为30℃,交联剂戊二醛浓度为0.01%,交联时间为6h,交联温度为4℃,固定化酶活回收率最高可达87.6%以上。     

脯氨酰内肽酶的固定化研究

以D380为载体进行脯氨酰内肽酶的固定化研究,确定了其最佳固定化条件为加酶量为140U/g,戊二醛浓度为0.3%,固定化温度为25℃,吸附14h,交联6h。固定化酶活达到89.5U/g,酶活回收率63.9%。固定化酶最适反应温度为40℃,最适反应pH值为5.5。     

表面脱乙酰化甲壳素颗粒固定溶菌酶及酶学性质研究

本研究以表面脱乙酰化甲壳素颗粒为载体,以戊二醛为交联剂,对溶菌酶进行固定化。本文利用正交试验设计,以蛋白利用率、活力回收率和保藏稳定性为指标,以半脱乙酰壳聚糖为底物,3-甲基-2-苯丙噻唑啉酮腙(MBTH)法为酶活力测定方法,优化了关键固定化参数,并考察了固定化对溶菌酶酶学性质的影响。结果表明:固定化过程中最佳脱乙酰时间(A)为25 min,戊二醛浓度(B)为5%,载体活化pH(C)为5.0,在此条件下固定化的溶菌酶与游离溶菌酶相比,其表观最适pH由4.0降至3.5;最适温度由75 ℃升高至80 ℃,且在70~90 ℃仍保持95%活力;K_m为2.69 mg/mL,明显大于游离酶的1.75 mg/mL;15 d稳定性保持66%。因此,固定化提高了溶菌酶的热稳定性和贮藏稳定性,具有广泛的应用前景。     

Preparation and Properties of Rhizopus oryzae Lipase Immobilized Using an Adsorption-Crosslinking Method

The aim was to develop an enzyme immobilization method for Rhizopus oryzae lipase to improve its acidolysis activity and stability. Lipase was adsorbed into NKA-9 resin and then crosslinked with glutaraldehyde as a crosslinker. The optimum conditions obtained using the response surface methodology were as follows: 34.6 mg lipase/100 mg support, 4.1 h of adsorption time, 45°C, pH 6.8, 0.5% glutaraldehyde concentration, and 2.5 h of crosslinking time. The acidolysis activity of the immobilized lipase was 31.78%, the free lipase activity was only 11.02%. The immobilized lipase showed better performance, such as higher acidolysis activity, better pH tolerance and temperature stability, enhanced storage stability, and improved reusability.     

壳聚糖微球固定化胰蛋白酶的研究

以壳聚糖为载体,将胰蛋白酶固定化,通过优化其制备条件提高活力回收。首先利用反相悬浮交联法制得壳聚糖微球并用于胰蛋白酶的固定,后采用中心复合设计及响应面分析法优化固定化条件,结果表明,戊二醛体积分数为16.2%,分散时间为98 min,给酶量1 mg/g载体时,固定化胰蛋白酶的活力和活力回收率可达到42.02 u/g和73.32%。     

核-壳型松香基磁性聚合物固定化脂肪酶的制备及性能

以甲基丙烯酸和丙烯酸为单体,马来松香乙二醇丙烯酸酯为交联剂,采用共沉淀法及悬浮聚合法制备出具有磁性的核-壳结构的球状聚合物（Fe3O4@RAM）。以之为载体,用化学交联法固定脂肪酶。在50%的戊二醛用量为1.5%,交联时间4 h,酶与载体的质量比为2∶1的条件下,制得的固定化酶的酶活回收率达到86.17%。固定化酶的热稳定性、储存稳定性及操作稳定性均有所提高。重复使用7批次,酶活仍高于73.52%。     

聚乙烯醇环氧化载体制备及在植酸酶固定化中的应用

该文以聚乙烯醇为原料,利用戊二醛为交联剂,聚合得到交联球形聚乙烯醇,并将其与环氧氯丙烷反应用以固载环氧基团,得到可用于酶固定化的载体。讨论了交联聚乙烯醇球环氧基的固载条件和酶的固定化条件。植酸酶经过固定化后,机械性能和化学稳定性都得到提高,可以重复多次对植酸钠进行水解反应。同时对该自由酶和固定化酶进行酶学特性研究。发现自由酶和固定化酶的最适pH值分别为5.5和7.0,最适反应温度分别为55℃和70℃。植酸酶经固定化,提高了酶的操作、温度、pH值和贮藏稳定性。     

多酚氧化酶的固定化及其酶学性质研究

游离多酚氧化酶在使用过程中容易流失,无法重复利用。文章主要研究了低成本、高效率的两种固定化方法:海藻酸钠包埋法和戊二醛交联法,确定了其最优固定化条件,分别为海藻酸钠包埋法:2.5%CaCl2,2.5%海藻酸钠,固定化时间2h;戊二醛交联法:1.25%戊二醛,振荡固定pH 4.5,酶与载体质量比75(mg/g),固定化反应时间6.5h。同时对游离多酚氧化酶及固定化多酚氧化酶的酶学性质进行了研究。结果表明:游离酶、海藻酸钠包埋法固定多酚氧化酶(polyphenol oxidase immobilized by sodium alginate,A-PPO)和戊二醛交联法固定多酚氧化酶(polyphenol oxidase immobilized by glutaraldehyde crosslinking,C-PPO)的比活力分别为864,490,371U/mg,A-PPO和C-PPO的酶活回收率分别为18.6%和24.0%。同时,固定化酶在pH稳定性、热稳定性上优于游离酶,戊二醛交联法固定酶的效果优于海藻酸钠包埋法。