新疆伊犁地区马脑组织尼帕病毒的感染情况

目的采用一步法荧光定量RT-PCR检测新疆伊犁地区天然牧场放养马群脑组织尼帕病毒(NipahVirus,NiV)核蛋白N基因的表达,调查该地区马群中枢神经系统NiV感染的流行状况。方法针对NiV高度保守区N基因设计特异性引物和探针,建立检测马脑组织样本中低浓度NiV RNA的一步法荧光定量RT-PCR方法,对该方法的敏感性及特异性进行验证,并对新疆伊犁地区天然牧场放养且未接种NiV疫苗的183匹马脑组织进行检测。结果一步法荧光定量RT-PCR的最低检出限为1.1×102 copies/μl;与NiV同为亨尼帕病毒属,且高度同源的亨德拉病毒(Hendra Virus,HeV)及同为单股负链的博尔纳病病毒(Borna Disease Virus,BDV)均无交叉反应;183份马脑组织样本未检出阳性样本。结论新疆伊犁地区天然牧场放养马匹中未发现NiV感染,该地区短时间内爆发NiV的可能性较小。     

猪瘟病毒感染猪细胞因子和趋化因子的动态变化

目的分析猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)感染猪细胞因子和趋化因子的动态变化。方法将健康猪随机分成2组:感染组和对照组,感染组经颈部肌肉注射CSFV石门株1×103TCID50/头,对照组注射等体积的生理盐水。感染后每日观察实验猪的临床症状。分别于感染前和感染后4、6、8d采血,分离外周血白细胞和血清,应用实时荧光定量RT-PCR检测外周血白细胞IL-1、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IFNγ、TNF-α和干扰素诱导蛋白10(Interferon inducible protein10,IP-10)mRNA的转录水平及全血中的病毒载量;应用ELISA法检测血清中各细胞因子的含量。结果 CSFV感染后,猪的临床症状分值逐渐升高,体温在第3天达最高,然后下降;白细胞总体呈明显下降趋势;细胞因子IL-1、IL-4、IL-6、TNF-α和IP-10的mRNA转录水平上调,IL-10的mRNA转录水平下调,IFNγ的mRNA转录水平基本未发生变化;CSFV感染猪在感染初期和症状明显期(4d和6d)的外周血的病毒载量呈明显上升趋势,而在濒死期(8d)病毒载量有所下降;CSFV感染后猪血清中的TNF-α含量上升,IL-4、IL-6、IL-8、IL-10和IFNγ的含量下降。结论猪瘟病毒感染猪TNF-α和IL-10 mRNA的转录水平与血清中的细胞因子含量变化趋势一致,而其他细胞因子mRNA的转录水平与血清中含量变化并不一致。     

H5N1禽流感病毒感染豚鼠体内线粒体抗病毒信号蛋白SYBR GreenⅠ相对荧光定量PCR检测方法的建立及应用

目的建立H5N1禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)感染豚鼠体内线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)SYBR GreenⅠ相对荧光定量PCR检测方法,并检测H5N1 AIV感染前、后豚鼠肺脏组织中MAVS的表达水平。方法提取豚鼠肺脏组织RNA,反转录合成cDNA,将cDNA模板按10倍系列稀释为9个浓度(1.00 E+10~1.00 E+02 copies/μl),进行PCR扩增。以β-actin为内参,建立标准曲线,比较两基因的扩增效率,验证该方法的引物特异性、重复性及灵敏度。同时用该方法检测H5N1 AIV攻毒前、后豚鼠肺脏组织中MAVS的表达水平。结果 c DNA模板最佳稀释度范围为1.00 E+09~1.00 E+04。豚鼠MAVS和β-actin基因的标准曲线斜率差值0.1,R~2=0.999,扩增效率分别为100.2%和100.3%;两基因扩增溶解曲线峰单一,可扩增出清晰的目的条带,且无非特异性扩增;两基因Ct值的变异系数(CV)均10%;灵敏度为1.00 E+03 copies/μl。感染H5N1 AIV的豚鼠肺脏组织中MAVS的表达水平下调。结论成功建立了H5N1 AIV感染豚鼠体内MAVS的SYBR GreenⅠ相对荧光定量PCR检测方法,并发现H5N1 AIV感染可导致豚鼠体内MAVS表达水平下调。     

反硝化深床滤柱深度脱氮效果及反硝化功能基因分析

采用石英砂、活性炭双层滤料反硝化深床滤柱处理城镇污水处理厂二沉池出水中硝酸盐氮（NO₃^--N）,研究了深床滤柱反硝化脱氮性能以及主要反硝化功能基因对进水碳氮比（化学需氧量/总氮,即COD/TN,简称C/N）的响应。结果表明,NO₃^--N平均转化率随着C/N升高,由46.5%升高至90.0%,化学需氧量（COD）平均去除率由97.2%降至76.5%。低碳氮比（C/N<6）条件下,出水亚硝酸盐氮（NO₂^--N）出现明显的积累,在C/N=4.2时,积累率达41.5%,在高碳氮比（C/N ≥ 6）条件下,NO₂^--N积累量逐渐减少,直至出水无NO₂^--N。研究表明,反硝化深床滤柱对污染物的转化主要发生在前35cm滤料深度,COD去除率和NO₃^--N转化率分别为94.0%、81.2%。采用荧光实时定量PCR技术在C/N分别为4.2、6和7条件下,对深床滤柱中反硝化功能基因napA、narG、nirK、nirS和nosZ数量进行分析,结果表明,随着C/N升高,各反硝化功能基因拷贝数也随之升高,说明增加碳源投加量可以为反硝化细菌提供更好的生长环境,有利于其生长繁殖,促进反硝化过程的进行;当narG基因拷贝数大于（nirS+nirK）基因拷贝数时,NO₂^--N会产生积累。