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目的:建立基于实时荧光PCR技术的奶制品中掺入大米源性成分的快速检测方法。方法:以水稻的根部表达基因(gos9)为靶基因设计特异性引物和探针,经特异性实验和灵敏度实验验证引物探针可行性,并经模拟含大米奶粉及市售奶类制品检测验证其实际检测能力。结果:该引物探针体系只针对大米DNA进行扩增,与奶类主成分牛、羊及其它谷类和植物性食物DNA均无交叉扩增;最低能检测到0.1ng的大米DNA,对含大米粉的模拟混合奶粉样品,检出限可达0.1%(W/W)。将其应用于21份市售奶制品样品检测,对含大米源性成分的奶制品扩增阳性,检测结果与食品标签相符。结论:该实时荧光PCR检测体系具有快速、特异、灵敏的优点,可以准确鉴定出奶制品中大米成分,适用于奶类中掺加大米源性成分的检测。 相似文献
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目的:建立基于实时荧光PCR技术的奶制品中掺入大米源性成分的快速检测方法。方法:以水稻的根部表达基因(gos9)为靶基因设计特异性引物和探针,经特异性实验和灵敏度实验验证引物探针可行性,并经模拟含大米奶粉及市售奶类制品检测验证其实际检测能力。结果:该引物探针体系只针对大米DNA进行扩增,与奶类主成分牛、羊及其它谷类和植物性食物DNA均无交叉扩增;最低能检测到0.1ng的大米DNA,对含大米粉的模拟混合奶粉样品,检出限可达0.1%(W/W)。将其应用于21份市售奶制品样品检测,对含大米源性成分的奶制品扩增阳性,检测结果与食品标签相符。结论:该实时荧光PCR检测体系具有快速、特异、灵敏的优点,可以准确鉴定出奶制品中大米成分,适用于奶类中掺加大米源性成分的检测。 相似文献
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目的S建立一个高特异性和高灵敏度的有效检测猪源性成分的检测方法。方法S以猪雌激素受体基因设计合成一对特异性引物,采用液氮研磨结合试剂盒抽提的方法提取猪肉中的DNA,分别以300S,30S,3S,0.3S和0.03Sng为模板量进行梯度反应,基于荧光定量PCR技术(SYBR法)建立检测方法。结果S以Ct值作为纵坐标,以lgXS(X为DNA的量,ng)的值作为横坐标,得到标准曲线方法Ct=30.473-3.542lgX,SR2=0.9997;该方法的检测灵敏度达到2 Spg。结论S该猪源性成分检测方法简单快捷,特异性和重复性好,灵敏度高,可作为市场监督和检测鉴定的可行性方法。 相似文献
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建立Taqman探针实时荧光PCR检测方法。选择牛、羊线粒体16SrRNA靶序列,设计合成引物和探针,鉴别羊乳制品中的羊乳成分。结果表明,该方法最低可检测掺入2.0%牛源性成分的羊奶制品,具有灵敏、快速、高效以及高通量等优势,可作为羊奶制品羊乳成分掺假鉴别手段之一。 相似文献
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为准确定量肉制品中羊源性成分的含量,以羊单拷贝基因为扩增靶基因,设计合成羊源的引物、探针,制备羊源和脊椎动物通用基因的重组质粒以构建标准曲线,通过方程算出各自的拷贝数,根据拷贝数的比值计算样品中羊肉源成分占总肉成分的百分比含量,建立荧光定量PCR检测体系,并对已知目标肉含量的混合肉样进行定量检测。结果显示,该方法具有良好的特异性和灵敏度,最低检测到羊的DNA含量为0.02 ng/μL。对已知目标肉含量的混合肉样进行定量检测发现,羊肉掺入量为90%、50%时所得结果相对准确,相对标准偏差分别为5.69%和10.82%, 且不受外源物种的干扰。本试验建立的定量PCR方法能够准确检测出不同样品中羊肉的含量,并发现存在掺假现象。 相似文献
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目的探讨SN/T3730.4-2013《食品及饲料中常见畜类品种的鉴定方法第四部分:驴成分检测实时荧光PCR法》标准中检出限规定的合理性。方法参考SN/T 3730.4-2013提供的引物及探针序列,采用实时荧光PCR检测方法鉴别市场抽检驴肉的真伪性。结果 Ct值在25~35之间的样品按照SN/T 3730.4-2013标准规定应判为检出驴成分,但通过对上述样品用马源性引物进行扩增和测序得知样品为马肉而非驴肉。结论建议标准应根据不同的检验对象制定不同的检出限,从而降低出现假阳性的概率。 相似文献
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针对鲨鱼产品掺杂造假增多而缺乏有效鉴定技术的情况,作者根据Gen Bank中鲨鱼基因的线粒体DNA(mt DNA)序列,使用分子生物学软件Primer Express 2.0设计了一套特异性引物和探针,用来建立Taqman探针荧光PCR检测鲨鱼源性成分的方法。结果表明,对13份已鉴定为鲨鱼鱼翅的样品进行检测,全部出现特异性扩增曲线,阴性对照没有荧光增长。方法特异性强,对市场购买的12份鲨鱼源性样品及9份其他鱼类样品进行检测,12份鲨鱼样品均出现荧光扩增曲线,而非鲨鱼样品均未出现荧光增长;方法灵敏度较高,可检测到的最低质粒拷贝数量级为10拷贝/μL;方法快速准确,操作简便,重复性好,稳定可靠,可应用于市场上鱼翅等常见鲨鱼源性产品的真假鉴定。 相似文献
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目的 建立一种PCR法检测肉制品中鹅源性成分的方法。方法 根据鹅的线粒体DNA(mtDNA)序列设计引物, 以9种动物的DNA为模板, 利用新设计的鹅的特异性引物进行PCR反应, 并用琼脂糖凝胶电泳检测引物的特异性和敏感性。结果 通过PCR反应, 仅鹅的DNA扩增得到了194 bp的目的片段, 其余物种DNA和空白对照均无目的片段。扩增产物的核苷酸序列与GENBANK中检索到的相应序列基本相符合。 结论 该方法特异性强、灵敏度高, 适合检测肉制品中的鹅源性成分。 相似文献
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陈果 《食品安全质量检测学报》2019,10(11):3339-3342
目的建立实时荧光PCR检测鸭血中鸭、猪、牛等动物源性成分的方法。方法对重庆市火锅店销售的鸭血进行采样检测。提取鸭血样品DNA,进行实时荧光PCR检测,确定循环阈值,分析样品中鸭、猪、牛源性成分。结果 DNA提取液OD_(260 nm)/OD_(280 nm)值为1.8~2.0,纯度较高; 8个市售鸭血样品中2个样品只检出猪源性成分, 1个样品同时检出鸭源性成分和猪源性成分,研究发现所采集的鸭血存在猪血掺假的可能。结论该方法快捷、可操作性强,适用于鸭血中动物源性成分的测定。 相似文献
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肉制品中鸭源性成分的实时荧光PCR检测 总被引:6,自引:0,他引:6
目的:建立基于实时荧光PCR技术的鸭源性成分的快速检测方法。方法:以鸭线粒体DNA序列为目的基因,设计并筛选了鸭源性特异性引物及探针,进行荧光定量PCR扩增,建立鸭源性成分检测方法。通过特异性、灵敏性、及盲样检测试验,对该体系进行验证。结果:该方法能够快速有效的检测鸭源性成分,具有较强的特异性及灵敏性,灵敏度约为0.01%(质量分数);通过市售盲样肉制品的检测,表明该体系可用于定性检测加工肉制品中的鸭源性成分。结论:该方法特异性强,灵敏度高,可用于对肉制品中鸭源性成分的掺假鉴别。 相似文献
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Validation of a fast real-time PCR method to detect fraud and mislabeling in milk and dairy products
M. Di Domenico M. Di Giuseppe J.D. Wicochea Rodríguez C. Cammà 《Journal of dairy science》2017,100(1):106-112
Fast real-time PCR TaqMan assays were developed and validated for species identification in dairy products. Based on the amplification of 12S rRNA and cytB partial genes of mitochondrial DNA, the methods were demonstrated to be sensitive, fast, and species-specific for Bos taurus, Ovis aries, Bubalus bubalis, and Capra hircus. The limit of detection calculated was lower than 1%, and the efficiency was reported to be higher than 96% in every assay. An internal amplification control was used to detect possible false negatives. The method was validated by means of laboratory-prepared samples mixing different species. Moreover, 18 commercial dairy samples were analyzed by both real-time PCR and isoelectric focusing, the official European Union reference method. The 4 TaqMan assays were confirmed to be a useful tool for milk and dairy product authentication. 相似文献
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C J PARKINSON 《International Journal of Dairy Technology》1984,37(4):125-127
The potential uses for dairy ingredients in baked products are outlined. Initially domestic uses are mentioned followed by uses for specific dairy components in the bakery industry, and finally uses for commercial dairy ingredients in baked products. 相似文献