金黄色葡萄球菌中毒休克综合征毒素1基因的检测

目的检测编码金黄色葡萄球菌中毒休克综合征毒素l(TSST-1)的tst基因,了解该基因的携带情况。方法用PCR法对产毒素金黄色葡萄球菌染色体上编码TSST-1的tst基因进行体外扩增,并对临床分离的84株金黄色葡萄球菌进行tst基因检测及序列分析。结果对tst基因进行了检测及测序,84株受检的金黄色葡萄球菌中,tst基因阳性株占19.05%(16/84),测序结果与GenBank公布的金黄色葡萄球菌产TSST-1基因的同源性较高。结论用PCR法检测tst基因,具有良好的重复性、特异性和敏感性。tst基因阳性株在临床分离的金黄色葡萄球菌中占有较高的比例。     

双重荧光定量PCR技术在药品微生物检验中的应用

目的建立快速检测金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的双重荧光定量PCR方法并在药品微生物检测中应用。方法通过设计特异性引物和探针,扩增金黄色葡萄球菌的femB基因和铜绿假单胞菌的DNA gyrase subunit B基因,建立荧光定量PCR方法。将该方法应用于30批次药品微生物检测。结果建立同时检测金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的双重荧光定量PCR方法,从DNA提取到检测完毕仅需2 h。检测灵敏度为50 copies/μL,特异性为100%。30批次样品检验结果表明该方法与传统细菌培养方法结果一致。结论该法缩短了检测时间,具有良好的灵敏性和特异性,在药品微生物检验中有很好的应用前景。     

保健食品中3种病原菌多重PCR快速检测方法的建立及验证

目的建立快速检测保健食品中沙门菌、志贺菌和金黄色葡萄球菌的多重PCR(multiplex PCR,m PCR)方法,并进行验证及初步应用。方法以提取的各菌株基因组DNA为模板,利用Gen Bank中登录的沙门菌inv A、志贺菌ipa H、金黄色葡萄球菌nuc基因序列设计引物,采用优化后的反应体系及确定的反应条件进行PCR扩增,扩增产物经3%琼脂糖凝胶电泳鉴定,对建立的方法进行特异性、敏感性、重复性验证。将沙门菌、志贺菌和金黄色葡萄球菌等量混合后,进行10倍系列稀释,加至10批无病原菌蛋白质粉和10批无病原菌减肥茶样品匀浆中,用建立的方法进行PCR扩增,并与GB常规生化检测结果进行比较。结果确定m PCR反应体系为:10×PCR buffer 2.0μl,d NTPs 2.5μl,Taq DNA酶0.6μl,上下游引物各1.5μl,Mg2+1.0μl,补加dd H2O至25μl。10株细菌中,沙门菌、2株志贺菌、金黄色葡萄球菌扩增结果为阳性,其他菌株为阴性,inv A、ipa H、nuc基因扩增片段与Gen Bank登录的序列同源性分别为99%、99%和100%;沙门菌、志贺菌和金黄色葡萄球菌菌株均能在101~105 CFU/ml浓度时扩增出特异性目的条带;5个浓度混合菌液扩增产物均可见特异性反应条带。该方法扩增出10批人工添加细菌蛋白质粉和10批人工添加细菌减肥茶中沙门菌、志贺菌和金黄色葡萄球菌的特异性基因片段,检出限均为102 CFU/ml,与GB常规生化检测结果一致。结论建立的保健食品中沙门菌、志贺菌和金黄色葡萄球菌m PCR检测方法特异性强,灵敏度高,重复性好,可满足不同检验机构快速、准确检测保健食品中多种病原微生物样品的实际需要。     

丁香酚对金黄色葡萄球菌全基因组转录水平的影响研究

通过分析亚抑制浓度的丁香酚对金黄色葡萄球菌全基因组表达谱的影响,研究了丁香酚的抗菌作用机制.用丁香酚(250 μg穖L-1)处理金黄色葡萄球菌ATCC25923细胞45 min后,应用Affymetrix金黄色葡萄球菌基因芯片检测全基因组表达谱的变化.共有338个基因受到诱导,440个基因受到抑制,其中包括100个转运子基因、45个与蛋白质合成有关的基因和32个毒力基因.丁香酚还抑制了大多数与细胞壁有关的基因和编码sortase酶的基因SA0982 (srtB)以及Isd基因.结果表明,丁香酚是通过同时调节多途径相关基因表达,尤其是调节与转运、信号途径和毒力相关的基因表达来实现抗菌作用.     

毕赤酵母组成型表达载体的构建及报告蛋白表达评价

目的构建毕赤酵母(Pichia pastoris)组成型分泌表达载体,并表达报告蛋白葡萄球菌核酸酶(staphylococcus nuclease,SNase,NucA),以评价其表达外源蛋白的能力。方法从巴斯德毕赤酵母GS115基因组中PCR扩增毕赤酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase promoter,pGAP)片段,克隆至载体pPIC9K中,构建组成型分泌表达载体pGHKα;从金黄色葡萄球菌基因组中PCR扩增编码报告蛋白金黄色葡萄球菌NucA成熟肽的序列nucA,克隆至载体pGHKα中,构建重组表达质粒pGHKα-nucA,经SacⅠ和BglⅡ依次酶切线性化后,电转化至毕赤酵母GS115中;PCR及TB-D平板法筛选阳性重组酵母菌;Tricine-SDS-PAGE检测表达产物;琼脂扩散法检测重组酵母菌表达上清液的核酸酶活性。结果组成型分泌表达载体pGHKα经PCR鉴定,证明构建正确;重组表达质粒pGHKα-nucA经PCR及测序鉴定,证明nucA基因片段正确插入载体pGHKα中;重组酵母菌GS115/pGHKα-nucA经PCR及TB-D平板法检测证明构建成功;表达的目的蛋白相对分子质量约为17 000,表达量约占上清总蛋白的42%,且具有显著的核酸酶活性。结论成功构建了毕赤酵母组成型分泌表达载体pGHKα,其能正确表达报告蛋白NucA,且表达的蛋白能分泌到细胞外,表达效率高,为异源蛋白在毕赤酵母中的安全高效表达奠定了基础。     

评估CHROMagar金黄色葡萄球菌显色培养基在化妆品检验中的应用效果

目的评估CHROMagar Staph.aureus（CSA）金葡菌显色平板和血琼脂平板（BA）用于化妆品金黄色葡萄球菌的检测效果。方法使用47株珠菌菌株在CSA和BA上作典型菌落生长测试和比较CSA和血浆凝固酶反应在鉴定金黄色葡萄球菌中的敏感性和特异性。应用CSA和BA分别检测58件不同类型的化妆品样品。结果CSA和BA对所有金黄色葡萄球菌的菌株均为单一的特征性菌落生长，也有少数凝固酶阴性葡萄球菌表现有假阳性菌落特征；CSA和血浆凝固酶鉴定金黄色葡萄球菌的敏感性和特异性均为100%；CSA和BA在样品中分别检测出7株和1株金黄色葡萄球菌（x^2=4.83,P〈0.05），总阳性率为12.07%。结论CSA在分离实际样品过程中的筛选效率和敏感性均高于BA，且节省了鉴定菌株所用的时间和费用，建议将CSA作为检测、鉴定化妆品中金黄色葡萄球菌的常规培养基应用。     

细胞培养液中细菌、真菌多重荧光定量PCR检测方法的建立及验证

目的 建立细胞培养液中常见细菌和真菌的多重荧光定量PCR检测方法,并进行验证。方法 选取金黄色葡萄球菌NUC基因、生孢梭菌COLA基因和白色念珠菌ITS-2区段基因,分别设计1组引物及探针,并以辣椒UBI3基因作为外标基因,建立金黄色葡萄球菌、生孢梭菌和外标基因的三重反应体系及白色念珠菌和外标基因的两重反应体系。验证方法的引物特异性、线性范围、检测限、专属性、抗干扰性和精密性。采用建立的方法对100份293T细胞培养液样本进行检测,同时与普通PCR法进行比较。结果 3对引物于不同退火温度(56、57、58、59℃)下均可扩增出对应3种菌约100 bp的特异性基因条带,大小与预期相符;3种菌标准品质粒在5.80×10⁶～5.80×10²copies/μL范围内,与Ct均呈良好的线性关系,标准曲线方程分别为：Y=-3.373 X+37.48、Y=-3.557X+36.59、Y=-3.536 X+39.78,R²均> 0.99,扩增效率均在90%～110%范围内;3种菌的检测限均为10¹CFU/mL...     

金黄色葡萄球菌印迹聚α-甲基丙烯酸的合成

在金黄色葡萄球菌模板的存在下。以单体α-甲基丙烯酸和交联剂N，N＇-亚甲基双丙烯酰胺进行共聚合形成一种交联聚合物。模板洗除后，聚合物表面印迹出与金黄色葡萄球菌在形状和静电上互补的凹洞，这种聚合物能够识别金黄色葡萄球菌，并在一定程度上选择性地与之结合。     

幼儿园毛巾金黄色葡萄球菌污染状况及分析

目的了解幼儿园毛巾金黄色葡萄球菌污染状况,进一步了解其消毒质量,为卫生监督管理提供依据。方法用细菌分离、培养、鉴定的方法对毛巾做金黄色葡萄球菌检测。结果从我市17家幼儿园34份毛巾中检出2株金黄色葡萄球菌,2株金黄色葡萄球菌均从同一家幼儿园的2份毛巾中检出。结论多数幼儿园的毛巾消毒质量是合格的,仅一家幼儿园毛巾被金黄色葡萄球菌污染,其消毒质量不容乐观,相关部门应加强对幼儿园的消毒指导和管理。     

金黄色葡萄球菌噬菌体扩增方法的建立

目的建立金黄色葡萄球菌噬菌体扩增方法。方法通过比较培养体系中宿主菌浓度、噬菌体效价、培养时间及氯化钙对金黄色葡萄球菌噬菌体扩增的影响,确定最佳噬菌体扩增条件。结果经优化后,扩增培养体系中金黄色葡萄球菌宿主菌浓度为1×10~7个/mL,噬菌体效价为1×10~3 PFU/mL,扩增培养6~8 h,噬菌体效价达较高水平,氯化钙对噬菌体扩增无影响。结论建立了金黄色葡萄球菌噬菌体扩增方法,为金黄色葡萄球菌噬菌体治疗制剂的研制奠定了基础。     

化妆品中动物源性成分多重实时荧光PCR检测方法的研究

使用优化的Chelex-100结合玻璃奶法提取膏状、液态和固态化妆品中的动物源性DNA;根据驴、马和牛线粒体16S rRNA基因序列设计通用引物和特异性探针,建立了一次性检测化妆品中驴、马和牛3种动物源性成分的多重实时荧光PCR体系,检出限均为0.001 ng。并对市售的面霜、洗面奶和面膜进行盲样检测,验证了体系的可靠性和准确性。     

进口彩妆化妆品中锑的检测和风险评估

锑有一定的毒性和致癌性,可能通过化妆品危害人体,在化妆品中禁止添加。建立了彩妆化妆品中锑的测定方法,方法检测限达到0．5mg／kg。使用该方法对100多个进口彩妆化妆品中锑含量进行了检测。在国内外资料基础上,对结果进行了风险评估,提出了化妆品中锑的限量值,并得出了进口化妆品锑含量基本安全的结论。     

采用快速蒸发电离质谱技术对化妆品开展质量溯源

随着社会经济的不断进步和物质生活的丰富,化妆品的使用已经越来越普遍。在经济利益驱动下,市场上假冒伪劣化妆品的情况日益严重,但是现行质量溯源主要是通过信息溯源进行,所以建立一种高精度、快速便捷的化妆品质量溯源技术方法是十分必要的。本文采用快速蒸发电离质谱技术（REIMS）对正品化妆品及市售样品进行检测,采用Live ID软件,分别对正、负离子模式下的液状样品和乳状样品进行聚类分析,构建PCA-LDA模型,查找可疑的伪品。随后,应用正品化妆品样品构建判别模型,并对市售样品进行鉴定,确定伪造化妆品。使用Progenesis QI软件对真伪化妆品进行差异因子分析并鉴定,确定主要质量溯源靶标因子,为将来化妆品真伪快速检测技术标准化及特征靶标物种定量检测奠定基础。     

蛋白质在化妆品中的应用

主要阐述了不同种类蛋白质的结构、特性及其在化妆品行业中的功能，使在开发不同功能的化妆品上，不同种类蛋白质的使用有较明确的指引。蛋白质是一类最重要的生物大分子，其在生物体内占有特殊地位，充分利用生物活性成分已成为化妆品和个人护理行业的发展趋势，在自然状态下发挥生物活性成分对身体具有生长、保养和呵护的作用。     

羟基化大豆磷脂在乳化类化妆品中的应用研究

对羟基化大豆磷脂在乳化类化妆品中的应用进行了研究，探讨了羟基化大豆磷脂对制品理化性能的影响，结果表明羟基化大豆磷脂具有良好的配伍性能，对制品的稳定性、黏度和pH值等均无影响。初步试用结果表明：羟基化大豆磷脂能明显增加制品的保湿性能，增加皮肤光泽，使皮肤嫩滑，能明显改善制品使用效果，是一种优良的天然化妆品原料。     

白藜芦醇在化妆品中的应用与检测展望

白藜芦醇具有良好的抗氧化性和消除自由基的能力,在化妆品方面具有良好的应用价值,其已被列入《国际化妆品原料标准目录》(INCI)中,市场上已有厂家推出含白藜芦醇的产品。介绍了白藜芦醇的理化性质、在化妆品中的应用以及现有检测技术和方法。同时比较了目前常用的白藜芦醇检测方法的差异和优劣,为建立化妆品中白藜芦醇的检测方法提供参考。最后提出了白藜芦醇在化妆品中的应用前景和推荐检测方法。     

尼泊金丙酯在不同化妆品基质中抑菌效力的研究

采用防腐剂效力测试法观察了尼泊金酯类在特定浓度（企业普遍使用量和标准限量）下在不同类别的化妆品中对细菌的抑制情况,结果显示不同类别化妆品中细菌的消亡情况有较大差别,表明不同的化妆品基质对于防腐剂的抑菌效力有明显的影响。     

“化妆品工厂与设备基础”教学改革与实践的初探

根据化妆品专业人才培养的需要,提出了＂化妆品工厂与设备基础＂的教材选编,制定了教学内容,并对教学方法进行了探讨。结果表明,该课程的开设,能够使学生比较系统地掌握化妆品工厂设计与常用化妆品设备的基础知识。通过教学方法的改进,能够提高学生的学习主动性和学习的兴趣,从而提高了教学效果。     

防晒化妆品用紫外线吸收剂BP-3的研究进展

综述了防晒化妆品用紫外线吸收剂BP-3的研究进展,介绍了使用防晒化妆品的必要性。概括了BP-3的命名、理化性质、在化妆品中的最大使用量和它的毒理学性质。简述了BP-3的合成方法及进展,并且对BP-3的国内外市场情况及发展趋势作了分析。     

丝素共混膜在化妆品保湿效果评价中的应用初探

利用皮肤水分含量测试仪和水分散失测定仪,对添加不同质量分数甘油的保湿化妆品作用前后丝素共混膜的水分含量值（MMV）和经表皮水分散失值（TEWL）进行测定,以人体试验为参比,创造性地探索丝素共混膜在化妆品保湿效果评价中的应用价值,并对保湿类化妆品中保湿剂的最佳添加量做出指导。结果发现,丝素共混膜模拟体系的试验结果和人体试验具有相似的趋势,以其作为化妆品保湿效果评价的人体替代试验具有一定的可能性。