枯草芽孢杆菌MX-6的特性研究

以中国豆豉中筛选到的一株枯草芽孢杆菌MX-6为研究对象,分析其生长曲线、耐受性、抑菌特性及耐药性。枯草芽孢杆菌MX-6培养14h达到最大生物量,菌株的活性强、生长快,具有较高的温度耐受性,在100℃处理30min存活率亦可达到52.91%。枯草芽孢杆菌MX-6经人工胃液pH(1～4)处理1～4h,存活率均达到71.87%以上,结果表明菌株对胃液的耐受性较强。人工肠液和不同浓度胆盐对菌株均有一定的影响,0.1%～0.4%的胆盐对枯草芽孢杆菌MX-6的存活率影响不显著(P0.05),存活率达到74.13%以上。枯草芽孢杆菌MX-6的发酵液对青霉、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有较强的抑菌效果,而对乳酸菌无抑制作用,不具有耐药性。结果显示:该菌株的发酵速度快、耐受性强、抑菌特性明显、无耐药性,具有开发为益生菌制剂的潜能,有助于其工业化应用。     

凝结芽孢杆菌13002的益生特性

以凝结芽孢杆菌13002为研究对象,测定了该菌株对高温、胆盐、酸的耐受性以及对有害菌的抗菌活性、对抗生素的耐药性五个方面的益生特性。结果表明:该菌株于80 ℃条件作用10 min存活率达72.3%;0.3%胆盐作用12 h存活率达69.8%;pH2.0条件下作用4 h存活率达40.0%;对有害菌株(金黄色葡萄球菌和大肠杆菌)具有一定抗菌活性,其抑菌圈直径分别达13.650和14.367 mm;对青霉素、链霉素、四环素三种抗生素具有不同程度的耐药性,其MIC值分别为0.781、0.391和0.039 mg/mL。凝结芽孢杆菌13002具有良好的益生特性。     

凝结魏茨曼氏菌BC66的筛选、鉴定及特性研究

本研究旨在分离和筛选一株用于微生态制剂的益生菌。根据耐高温和产乳酸特性，从仔猪粪便中筛选到一株芽孢杆菌。通过形态学、生理生化试验和16S rDNA序列分析，该菌株鉴定为凝结魏茨曼氏菌，代号为BC66。在此基础上，通过体外实验考察了凝结魏茨曼氏菌BC66菌株的益生菌潜力，包括对胃肠道条件的耐受性（低pH，胆盐耐受性）、对病原菌的抑菌能力和抗生素敏感性。实验结果表明，BC66菌株在pH3.0酸性条件下处理2 h，菌株存活率达98%,0.3%胆盐浓度下处理2 h，菌株存活率达79%，在90℃水浴中处理10 min菌株芽孢存活率可达92%。而且，BC66菌株对大肠杆菌和沙门氏菌的生长具有较强的抑制能力。对所有测试的抗生素都表现出很好的敏感性，且没有观察到溶血活性。上述结果表明，本研究分离筛选的凝结魏茨曼氏菌BC66具有较强的抗逆性且益生性能良好。该菌株有可能作为饲料添加剂中潜在的候选益生菌，为应用于微生态制剂的研发奠定了基础。     

豆瓣中腐败菌蜡样芽孢杆菌性能及对抗生素敏感性研究

该实验以豆瓣中分离的蜡样芽孢杆菌为实验菌株,对蜡样芽孢杆菌最适生长条件及对抗生素敏感性进行了检测。结果显示：该菌的最适生长温度是35 ℃,5 ℃以下和50 ℃以上不生长;最适生长盐含量为2%,在含量5%时生长缓慢,在盐含量10%以上时不生长;最适生长pH值为7.0,pH值3.0以下和pH值10.0以上该菌不生长;另外,在检测的25种抗生素中,有21种抗生素对该菌的生长具有抗性。     

食品中蜡样芽孢杆菌的分离及携带毒力基因的检测

为了确定成都市食品中蜡样芽孢杆菌所携带的毒力基因情况,本实验对市售食品共采样130份,通过菌落在MYP培养基上形态特征对蜡样芽孢杆菌进行初步分离,再利用16Sr RNA测序结果进行比对分析,并检测分离菌株携带的管家基因gyr B、rpo B、Vrr A、gro EL进一步确认,最后检测分离菌株携带毒力基因情况。结果表明130份样品中共检出23株蜡样芽孢杆菌,检出率为17.7%;23株分离菌株中,蜡样芽孢杆菌的4个管家基因gyr B、rpo B、Vrr A、gro EL检出率为100%,毒力基因的检测结果表明,nhe B和ent FM在16株分离菌株中检出,检出率为69.6%;nhe A和nhe C在14株分离菌株中检出,检出率为60.9%;hbl D在11株分离菌株中检出,检出率为47.8%;cyt K在10株分离菌株中检出,检出率为43.5%;bce T在9株分离菌株中检出,检出率为39.1%;hbl A和hbl C在8株分离菌株中检出,检出率为34.8%;cer和ces在2株分离菌株中检出,检出率为8.7%;未发现分离菌株携带hbl B和Hly基因。研究结果表明市售食品中分离的蜡样芽孢杆菌毒力基因携带率较高,对食品安全具有潜在威胁,应当引起有关部门注意。     

海洋链霉菌LY-1的抗细菌特性研究

从连云港海域潮间带所采的土样中分离到一株产高活性抗细菌物质的链霉菌LY-1。抗菌谱测定结果表明菌株LY-1 发酵产物对枯草芽孢杆菌等5 株革兰氏阳性菌,大肠杆菌等6 株革兰氏阴性菌有显著拮抗作用。稳定性研究表明该菌所产抗细菌物质在121℃,pH1 和pH12 条件下抑菌活性均不变;紫外线照射也不影响其抑细菌活性。该抗菌产物对蜡样芽孢杆菌和大肠杆菌生长的抑制作用研究表明,该抗菌产物能够较好的抑制蜡样芽孢杆菌和大肠杆菌的生长繁殖。菌株LY-1 所产抗菌物质在海产品及食品保鲜、生防及医药方面具有潜在的应用价值。     

三类传统发酵食品中蜡样芽孢杆菌的污染状况研究

为探究辣椒酱、酸汤、毛豆腐三类传统发酵食品的蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）污染状况,采用国标GB 4789.14—2014《食品微生物学检验蜡样芽孢杆菌检验》方法测定样品的污染菌数及分离菌株的生理生化特征,并通过聚合酶链式反应（PCR）方法探究分离菌株的毒力基因谱和多样性。结果表明,5个辣椒酱及4个酸汤样品的蜡样芽孢杆菌检出率均为100%,菌数在3.6～460 MPN/g之间。而7个毛豆腐的蜡样芽孢杆菌检出率为28.57%,其中2个夏季样品的蜡样芽孢杆菌菌数>7 lg(CFU/g),5个秋季样品未检出蜡样芽孢杆菌,污染差异可能与气温变化、运输方式有关,需要实地采样并进行季节性分析。从三类样品中分离的94个菌株均符合蜡样芽孢杆菌生理生化特征,毒力基因均为腹泻型,且菌株多样性与样品差异性有关。综上,蜡样芽孢杆菌的污染特性具有明显的样品差异性,可能与发酵食品的原料、发酵工艺相关。     

原料乳中蜡样芽孢杆菌部分致病基因的鉴定及毒力评价

研究原料乳中蜡样芽孢杆菌的潜在威胁,对我国10 个省市原料乳中蜡样芽孢杆菌的污染状况进行调查,并利用PCR 扩增技术及血平板检测的方法分析乳源性蜡样芽孢杆菌中的毒性分布。结果表明,原料乳中蜡样芽孢杆菌检出率为33%,检出水平为1 × 103～1 × 106 CFU/ml,检出的蜡样芽孢杆菌中25 株(75.8%)能产生溶血素BL,24 株(72.7%)含有bceT 基因,至少产生一种毒素的菌株有31 株占检出菌总数的93.9%。研究结果证实我国原料乳中的蜡样芽孢杆菌污染状况不容乐观,严格监控原料乳中的蜡样芽孢杆菌污染,对生产出优质乳制品具有重要意义。     

虾酱源芽孢杆菌的筛选及其益生特性

从市售农家制作传统虾酱中筛选分离5株芽孢杆菌，经鉴定后命名为解淀粉芽孢杆菌Y11、贝莱斯芽孢杆菌Y12、枯草芽孢杆菌Y13、沙福芽孢杆菌Y32和蜡样芽孢杆菌BI6Y。5株菌都可在10%的盐质量分数下正常生长，具有不同产蛋白酶和脂肪酶的能力以及抑菌特性。其中，蜡样芽孢杆菌BI6Y具有β溶血性，对氯霉素、万古霉素、诺氟沙星不敏感，不适合作为益生菌。其它4株芽孢杆菌具有γ溶血性，对氯霉素不敏感，自聚集率在25%~35%之间，可耐受酸和胆盐；分泌表面活性素surfactin；人工胃肠液处理后的存活率多数集中在50%~70%之间，枯草芽孢杆菌Y13在人工胃液(pH 2.0)的存活率最高为95.3%，沙福芽孢杆菌Y32在人工肠液中的存活率最高为85.1%；其菌体、无细胞提取液、细胞内容物分别具有不同的抗氧化活性，其中无细胞提取液可同时清除1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和羟自由基，清除率在40%~60%之间。研究结果表明:除蜡样芽孢杆菌BI6Y外，解淀粉芽孢杆菌Y11、贝莱斯芽孢杆菌Y12、枯草芽孢杆菌Y13、沙福芽孢杆菌Y32具有作为益生菌的潜力。研究结果为基于芽孢杆菌的益生菌产品开发提供了一定理论依据。     

生鲜食品中蜡样芽孢杆菌毒力基因及耐药性研究

目的:研究生鲜食品中蜡样芽孢杆菌的毒力基因及耐药性。方法:在成都市周边农贸市场和路边小摊采集各种生鲜食品共100份,采用MYP选择性培养基初步分离蜡样芽孢杆菌菌株,采用16S rRNA序列比对分析鉴定得到蜡样芽孢杆菌分离菌株,采用PCR检测分离鉴定菌株中蜡样芽孢杆菌13个毒力基因的携带情况,进一步采用纸片扩散法检测菌株对18种抗生素的耐药性。结果:从100份生鲜食品样本中,检出蜡样芽孢杆菌24株,检出率为24%,其中,路边小摊的检出率(70%)高于农贸市场(18.9%)。呕吐型基因ces和cer的检出率较低,仅在1株中发现;腹泻型基因nheC有24株检出;cytK有13株检出;bceT有12株检出;hblA有11株检出;nheB有10株检出;hblC、hblD、nheA各有9株检出;hly-Ⅱ有7株检出;hblB、entFM检出率为0;蜡样芽孢杆菌的4个看家基因rpoB、gyrB、groEL、vrrA在24株分离菌株中检出率为100%。同时发现,生鲜食品来源的蜡样芽孢杆菌分离菌株对杆菌肽B、磺胺甲亚唑、苯唑西林、青霉素表现出较高耐药性,耐药率大于96%;而对阿米卡星、氯霉素、庆大霉素、亚胺培南耐药率小于7%。结论:本研究通过分离鉴定生鲜食品源蜡样芽孢杆菌,研究其毒力基因携带及耐药性,为进一步评价生鲜食品中蜡样芽孢杆菌的安全风险提供参考数据。