超声波技术在波纹巴非蛤酶解反应中的应用

将超声波技术应用到波纹巴非蛤制备的酶解反应中,在单因素试验的基础上采用响应面分析法对试验条件进行优化。运用Box-Benhnken 的中心组合试验设计原理,选择对短肽产率显著影响的4 个因素：辐照时间、辐照温度、超声功率和固液比,进行四因素五水平的响应面分析试验,确定在超声波条件下波纹巴非蛤的酶解反应最佳工艺条件为辐照时间4h、辐照温度55℃、超声功率140W、固液比1:2(g/mL)。对模型预测结果进行验证,得到短肽产率为样品的5.15%,是无超声波作用下的短肽产率的1.1 倍。     

波纹巴非蛤生物活性肽的分离与提纯研究

以波纹巴非蛤为原料,根据最佳酶解条件制备酶解液。通过凝胶层析柱(Sephadex G-25)分离水解所得粗品波纹巴非蛤酶解液,并用紫外可见分光光度计测定收集后的各管溶液,然后根据各吸光度值绘制的管数-吸光度曲线图得出第三个峰附近的管数为小分子段。根据标准曲线计算出活性肽的分子量为753.58D,最后通过反相高效液相色谱-质谱联用技术测出活性肽的分子量为679.4D。     

以波纹巴非蛤为原料制备海洋生物活性肽

目的:以波纹巴非蛤为原料,制备海洋生物活性肽,并确定最佳酶解条件。方法:选用木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶为水解酶,以水解度为考察指标,通过正交试验对酶解实验条件进行优化。结果:木瓜蛋白酶在50℃、酶解时间4h、加酶量4%、pH6.3、料水比1:3时水解度最高为40.83%,总氮回收率为89.85%,平均肽链长度为2.20;菠萝蛋白酶在温度55℃、酶解时间4h、加酶量12%、pH6.3、料水比1:3时水解度最高为34.61%,总氮回收率为89.58%,平均肽链长度为2.58。结论:在本实验条件下,木瓜蛋白酶对以波纹巴非蛤为原料制备海洋生物活性肽效果优于菠萝蛋白酶。     

柔性固定化木瓜蛋白酶的制备及在酶解波纹巴非蛤中的应用

在壳聚糖膜的表面接上分子链较长的双醛淀粉作为柔性固定化酶的载体,将木瓜蛋白酶固定在该载体上制成柔性固定化木瓜蛋白酶,并应用于酶解波纹巴非蛤制备小分子肽。通过考察温度、pH 值、加酶量和固定化时间等条件对柔性固定化木瓜蛋白酶的酶活、酶活回收率的影响,确定最优固定化条件。结果表明：双醛淀粉用量0.8mg/g 壳聚糖、柔性固定化酶温度25℃、柔性固定化酶时间20h、加酶量40mg/g 壳聚糖、pH8.0 条件下所得的固定化酶酶活最高,酶活回收率63.35%。将该柔性固定化酶在酶解温度40℃、pH7.0、加酶量1.0%、酶解时间4h条件下制备波纹巴非蛤小分子肽,产率为3.4055%。     

波纹巴非蛤氨基多糖的分离纯化及其理化性质的初步研究

以波纹巴非蛤全脏器为原料,经酶解、脱色、离心去蛋白、醇沉、干燥等工序得到氨基多糖粗制品(波纹巴非蛤CPG),CPG再经吸附、透析、CTAB络合等方法进行纯化,得到波纹巴非蛤氨基多糖较纯级分(波纹巴非蛤GAG-2)。成分分析表明:波纹巴非蛤GAG-2含有氨基己糖、己糖醛酸、硫酸基和少量的岩藻糖(Fuc)、半乳糖(Gal)。波纹巴非蛤GAG-2经琼脂糖凝胶电泳可再分为F-1、F-2两个级分;红外光谱与CS-6相似;体外抗肿瘤试验表明:0·5mg/mL波纹巴非蛤CPG对HL-60细胞的抑制率可达32·3%,与抗癌药物5-Fu合用时可使抑瘤率提高到56·7%,具显著增敏作用。     

响应面法优化酸水解制备波纹巴非蛤小分子肽工艺

应用响应面分析法优化酸水解制备波纹巴非蛤小分子肽的工艺条件。采用二次正交旋转组合设计试验,以波纹巴非蛤肽得率为响应值,进行3因素5水平的响应面分析,建立二次回归模型,其拟合优度为92.09%。获得的最优酸水解条件为：固液质量比1:3、盐酸浓度6.4mol/L、酸水解温度92℃、酸水解时间5.3h。在此条件下肽得率为82.21%,与模型预测的肽得率84.04%接近。SDS-PAGE电泳测得酸水解液组分的最小分子质量小于2kD。     

响应面法优化波纹巴非蛤肌肉蛋白酶解工艺条件

波纹巴非蛤广泛分布于我国沿海地区,是一种高蛋白低脂肪的海洋蛋白资源。本研究以水解度、蛋白质回收率和感官评价为指标,选取动物水解蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶,采用单酶酶解和复合酶酶解波纹巴非蛤肌肉蛋白,综合指标筛选出最佳酶种类及酶解方法。并且以时间,液料比,加酶量为单因素,采用响应面优化酶解条件,确定最佳酶解工艺。研究结果表明:动物蛋白酶和风味蛋白酶按1∶1比例同时添加,酶解3 h后,酶解产物的水解度和蛋白质回收率分别达到22.29%±1.02%和79.95%±0.51%,感官评价总分为15.6,与其他酶解方式相比较好。通过单因素以及响应面优化,得到最佳酶解条件:加酶量1700 U/g,酶解时间3.5 h,液料比为3.4∶1。在此条件下,水解度为30.04%±0.64%,蛋白质回收率为81.46%±0.70%,与预测值水解度30.54%±0.137%和蛋白质回收率82.62%±0.092%无显著性差异(p0.05)。感官评价综合得分为15.8,风味较好,研究结果为波纹巴非蛤肌肉蛋白的精深加工利用提供参考。     

鸡肉蛋白酶解条件及产物降解规律

采用木瓜蛋白酶水解鸡肉蛋白,通过单因素实验和正交实验确定水解鸡肉蛋白的最适条件,并在此水解条件下酶解24 h,研究水解过程中酶解液中游离氨基酸含量和肽分子质量分布的变化规律。结果表明,最佳的酶解条件为:温度45℃,pH6.5,酶用量6.0%,固液比1∶2,水解时间6 h;酶解产物中游离氨基酸种类齐全且含量较高,水解过程中,游离氨基酸总量变化呈增长的趋势,16 h后变化不大;酶解液的肽分子质量都集中在3 000Da以下,酶解过程中大分子质量肽不断减少,小分子质量肽不断增加;酶解24 h后,分子质量小于1 000 Da的小分子肽和氨基酸含量可达97.19%。     

几种南海贝类酶解产物的生物活性及其分子量分布研究

对菲律宾蛤仔、波纹巴非蛤、马氏珠母贝双酶水解产物的自由基清除活性和血管紧张素转化酶（ACE）抑制活性及分子量分布进行研究。结果表明：3种贝类酶解产物均具有清除羟自由基、超氧阴离子、二苯基苦基苯肼（DPPH）等自由基的活性以及ACE抑制活性;3种贝类酶解产物对超氧阴离子的清除作用均较弱;羟自由基清除活性较强的是菲律宾蛤仔酶解产物,其高活性组分的分子量在1479～851 Da之间;DPPH自由基清除活性较强的是菲律宾蛤仔酶解产物,其高活性组分的分子量在1479～851 Da之间;ACE抑制活性较强的是波纹巴非蛤酶解产物,其高活性组分的分子量在633—303 Da之间。     

蓝蛤蛋白酶解液超滤分离特性的研究

研究了蓝蛤蛋白酶解液在各级超滤过程中膜通量的变化及超滤前后感官、肽分子质量分布的变化,对超滤膜的选择性及分离效果进行了评价和分析。实验结果表明,各级超滤膜处理蓝蛤蛋白酶解液初始膜通量大小排序为3 ku5 ku10 ku,各级超滤过程中膜通量均随着操作时间的延长而呈下降趋势;用10 ku超滤膜处理后,酶解液浑浊和腥味消失,通过各级超滤,酶解液的鲜甜味得到明显提高;原酶解液中各分子质量肽段均有较广泛的分布,仅采用控制酶解工艺仍难以实现呈味肽的有效富集,通过各级超滤处理,小于3 ku肽段得到有效富集,其含量由47.26%提高到76.66%。各级超滤膜的实际截留分子质量均大于理论截留分子质量,且两者的差异随着理论截留分子质量的降低而增加。     

Characterization of hydrolysates derived from enzymatic hydrolysis of wheat gluten

ABSTRACT:  The aim of this study is to investigate the characteristics of wheat gluten hydrolysates. Enzymatic hydrolysis was performed using a papain (food-grade enzyme) in the present study. The gluten proteins were hydrolyzed for 8 h. During enzymatic hydrolysis, average peptide chain length in the hydrolysate decreased rapidly. Increasing proteolysis resulted in the increase in the contents of the soluble forms of nitrogen. However, the content of peptide nitrogen increased within the 1st 6 h, and then began to decrease. The percentage of the released peptides with molecular weight (MW) of over 15 kD decreased with extending enzymatic hydrolysis, while those with MW below 5 kD increased significantly ( P < 0.05). The peptides with MW 10 to 15 kD and those having the MW 5 to 10 kD had different changes. The polymeric glutenin and monomeric gliadin in gluten complex showed different behavior after enzymatic hydrolysis. The monomeric protein (gliadin) and soluble glutenin were prone to enzymatic hydrolysis, while insoluble glutenin was resistance to enzymatic hydrolysis.     

波纹巴非蛤蛋白酶解产物的抗氧活性及分子量分布研究

以波纹巴非蛤为原料,分离得到肌浆蛋白、肌原纤维蛋白、基质蛋白3种蛋白组分,分别研究其氨基酸组成及其胰蛋白酶酶解产物的体外抗氧化活性及分子量分布。结果表明该三种蛋白质中必需氨基酸、碱性氨基酸、疏水性氨基酸和支链氨基酸含量较高。抗氧化实验结果显示,三种蛋白对DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基均有一定的清除效果,且清除率与酶解液浓度存在一定的量效关系。与其它两种蛋白酶解产物相比,肌浆蛋白酶解液中小分子肽含量最高,分子量小于1500 u占42.55±0.27%,其对自由基清除效果也明显高于其它两种蛋白酶解液,对DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由清除活性的IC50值分别为4.82、4.70和3.75 mg/mL。肌浆蛋白和肌原纤维蛋白酶解产物的还原能力相当,浓度为10 mg/mL时,其OD700分别为0.58和0.57,基质蛋白酶解产物的还原能力较弱。     

花生蛋白水解工艺的优化及水解产物分子量分布的研究

本实验主要研究了花生蛋白水解的最佳工艺及水解产物肽分子的分布。考察了酶的种类、加酶量、时间、温度和pH 值五个单因素对花生蛋白水解度(DH)的影响,采用三元二次旋转正交组合设计进行试验,建立了工艺参数间的数学模型,得出对水解率影响较大的三个因素的最佳范围：酶解温度44.9～47.6℃、pH7.93～8.15、酶解时间2.46～2.76h。得到花生蛋白最高水解度为19.61%。水解产物中肽分子主要分布在1000D 以下,含量高达84.73%。     

Bitterness intensity of soybean protein hydrolysates—chemical and organoleptic characterization

Soluble and isoelectric soluble soybean protein hydrolysates were prepared by Alcalase treatment to a degree of hydrolysis of 3–15%. The bitterness intensity of the hydrolysates obtained was assessed on a five-point scale. The average relative molecular masses of peptides in the soluble hydrolysates (2250-1400) and isoelectric soluble hydrolysates (1313-800) and their hydrophobic peptide fractions (575-400) were determined by the trinitrobenzenesulphonic acid method. The molecular mass distribution of peptides in soluble and isoelectric soluble soybean hydrolysates and their hydrophobic peptide fractions was determined by gel permeation HPLC using a Zorbax Bio Series GF-250 column. The results suggest that the main reason for the bitterness of soybean protein hydrolysates prepared by Alcalase treatment are hydrophobic bitter peptides of relative molecular mass less than 1000.     

酶解中国毛虾制备低分子肽的研究

以中国毛虾为原料,采用酶法制备低分子肽。利用响应面法优化了Alcalase4L酶水解中国毛虾的工艺参数:温度57.1℃、pH8.0、加酶量为46mL/kg,酶解产物的平均肽链长从0.5h的14.02逐渐降低到8h的3.96。采用凝胶层析法测定了酶解产物的分子质量分布,不同时间酶解产物的SephadexG-15凝胶色谱图中均出现3个吸收峰,前2个峰的分子质量在18722～641u和641～35u之间。从峰值变化可以判断出,随着酶解的进行,低分子肽的量逐渐增加。     

海参二肽基肽酶Ⅳ抑制肽的酶解制备及结构鉴定

通过抑制二肽基肽酶IV(Dipeptidyl-peptidase IV, DPP-IV)的活性,从而减少GLP-1的降解,提高血液中胰岛素的水平,是控制血糖水平的一种重要手段。本文以海参(Holothariatubulosa)为原料,通过探究蛋白酶种类、加酶量和酶解时间对酶解产物DPP-IV抑制活性、蛋白回收率和水解度的影响,确定了海参DPP-IV抑制肽的制备条件,并进一步测定了其分子量分布和总氨基酸组成,最后通过UPLC-MS/MS鉴定了其潜在的活性肽序列。结果发现,木瓜蛋白酶与复合蛋白酶1:1的复配酶解具有最佳的酶解效果,其产物的得率和DPP-IV抑制活性均最高,且在加酶量为干海参质量的1%,酶解时间为4 h时,海参酶解产物在终浓度为2 mg/mL时的DPP-IV抑制率为66.97%,蛋白回收率为76.25%,水解度为6.10%。酶解产物的分子量大都小于5000 u,且富含脯氨酸(Pro)和丙氨酸(Ala)等与抑制DPP-IV活性有关的氨基酸。将获得的酶解物中的肽段进行液质联用检测,并通过Mascot分析筛选得到28条具DPP-IV抑制肽的肽序列,分子量在500～1936 u。本实验结果为以海参为原料进行降血糖产品的开发奠定了基础。     

酶法制备大豆肽的相对分子量分布及降压作用研究

目的:为了研究双酶复合酶解大豆分离蛋白制备大豆肽的相对分子量分布及活性片段对实验性高血压大鼠的降压效果。方法:通过单因素实验优选,采取正交实验优化复合酶的酶解工艺,以酶解液对血管紧张素转换酶(ACE)抑制率为指标优选最佳工艺;通过超滤、纳滤后得到最佳分子量片段,应用左硝基精氨酸(L-NNA)诱导大鼠高血压模型,分别给予不同剂量的活性片段进行实验。结果:双酶复合酶解的最佳条件为:在料液比为1:20 g/mL的情况下,酶解温度50℃,酶底比3.0%,酶解pH7.0条件下先用菠萝蛋白酶酶解2 h后,再以酶底比4.0%加入胰蛋白酶,控制温度为40℃、酶解pH为8.0条件下酶解4 h,大豆分离蛋白的水解度35.31%。经过高效液相对酶解液的相对分子量分布得出,大豆分离蛋白原液含有的蛋白质及多肽的相对分子质量主要区间在5000~1.0×105 Da,在双酶复合酶解下,酶解液的蛋白质及多肽的相对分子质量主要区间均在500~4000 Da;通过超滤得出最佳活性片段为1000~3000 Da,药理实验表明,与模型对照组相比各组血压均有降低,且大豆肽剂量组有显著性差异(p<0.05);其中大豆肽高剂量组和卡托普利组相当。结论:双酶复合酶解制备的大豆肽相对分子量较小,活性片段对高血压大鼠模型降压作用显著。     

酶解脱脂蚕蛹蛋白过程中鲜味规律研究

以缫丝蚕蛹为实验材料,分析碱性蛋白酶和风味蛋白酶复配酶解脱脂蚕蛹蛋白规律。结果表明:酶解脱脂蚕蛹蛋白的最适底物质量浓度为8?g/100?m L、酶解温度为50℃、总酶添加量为1?g/100?g(以脱脂蚕蛹粉计)、酶解时间为9 h;酶解过程中促进了糖的释放,可溶性氮主要是以肽氮形式存在,酶解产物的分子质量主要集中在小于1 k D;在酶解产物中主要的游离氨基酸分别为苏氨酸、组氨酸、亮氨酸、酪氨酸、赖氨酸、半胱氨酸,占总游离氨基酸含量的60%左右,对酶解液的滋味产生一定的影响;在酶解产物中肽类氨基酸主要是鲜甜味氨基酸,占总肽类氨基酸的50%左右,其中亲水性氨基酸与碱性氨基酸含量的比值约为1;通过对酶解产物鲜味的相关性分析,肽类氨基酸的含量与酶解产物的鲜味有较好的线性相关性。