羊软骨中Ⅱ型胶原蛋白肽的制备和抑菌活性

以羊软骨胶原蛋白为原料,利用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶对其进行水解,确定最合适的酶解时间和酶用量以水解液的抑菌率和水解度为指标,比较酶解效果;以大肠杆菌为指示菌,通过双层琼脂平板扩散法检测其抑菌活性。试验表明:碱性蛋白酶酶解羊软骨胶原蛋白得到的水解液的水解度最高,最合适的酶解时间是2h,酶用量(占胶原蛋白的百分比)4%;碱性蛋白酶酶解羊软骨胶原蛋白得到的水解液的抑菌率最大,最合适的酶解时间是2.5 h,酶用量(占胶原蛋白的百分比)4%,水解液对大肠杆菌有抑菌活性,其抑菌圈直径为(26.79±0.16)mm,最后得到的胶原蛋白肽对大肠杆菌、金黄色葡糖球菌、枯草芽孢杆菌、荧光假单胞菌和沙门氏菌都有抑菌作用。     

山羊乳酪蛋白酶解条件优化及其抗菌活性研究

为制备山羊乳酪蛋白抗菌肽,以新鲜无抗山羊乳为原料,采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶在最适条件下酶解山羊乳酪蛋白,以沙门氏菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为指标,筛选最适水解酶,并通过单因素实验和正交实验确定水解酶水解山羊乳酪蛋白的最适条件。结果表明:木瓜蛋白酶是酶解山羊乳酪蛋白的最佳蛋白酶,其酶解物对沙门氏菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用最强;确定了木瓜蛋白酶水解山羊乳酪蛋白的最佳工艺。     

双酶分步水解牛骨蛋白工艺的优化

以新鲜牛骨为原料,探讨牛骨粉的制备工艺。选用枯草杆菌中性蛋白酶与胰蛋白酶分步水解牛骨蛋白,以水解度为特征性指标,采用L9(34)正交试验设计优化双酶水解牛骨粉的工艺条件。结果表明：牛骨粉蛋白质含量高达30.72%,约为鲜骨蛋白质含量的3倍;采用胰蛋白酶先水解,中性蛋白酶后水解的方式分步水解牛骨蛋白,其效果优于两种酶同时水解及中性蛋白酶先水解,胰蛋白酶后水解;中性蛋白酶与胰蛋白酶分步水解牛骨蛋白的最佳工艺条件：固液比1:2,起始pH8.0,胰蛋白酶2000U/g蛋白质于45℃、150r/min振荡水解3h,然后用中性蛋白酶2000U/g蛋白质于45℃以150r/min振荡水解3h,水解度达18.34%;粒径小的活性炭对酶解液脱苦、脱色及除腥效果优于粒径大的活性炭。     

复合酶分步酶解法提取牛骨胶原蛋白工艺的研究

以牛骨胶原蛋白初步酶解产物为研究对象,以水解度为指标,采用甲醛滴定法监测深度酶解的进程,对比分析不同的酶解条件对水解度的影响,确定了中性蛋白酶和风味蛋白酶分步水解的酶解条件。通过正交试验结果表明:采用中性蛋白酶和风味蛋白酶加酶量分步水解牛骨蛋白的最佳条件为物料比1∶750,起始pH值是6.5,先用中性蛋白酶55℃酶解3h后,再用风味蛋白酶于55℃继续酶解2h。此时水解度达到63.6%。     

蛋壳内膜酶解液抑菌活性的工艺研究

为了研究蛋壳内膜酶解液的抑菌活性,以蛋壳内膜为原料,用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶分别对其酶解得酶解液,检测不同酶解液对鸡大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、鼠伤寒沙门氏菌、痢疾志贺氏菌、嗜水汽单胞菌、产肠毒大肠杆菌和禽多杀性巴氏杆菌的抑菌效果,并对抑菌效果较好的中性蛋白酶酶解的条件进行了单因素试验和正交试验分析。结果表明:用中性蛋白酶酶解蛋壳内膜效果优于其他3种酶,中性蛋白酶酶解蛋壳内膜的最佳条件为预处理Na OH的添加量为质量浓度3%,酶添加量为4 g/L,酶解温度为35℃,酶解时间2 h,pH为6.5。研究结果为蛋壳内膜酶解液应用于食品防腐奠定了理论基础,也为蛋壳内膜的充分利用提供了新思路。     

沙棘籽渣酶解产物的体内外抑菌作用

以沙棘籽渣为原料,采用水提法提取沙棘籽渣蛋白,再用ProteAX复合蛋白酶和胃蛋白酶两种酶酶解,利用膜过滤对其分离纯化,得到具有抑菌活性的沙棘籽渣蛋白酶解物。体外实验结果表明：ProteAX复合蛋白酶水解多肽对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、绿脓杆菌均有抑制作用,胃蛋白酶水解多肽对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌有抑制作用。动物实验表明：胃蛋白酶水解多肽灌胃的小鼠粪便中,沙门氏菌的菌落总数与阳性对照组相比显著减少（P＜0.05）;而灌胃ProteAX复合蛋白酶水解多肽的小鼠粪便中,金黄色葡萄球菌的菌落总数比阳性对照组显著降低（P＜0.05）。     

中性蛋白酶酶解核桃饼粕制备抑菌多肽的研究

以核桃饼粕为材料,研究中性蛋白酶的酶解条件对核桃饼粕蛋白多肽液抑菌性的影响。通过单因素试验及正交试验,研究了酶的添加量、p H、时间、温度及底物浓度对多肽液抑菌性的影响,并用葡聚糖凝胶层析柱对多肽液进行分离,测定其抑菌性。结果表明:当中性蛋白酶酶解核桃饼粕制备抑菌性多肽的酶解条件为酶添加量16 000 U/g,酶解p H 8.0,酶解温度45℃,酶解时间5 h时,多肽液具有较好的抑菌活性,且对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径分别为20.55,19.85和20.05 mm;经葡聚糖凝胶层析分离,其多肽分子量越小,抑菌性越强。     

风味蛋白酶水解合浦珠母贝肉制备抗菌肽人工神经网络法优化工艺

利用具有自学习特点的人工神经网络可实现对酶解过程的模拟仿真,研究从合浦珠母贝肉中制备抗菌肽的最佳工艺条件。采用3层(5-9-3)人工神经网络法对风味蛋白酶水解合浦珠母贝肉的工艺过程进行模拟和优化,并通过管碟抑菌法对产物的抑菌性质进行分析。结果表明：pH7.0、水解温度55℃、酶添加量1.6%、水解时间4h、料液比7:5,制备得到肽A,抑制鼠伤寒沙门氏菌最强,抑菌圈直径14.20mm,平均肽链长度2.6;pH7.0、水解温度55℃、酶添加量1.7%、水解时间4h、料液比3:2,制备得到肽B,抑制痢疾志贺氏菌最强,抑菌圈直径23.42mm,平均肽链长度2.8;pH6.5、水解温度60℃、酶添加量2.5%、水解时间4h、料液比7:5,制备得到肽C,对单核细胞增生李斯特菌的抑制效果最强,抑菌圈直径16.60mm,平均肽链长度2.5。3种抗菌肽对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌也具有较强的抑菌效果,抑菌率为74.3%～80.8%。本研究利用人工神经网络优化制备的贝肉抗菌肽克服了纯度低、提取率低等缺点,为合浦珠母贝肉抗菌肽的开发利用提供技术支撑。     

鲢鱼源多肽锌的制备工艺对其抑菌活性的影响

研究了制备工艺中的主要因素对鲢鱼源多肽锌螯合物的抑菌活性影响。以抑菌圈直径为指标,探讨了酶解工艺(蛋白酶种类和酶解时间)和螯合工艺(螯合反应的pH、多肽与氯化锌的质量比、螯合反应的温度和时间)对多肽锌螯合物的抑菌活性影响。结果表明,酶法水解鲢鱼蛋白制备抑菌型多肽锌的最佳条件为风味蛋白酶酶解时间6h、螯合反应pH为6.0、多肽与氯化锌质量比为2:1、反应时间45min、温度30℃,得到的螯合物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径分别为12.50mm和12.66mm,螯合物得率38.67%。因此,鲢鱼源多肽锌螯合物具有较好的抑菌活性,有望作为一种潜在的抗菌剂。     

翡翠贻贝的酶法水解工艺研究

利用木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、复合蛋白酶、复合风味蛋白酶对翡翠贻贝进行水解,对水解效果进行比较,选择使用中性蛋白酶作为作用酶,确定水解工艺条件为:加酶量4000U/g,固液比1∶2.5,温度50℃,pH为7.5,酶解时间4h。同时进行中性蛋白酶与复合风味蛋白酶复合水解的实验,对两种方法的酶解结果进行比较,认为中性蛋白酶与复合风味蛋白酶复合水解可以改善酶解液的风味,同时酶解液中游离氨基酸的含量也有一定的提高,但水解率无明显提高。     

响应面法优化紫贻贝蛋白酶解工艺条件

分别采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、酸性蛋白酶、复合蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和风味蛋白酶7种蛋白酶对紫贻贝蛋白的酶解工艺条件进行研究。根据水解度和感官评定的结果,确定中性蛋白酶、复合蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶可以作为紫贻贝蛋白酶解的外加蛋白酶。将上述4种蛋白酶进行两两复配,通过试验确定复合蛋白酶与中性蛋白酶按1:1进行复配,可作为紫贻贝蛋白酶解的最适复配酶。采用响应面优化分析得出复配蛋白酶最佳酶解条件为酶解时间2h、pH7、酶解温度50℃、酶添加量0.4%,在此条件进行实验,测得水解度为70.25%,游离氨基酸总量增加了388.46%。     

4 种蛋白酶水解双孢蘑菇效果比较及风味蛋白酶水解工艺优化

采用生物酶解技术对双孢蘑菇进行酶解,从而充分利用并提取其中的滋味物质,对比4?种蛋白酶（中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合蛋白酶及风味蛋白酶）对双孢蘑菇的酶解效果,结果表明,风味蛋白酶酶解后水解液可溶性固形物、呈味氨基酸含量显著高于其他处理组,可以显著除去水解液的苦味、涩味,保持其鲜味,并显著提高其咸味和滋味的丰富性,水解液清透明亮。因此选择风味蛋白酶对双孢蘑菇进行酶解处理,并以水解液游离氨基酸浓度为指标,对酶解时间、酶解温度、pH值和加酶量4?个因素进行单因素试验以及L9（34）正交试验,结果表明酶解温度对风味蛋白酶酶解效果的影响达到极显著水平,pH值对风味蛋白酶的酶解效果达到显著水平,风味蛋白酶最佳酶解工艺为pH?6.5、酶解温度60?℃、加酶量1?000?U/g、酶解时间3?h,该工艺条件下所得到的水解液（游离氨基酸浓度140.27?mmol/L）可以作为双孢蘑菇调味品加工基料。     

鸭肉蛋白酶解产物的抗氧化特性

为了解酶解时间、蛋白酶种类对鸭肉蛋白酶解产物抗氧化特性的影响,分别用复合蛋白酶、风味蛋白酶和胰酶对鸭肉进行单酶酶解和双酶分步酶解（胰酶＋复合蛋白酶、胰酶＋风味蛋白酶）,制备不同时间段的酶解产物,并对其自由基清除能力（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、羟自由基（hydroxyl radical,·OH）和超氧阴离子自由基（superoxide radical,O2－·））和总还原力进行分析。结果表明：各鸭肉蛋白酶解产物的DPPH自由基清除率随着酶解时间的延长而增加,但·OH和O2－·清除率及总还原力随着酶解时间的延长先增加后降低（P＜0.05）。在5 种鸭肉蛋白酶解产物中,复合蛋白酶酶解物表现出最强的DPPH自由基清除能力（75.70±1.54）%、·OH清除能力（59.41±1.24）%和O2－·清除能力（98.50±4.51）%,但用双酶分步酶解得到的酶解产物表现出最强的总还原力（0.330±0.017）。因此鸭肉蛋白酶解产物的抗氧化特性受酶解时间和蛋白酶种类的影响,复合蛋白酶是制备鸭肉蛋白源抗氧化肽的最适蛋白酶。     

酶解脱脂蚕蛹蛋白制备ACE抑制肽

以实验室自制的脱脂蚕蛹蛋白为原料,利用酶工程技术,通过对中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶等的筛选及单因素和响应面优化试验,对ACE抑制肽的制备工艺条件进行较系统的研究。结果表明：选择碱性蛋白酶作为脱脂蚕蛹蛋白制备ACE抑制肽的酶,制备ACE抑制肽的最佳工艺条件为料液比11.88:100、温度50.22℃、pH 9.46、加酶量7.03%、酶解4h。在此条件下制备的ACE抑制肽的ACE抑制率达到41.98%。     

双酶水解菜籽粕及水解物的抗氧化活性研究

中性蛋白酶分别与alcalase,protamex,flavourzyme,木瓜蛋白酶及胰蛋白酶相结合,用双酶相继水解菜籽粕,得到5组菜籽粕的双酶水解物。双酶水解物抗氧化活性试验结果表明,所有水解物都具有一定清除DPPH自由基活性的能力、还原能力和抑制亚油酸氧化活性的能力,但以中性蛋白酶和胰蛋白酶组合的水解物最强。该水解物的凝胶层析分离结果表明,4组分离物中分子量为6500-1050Da的组分清除DPPH自由基的活性最高,显示菜籽粕双酶水解物的抗氧化活性取决于水解物的分子结构,即不仅与酶的种类有关,还与水解条件和水解度有关。     

蛋白酶制剂对发酵牛肉酱风味物质的影响

以复合蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶分别酶解牛肉,得到牛肉酶解液,将4种牛肉酶解液分别和大曲混合后兑盐水发酵,比较不同蛋白酶制剂对发酵牛肉酱风味物质的影响。结果表明,添加复合蛋白酶组的总酸、氨基酸态氮和总氮含量分别为1.67 g/100 g、1.11 g/100 g和1.53 g/100 g,优于其他3种酶制剂组。添加复合蛋白酶和风味蛋白酶组的牛肉酱基质检出有机酸7种,提高了丙酸、酒石酸、苹果酸和琥珀酸的含量。在风味物质种类及含量方面,添加复合蛋白酶组检出67种,在酯类、醇类及酸类的种类和含量上比添加其他酶制剂组略有优势。     

不同蛋白酶对复合骨素酶解液呈味物质的影响

为研究不同蛋白酶对复合骨素（牛骨素和鸡骨素）酶解液呈味物质的影响,选取复合蛋白酶（P）、菠萝蛋白酶（B）和复合风味蛋白酶（F）,制备单一和组合酶解液,对酶解液肽分子质量分布、核苷酸含量、游离氨基酸含量等呈味物质指标进行综合评价。结果表明：P＋F组酶解液的水解度最大,酶解液中小分子质量肽（＜200 Da）分布比例最大;P＋F组酶解液的游离氨基酸含量最高,鲜味和甜味氨基酸是复合骨素酶解液的主要呈味成分;P＋F组的5’-核苷酸（5’-肌苷酸、5’-鸟苷酸、5’-腺苷酸）总含量较高。因此,复合蛋白酶和复合风味蛋白酶处理的复合骨素酶解液整体风味最佳。     

酶法水解卵黄蛋白制备多肽的工艺优化

利用酶法制备卵黄蛋白多肽。比较复合风味蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、复合蛋白酶水解卵黄蛋白的效果,确定碱性蛋白酶与复合风味蛋白酶为复合酶解的工艺用酶。采用响应面分析法,以水解度、多肽含量为响应值,研究加酶量、酶用量比、复合酶解时间比、pH值对制备多肽工艺的影响。结果表明：酶法水解卵黄蛋白制备多肽的最佳工艺条件为：卵黄蛋白质量浓度10g/100mL、温度55℃、pH7.2,按0.8g/100mL添加碱性蛋白酶水解2h后,再按0.4g/100mL添加复合风味蛋白酶水解2h,在该条件下水解度和多肽含量分别为(13.31±0.5)%和(1.85±0.5)mg/mL。     

蛋白酶处理对脱脂乳感官品质及游离氨基酸的影响

以新鲜脱脂牛乳为原料,采用分光测色仪、电子舌及氨基酸自动分析仪等分析酶解处理对脱脂牛乳感官品质、游离氨基酸含量及组成的影响。结果表明：经风味蛋白酶处理的脱脂牛乳水解度高,达到24.61%;蛋白酶处理会导致其感官性状的改变,与脱脂牛乳相比,3?种酶解产物L*值均显著（P＜0.05）下降,a*（负值）显著上升（P＜0.05）,风味蛋白酶处理对脱脂牛乳色泽影响大于碱性蛋白酶、复合蛋白酶处理;不同酶解产物滋味轮廓之间存在较大差异,与脱脂牛乳相比其甜味值下降显著,且随酶解时间延长,苦味值上升,甜味值衰退,碱性蛋白酶处理的酶解产物以涩味及涩味回味为主,风味蛋白酶的酶解产物以咸、苦味及苦味回味为主,复合蛋白酶的酶解产物以酸味为主,苦涩等味觉较低,电子舌能较好地区分不同酶解物的滋味差异;酶解处理可使脱脂牛乳中的游离氨基酸及必需氨基酸含量显著增加,苦味氨基酸为主要呈味氨基酸。酶解处理及酶解进程会使脱脂牛乳色泽、滋味及游离氨基酸产生变化,其中风味蛋白酶处理产生的影响大于碱性蛋白酶和复合蛋白酶处理。     

几种蛋白酶对文蛤肉的水解效果

在一定的酶解条件下,用Alcalase 2.4L、胰蛋白酶、复合风味酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶等几种蛋白酶对文蛤内进行水解,测定了这几种蛋白酶的水解度,以及其水解物的氨基态氮含量、可溶性蛋白含量和透明度,并用凝胶过滤色谱(Sephedex G-25)对水解物的分子质量分布进行了粗略分析。结果表明,Alcalase水解物分子质量的分布范围较广,适合制备具有一定肽链要求的短肽,酸性蛋白酶水解物分子质量较小,适合制备文蛤调味品,中性蛋白酶水解物分子质量主要集中在1 000 u左右与10 000u左右,胰蛋白酶和复合风味酶的水解物分子质量大部分在1 500 u以上。