蓖麻DNA的提取及SRAP反应体系的建立

为建立蓖麻快速有效的DNA提取方法和SRAP标记的技术体系,本研究采用SDS法和CTAB法对蓖麻不同叶片（新鲜嫩叶、老叶和陈旧的嫩叶、老叶）的基因组DNA进行提取,并以DNA模板用量、Mg^2＋浓度、引物浓度和Taq酶用量4个因素的不同水平配制了10个反应体系对蓖麻SRAP反应体系进行优化。结果表明,SDS法和CTAB法均可获得较高质量的DNA,多数样品的A260／A280值介于1．7～1．9之间,但以CTAB法更为省工省时,不同叶片DNA的提取效果,以嫩叶效果最佳;设计的10个反应体系中,以反应体系A（总体积为15μL,40ng DNA模板,1．5mmol／L Mg^2＋浓度,0．2mmoL／L dNTPs,0．3μmol／L引物浓度和1Unit Taq酶）最为经济适用,将该体系用于蓖麻的SRAP扩增能获得稳定、清晰的多态性条带。本实验为蓖麻的遗传多样性研究及目标性状的分析定位提供了技术支撑。     

新型植物油莎豆DNA提取与SRAP体系优化

以14个不同地理来源的油莎豆品系为实验材料,研究了油莎豆DNA快速提取方法;以SRAP反应体系中DNA模板量、Mg2＋浓度和引物浓度3个因子分别设置3个水平,共配制27个反应体系,对油莎豆SRAP反应体系进行优化。研究结果表明：改良CTAB法可获得较高质量的DNA,参试材料的A260/A280介于1.70～1.98;在27个SRAP反应体系（15μL）中,最优反应体系为DNA模板25ng、Mg2＋1.5mmol/L、引物浓度1μmol/L、dNTPs 0.3mmol/L和Taq酶1U,可扩增出清晰稳定的多态性条带。     

烟草靶斑病菌基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化

采用改良的CTAB法,对16个烟草靶斑病菌菌株进行基因组DNA的提取,所得的DNA样品的OD26o/OD280值在1.76～1.89之间,电泳主带清晰,无弥散、拖尾现象,DNA质量较高.通过单因素和正交设计结合的方法对影响RAPD-PCR反应的主要因子Mg2+,dNTP,引物的浓度和模板DNA,Taq酶的用量进行了优化,建立了适宜于病菌的RAPD分子标记的最佳反应体系.优化的反应体系为:模板DNA 10 ng,Mg2+浓度3.25 mmol/L,dNTP浓度0.175 mmol/L,Taq酶1.4 U,引物浓度0.5 μmol/L,反应体系总体积为25 μL.通过该反应体系可以获得清晰、稳定、特异性的分子标记谱带,扩增结果较好.     

桑黄DNA提取及RAPD反应体系的优化

以桑黄菌丝体为实验材料,采用CTAB法与SDS法提取DNA,并对RAPD反应体系进行优化。结果表明,应用CTAB法提取的DNA纯度和完整性较好,在此方法上建立了桑黄RAPD反应最佳体系(25μL):模板DNA1.0μL,引物0.8μL,dNTPs0.6μL,Taq聚合酶0.3μL,Buffer2.5μL,ddH2O19.8μL,并通过正交实验验证了该反应体系的稳定性和通用性。PCR扩增程序为:94℃预变性5min,94℃变性1min,40℃退火1min,72℃延伸1.5min,45个循环,72℃最终延伸5min。      

桑黄DNA提取及RAPD反应体系的优化

以桑黄菌丝体为实验材料,采用CTAB法与SDS法提取DNA,并对RAPD反应体系进行优化。结果表明,应用CTAB法提取的DNA纯度和完整性较好,在此方法上建立了桑黄RAPD反应最佳体系(25μL):模板DNA1.0μL,引物0.8μL,dNTPs0.6μL,Taq聚合酶0.3μL,Buffer2.5μL,ddH2O19.8μL,并通过正交实验验证了该反应体系的稳定性和通用性。PCR扩增程序为:94℃预变性5min,94℃变性1min,40℃退火1min,72℃延伸1.5min,45个循环,72℃最终延伸5min。     

烟草抗PVYN突变株SN01的SRAP—PCR反应体系的建立与优化

采用正交试验对烟草抗PVYN突变株SN01幼嫩叶片的SRAP-PCR反应体系中5个主要因素（dNTPs、Mg2＋、TaqDNA聚合酶、引物和DNA）进行了优化以建立合适的SRAP反应体系。结果表明,在20μL的反应体系中,各因素的最佳加入量分别是：dNTPs（2．5mmol／L）3．2μL、Mg2＋（25mmol／L）1．6μL、TaqDNA聚合酶（2．5u／μL）0．16μL、引物（10μmaol／L）0．6gL、DNA模板120ng。对该SRAP—PCR反应程序中的退火温度和循环次数筛选表明,最佳退火温度为57℃,循环次数为35次。该优化体系的建立,为进一步对烟草抗PVYN突变株SN01的抗病基因研究提供了可靠基础。     

导入马齿苋DNA的烟草D4代株系的SRAP分析

采用花粉管通道法将马齿苋DNA导入烟草,并经4次连续自交获得第4代材料(D4),选择其中32个株系进行SRAP纯度分析。结果表明:通过条件优化建立了烟草SRAP-PCR反应体系,即每10μL溶液中含有0.2mmol/LdNTP、20ng模板DNA、30nmol/L引物、0.5UTaq聚合酶和2mmol/LMgCl2;最佳复性温度和循环次数分别为53℃和35次;选用118对引物组合构建了烟草D4代的指纹图谱,其中不同引物组合产生的DNA片段数目在10～30之间,大小分布于100～700bp,且共扩增出1052条扩增产物,其中10条带表现出多态性,多态性比率仅为0.95%,说明使用SRAP标记检测烟草后代纯度是可行的。     

烟草SSR反应体系的优化

以烤烟品种NC2326、G28及其F1为材料,研究了烟草SSR分析中PCR反应体系的主要成分对SSR扩增结果的影响。结果表明:在总体积为20μL的PCR反应中,含20ng模板DNA,1.5U TaqDNA聚合酶,MgCl2终浓度为1.5mmol.L-1,dNTPs浓度为200μmol.L-1,引物浓度为0.25μmol.L-1时效果较好。     

烟草RAPD反应体系优化及品种多态性标记研究

利用鲜烟叶材料对RAPD反应体系进行了优化,建立了一个适合烟草的比较稳定的RAPD反应体系,并对影响RAPD反应的主要因素进行了探讨.利用该稳定体系,对具有两对相对性状差异的两个烤烟品种进行了多态性标记研究,从500个引物中筛选到4个有多态性的引物,这4个引物扩出的多态性片段可作为鉴定两个品种的分子标记.初步分析认为,两个品种的多态性标记可能与香气性状和抗病性状连锁.     

酒酒球菌基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化

以酒酒球菌SD-2a为试验材料,研究了酒酒球菌基因组DNA的提取方法,对影响RAPD-PCR反应体系的主要因素进行了优化,最终建立了适合于本实验室的RAPD反应体系.结果表明,采用改良的传统细菌基因组DNA提取方法,所提取的DNA质量较高,能够满足RAPD反应的需要;建立的RAPD-PCR反应体系为:25μL反应体积、1.0 UTaq酶、160 μmol/L dNTP、0.4 μmol/L随机引物、3.0 mmol/L Mg2+、10 ng的DNA模板用量;PCR反应程序为:94℃变性300 s,1个循环;94℃变性60 s,36℃退火60 s,72℃延伸90 s,45个循环;72℃延伸300 s.     

烟草AFLP分析体系的建立与优化

以10份烟草种质资源为试材,对AFLP分析过程中包括DNA的提取质量和浓度、MseⅠ/EcoRⅠ以及T4DNA连接酶的浓度、反应时间和反应温度、以及其反应体系的组成等影响因素进行了研究。建立了一种适于烟草AFLP银染技术的优化体系。该体系中各优化因素为模板DNA的用量为400 ng,酶切体系中MseⅠ和EcoRⅠ各加入4U,T4DNA连接酶加入2.8U,采用酶切与连接在同一体系中一步完成,其酶切连接温度为37℃,反应时间为7 h。并对预扩增、选择性扩增和银染的效果进行了检测,以引物E-ACT/M-CAC构建了烟草种质资源的AFLP指纹图谱,该图谱扩增带多,多态性强,且质量好。      

不同热处理方法对鲤鱼DNA的影响及不同DNA提取方法的比较

目的研究不同加热方法处理后鲤鱼基因组DNA长度和含量的变化,并对4种DNA提取方法进行比较。方法用电磁炉和微波炉将鲤鱼背部肌肉加热煮沸1、2、3 h取出,再分别用酚氯仿法、Wizard试剂盒法、磁珠法和离心柱法提取处理前后鲤鱼基因组DNA,利用琼脂糖凝胶电泳对处理前后的总DNA长度进行比较,再用实时荧光定量PCR法检测所得DNA样品中内参基因β-actin含量的变化。结果琼脂糖凝胶电泳结果显示,处理后DNA片段明显降解。生鱼肉提取β-actin的量为1 070 213.39拷贝/μl,电磁炉处理1、2、3 h的浓度分别为143 309.6、441 350.43和256 994.16拷贝/μl,微波炉处理1、2、3 h的浓度分别为269 121.17、267 371.16和134 649.97拷贝/μl。酚氯仿法、Wizard试剂盒法、离心柱法和磁珠法提取的平均DNA浓度分别为718 944.93、737 945.64、26 751.22和2 934.06拷贝/μl。结论加热煮沸导致DNA降解,因此加工食品中DNA的检测应当选择较短的目标片段。4种DNA提取方法比较,Wizard试剂盒法和酚氯仿法提取的D...     

适于PCR分析的烤后烟叶DNA提取方法的研究

以８ 种方法提取烤后烟叶ＤＮＡ,测定其浓度和纯度,结合叶绿体不编码蛋白序列和３５Ｓ启动子序列的ＰＣＲ扩增结果来分析评价提取ＤＮＡ 的质量,同时讨论了这些提取方法的可靠性及所提取ＤＮＡ 的纯度和产量。     

烤后烟叶SSR反应体系的优化研究

以烤烟RG11品种为原料,研究烤后烟叶简单重复序列(SSR)分析中聚合酶链式反应(PCR)体系各主要因素及其之间的相互作用对SSR扩增的影响,结果表明:烤后烟叶SSR-PCR反应最佳体系为20μL体系中含35 ng模板DNA,1.5 U TaqDNA聚合酶,2.375 mmol/L MgCl2,0.6 mmol/L dNTPs和0.4μmol/L引物.     

普洱茶发酵过程中微生物总DNA提取方法的比较

为了快速提取普洱茶发酵过程中微生物总DNA,便于分析微生物群落的多样性及演替情况,对比研究了总DNA提取的四种方法-酶法、试剂盒法、超声波法和变性剂法,以16S rRNA区域通用引物(27F和1492R)和18S rRNA区域通用引物(NS1和NS8)对四种方法提取的总DNA分别进行扩增,根据总DNA提取的大小、产量、纯度和PCR扩增产物进行评估。综合各项指标来看,总DNA提取方法以变性剂法为优,其次是试剂盒法、超声波法和酶法。     

烟草香味成分的超高压萃取

为了快速高效地萃取烟草香味成分,进行了烟草香味成分的超高压萃取(UHPE)试验,并利用响应面分析法对萃取参数进行了优化。结果表明:烟草香味成分的最优UHPE条件为萃取压力380MPa、保压时间20min、萃取溶剂75%乙醇,液料比15,在此条件下,香味成分萃取总量理论值180.9μg/g,验证值179.8μg/g。     

烟叶烘烤过程中的酶促棕色化反应及其调控途径

分析了烘烤过程中酶促棕色化反应发生的机理和影响酶促棕色化反应的内、外因素，提出了酶促棕色化反应的调控途径     

烟草生产专家系统的构建

研究以专家系统基本原理为基础,将烟草种植理论和实用技术、计算机网络技术进行了系统集成,构建了知识面较为完整的网络化烟草生产专家系统。本文介绍了该专家系统的构建方法,包括专家系统总体结构、知识点的划分、知识库建立等内容,并以营养诊断为例着重介绍了规则库的建立、推理机的设计和网络化的表现形式。