黑曲霉纤维素酶的特性研究

在黑曲霉突变株ＤＭ－１所产生纤维素酶中，β－葡萄糖苷酶活力较高。采用固体发酵培养，其滤纸酶活和β－葡萄糖苷酶分别为９５和１２００ｍｇ葡萄糖／ｇＤＭｈ。本试验系统研究了该酶的固体发酵培养过程，最适反应温度，热稳定性，最适反应ｐＨ以及ｐＨ对酶稳定性的影响，为该酶在酿造行业中的广泛应用提供参考依据。     

青霉菌α-葡萄糖苷酶固体发酵及酶学特性的研究

研究青霉菌种P1固体培养生产α-葡萄糖苷酶的发酵条件,固体培养条件下培养基中碳源、氮源及添加物对青霉P1产α-葡萄糖苷酶的影响以及青霉P1产α-葡萄糖苷酶的最适温度、pH、热稳定性及pH稳定性等酶学特性。     

里氏木霉固体发酵生产纤维素酶的研究

里氏木霉突变株RM—27是一株高产纤维素酶生产菌,采用固体发酵,发酵144h(培养温度29℃),其滤纸酶活和β—葡萄糖苷酶活分别为600和115mg葡萄糖/gDMh。本试验系统研究了各种营养成份和培养条件对RM-27菌株产纤维素酶的影响。最适发酵培养基:稻草杆或小麦杆70g、麸皮30g、硫酸铵3.0g、玉米浆2.0g,加水200ml,自然pH。酶反应最适温度和pH分别为60—65℃与pH5.0。酶pH稳定性较好,在pH3.0—7.0范围内处理3h,残余酶活力在89％以上,该酶经50℃处理30min,剩余酶活力为85.6％。     

产β-糖苷酶菌株的筛选及酶活的研究

利用对硝基苯酚-β-D-葡萄糖苷为底物筛选酿酒酵母菌,得到1株高产糖苷酶的酿酒酵母菌。以该菌株作为实验菌株,研究该菌株的酶活特性,对酿酒酵母菌酶活性测定条件进行研究。通过单因子试验,确立了该菌株发酵对硝基苯酚-β-D-葡萄糖苷酶的最适培养条件：pH4．0,温度为40℃,发酵时间为6h。高浓度的葡萄糖、果糖对酶活没有抑制作用,酒精度超过14％vol时对产酶有抑制作用。     

米曲霉FZ58固体发酵β-葡萄糖苷酶条件优化及酶学特性研究

对米曲霉FZ58β-葡萄糖苷酶固体发酵培养基进行优化,确定最适碳源为甘蔗渣、氮源为黄豆饼粉、固液比为1：3。对FZ58固体发酵的产酶条件优化结果如下：发酵初始pH自然,发酵温度36℃,发酵周期为120h。酶学特性研究表明：酶最适作用温度是60℃,最适作用pH为5．0。     

米曲霉FZ58固体发酵β-葡萄糖苷酶条件优化及酶学特性研究

对米曲霉FZ58β-葡萄糖苷酶固体发酵培养基进行优化,确定最适碳源为甘蔗渣、氮源为黄豆饼粉、固液比为1：3。对FZ58固体发酵的产酶条件优化结果如下：发酵初始pH自然,发酵温度36℃,发酵周期为120h。酶学特性研究表明：酶最适作用温度是60℃,最适作用pH为5．0。     

Bacillus altitudinis SYBC hb4碱性β-葡萄糖苷酶基因的克隆表达及酶学性质的研究

为获得耐碱性β-葡萄糖苷酶,进一步研究碱性β-葡萄糖苷酶的酶学性质。从实验室已有蜂蜜中筛选出一株耐碱性的高地芽孢杆菌Bacillus altitudinis SYBC hb4,根据Bacillus altitudinis SYBC hb4中β-葡萄糖苷酶(bglA)基因序列设计一对引物,通过PCR扩增技术,获得β-葡萄糖苷酶基因(bglA),将扩增后的bglA与质粒pColdII构建重组表达载体pColdII-bglA,并转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中表达。重组表达的β-葡萄糖苷酶酶活可达12.40 U/mL;该重组β-葡萄糖苷酶最适反应温度为60℃;最适反应pH值为pH 8.0;5 mmol/L的Mg~(2+)可使酶活提高50%左右。本实验所获得的碱性β-葡萄糖苷酶比已报道的重组酶在碱性条件下稳定性更好。     

从长白山阔叶林中筛选β-葡萄糖苷酶产生菌及其酶学性质研究

利用马丁氏培养基富集、PDA培养基纯化和七叶灵培养基显色,从长白山阔叶林中初步筛选出6株产β-葡萄糖苷酶的真菌。对真菌发酵生成的β-葡萄糖苷酶进行提取和纯化,测得10号菌株的β-葡萄糖苷酶活力最高为18.34 U/mL,形态学和分子学结合方法鉴定该菌株为草酸青霉(Penicillium oxalicum)。该菌株所产β-葡萄糖苷酶最适反应温度约为55℃,在温度30、40℃和50℃时较为稳定。最适反应pH值约为5,在pH值为5~6之间相对较稳定。Cu~(2+)对酶活力有较强的抑制作用,而Ag~+有较强的激活作用。     

产大豆异黄酮β-葡萄糖苷酶菌株的筛选及酶学性质研究

从自然发酵酱醅中筛选到一株产大豆异黄酮β-葡萄糖苷酶的菌株MT-0204,通过生理生化反应和分子生物学技术鉴定其为黑曲霉。大豆异黄酮β-葡萄糖苷酶最适pH值在5.0～5.5之间;具有热敏性,45℃时酶活最高;K 、Ca2 、Fe2 、Mg2 和Mn2 可以提高该酶活性,Ag 和Hg 强烈抑制该酶的活性;Km值Vmax值分别是22.47mmol/L和5.2mmol/min·mg。     

β-葡萄糖苷酶活性测定方法的研究进展

介绍了葡萄和葡萄酒中β-葡萄糖苷酶的研究概况，理化性质、酶活测定方法，以及不同来源的酶活检测的研究概况，并且经过分析提出以对硝基苯基β-D-葡萄糖苷（pNPG）为底物检测葡萄浆果中的β-葡萄糖苷酶酶活的关键影响因素：粗酶液的制备、酶最适反应温度、最佳反应时间、缓冲液类型和pH及最佳吸收波长。     

几株植物乳杆菌β-葡萄糖苷酶的特性研究

通过比色法测定酶活,比较5株植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）产β-葡萄糖苷酶的特性,对胞内β-葡萄糖苷酶最佳反应pH和温度进行了研究,考察了氯化钠及乙醇对β-葡萄糖苷酶活性的影响。结果表明,5株植物乳杆菌都可以产生胞内β-葡萄糖苷酶,其中比酶活最高的为菌株W-4（14.168 U/g）,其次是菌株Y-12（13.015 U/g）,之后分别是菌株Y-20（11.359 U/g）、菌株1.3919（7.029 U/g）及菌株Y-22（4.630 U/g）;植物乳杆菌W-4和1.3919还可以产生胞外酶;菌株W-4的胞内β-葡萄糖苷酶的最适反应pH为4.0～4.5,菌株Y-12的最适pH为4.5,菌株Y-20和1.3919的最适pH为5.5,菌株Y-22的最适pH为5.0;菌株W-4、Y-20、Y-22及1.3919的最适反应温度均为30 ℃,而菌株Y-12的最适反应温度为37 ℃。不同含量的氯化钠和乙醇对5株植物乳杆菌的β-葡萄糖苷酶活性具有一定的抑制作用,且浓度与抑制作用呈正相关。     

诱导少孢根霉分泌胞外β-葡萄糖苷酶条件的研究

对少孢根霉在液态发酵后产生的β-葡萄糖苷酶最大酶活时最适工艺条件进行了研究。研究结果表明以吐温-80、吐温-20、曲通-x、聚乙烯醇、V_c、醋酸钠和EDTA作诱导剂,以吐温-80的效果最佳,使用量为100μL/ 100mL时获得最大酶活;麸皮、葡萄糖、乳糖、麦芽糖、玉米粉作碳源,以麸皮的产酶效果最佳,2%的麸皮使用量获得最大酶活。少孢根霉产β-葡萄糖苷酶最适发酵工艺条件:接种量2%少孢根霉在75mL黄豆芽液体培养基中,加2%的麸皮、调发酵培养基的初始pH值6.0,再加100μL/100mL诱导剂吐温-80,于35℃培养48h。     

同步辐射对黑曲霉β-葡萄糖苷酶产生条件及酶学性质的影响

本实验对出发菌黑曲霉M85和经软X射线Nk同步辐射所得突变株(产β-葡萄糖苷酶)的营养条件、培养条件和产酶动力学进行了比较,并研究了两菌株β-葡萄糖苷酶的酶学性质.实验结果表明,与出发菌相比,突变株在营养需求、培养条件、产酶动力学和产物的酶学性质都有所改变.突变株的氮源谱更宽,对KH 2PO4的需求从0.2%降为0.1%;培养条件实验表明突变株需氧量增加;突变株发酵周期缩短了16h,产酶能力提高了约80%;突变株β-葡萄糖苷酶的最适反应温度从60℃降为50℃,最适反应pH由4升为5.     

窖泥中产纤维素酶菌株的筛选鉴定及产酶特性的研究

纤维素酶能够把纤维素降解成可发酵性糖,在许多工业领域有着广阔的应用价值。以窖泥为材料,采用传统平板法对产酶菌株进行筛选,获得一株产纤维素酶系齐全、活性强的菌株XWS-A,经16S rDNA分子生物学鉴定,结果表明该菌株为枯草芽孢杆菌。在液态条件下,对该菌株产酶特性进行研究发现,产内切β-葡聚糖酶最佳条件为温度35℃,培养基初始pH5.5,培养时间72 h;产外切β-葡聚糖酶最佳条件为温度35℃,培养基初始pH6.0,培养时间72 h;产β-葡萄糖苷酶最佳条件为温度40℃,培养基初始pH6.0,培养时间72 h。进一步对其酶学性质进行研究,结果表明:内切β-葡聚糖酶最适反应温度是50℃,最适反应pH为5.5;外切β-葡聚糖酶最适反应温度是50℃,最适反应pH为6.0;β-葡萄糖苷酶最适反应温度是50℃,最适反应pH为6.0。     

耐高温β-葡聚糖酶产生菌株的筛选及酶学性质的研究

从云南安宁温泉周围土壤中筛选到1株热稳定性能较好的β-葡聚糖酶产生菌W-9.其发酵条件及酶学特性为:发酵 72h,在pH6.0、70℃条件下,酶活性为82.64u/mL.分子生物学及其生理生化鉴定,该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).W-9产β-葡聚糖酶的酶学性质结果显示,其产β-葡聚糖酶的最适反应pH为6.0,最适反应温度为70℃,在70℃条件下保温时,酶活基本稳定.     

酿酒条件对两株商业酿酒酵母β-葡萄糖苷酶的影响

研究酿酒条件(氧气、pH值、温度、糖和乙醇等)对两株商业酿酒酵母β-葡萄糖苷酶的影响。结果显示:氧气促进酵母β-葡萄糖苷酶的合成,两株商业酿酒酵母完整细胞的β-葡萄糖苷酶最适pH值为5.0,最适温度为60℃,果糖、葡萄糖和蔗糖对两株酿酒酵母完整细胞的β-葡萄糖苷酶活性具有轻微抑制作用,乙醇(体积分数2%~20%)促进β-葡萄糖苷酶的酶活力。在葡萄酒发酵过程中,β-葡萄糖苷酶主要存在于完整细胞和透性化细胞中,上清液中酶较少。     

黑曲霉ZJ1摇瓶发酵产β-葡萄糖苷酶的研究

本文研究了黑曲霉ZJ1发酵产 β -葡萄糖苷酶的发酵条件及 β -葡萄糖苷酶的酶学性质。结果表明 :黑曲霉摇瓶发酵产 β -葡萄糖苷酶的培养基组成为 (g/L) :稻草 5 0 ,麦麸 15 ,大麦粉 15 ,(NH4) 2 SO410 ,KH2 PO40 .5 ,MgSO4·7H2 O 0 .5 ,起始pH 5 .0。产酶条件为 :培养温度 2 8℃ ,转速为 2 0 0r/min ,当培养时间为 14 4h ,β -葡萄糖苷酶活性达到最大。β -葡萄糖苷酶的最适作用温度为 5 0℃ ,在 4 0℃时热稳定性较好 ;β -葡萄糖苷酶的最适反应pH为 5 .5 ,在pH 3.0～pH 8.0之间较稳定 ;Zn2 、Al3 、Ca2 和Mn2 对 β -葡萄糖苷酶酶促反应均有一定的促进作用。     

黑曲霉β-葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质研究

利用硫酸铵盐析、季氨乙基-琼脂糖凝胶FF（Q-Sepharose FF）离子交换层析、苯基-琼脂糖凝胶6 FF（Phenyl-Sepharose 6 FF）疏水层析和丁基-琼脂糖凝胶HP（Butyl-Sepharose HP）疏水层析对黑曲霉来源β-葡萄糖苷酶进行分离纯化,采用十二烷基硫酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）测定其分子质量,并对其酶学性质进行研究。结果表明,经分离纯化后得到分子质量约为116 kDa的β-葡萄糖苷酶,纯化倍数达到50.39倍,回收率为4.65%,比酶活为103.80 U/mg,该β-葡萄糖苷酶的最适反应温度为60 ℃,最适反应pH值为5.0,在温度30～50 ℃,pH 2.0～8.0之间具有较好的稳定性。     

交联β-葡萄糖苷酶聚集体的制备及其性质

交联酶聚集体法是一种新型的无载体酶固定化方法。本实验用该法固定化黑曲霉β-葡萄糖苷酶,对其制备条件、结构特征、酶学性质进行了研究。结果表明,β-葡萄糖苷酶酶液在冰水浴中经90%的硫酸铵沉淀30min后,以5%戊二醛水溶液进行酶聚集体交联反应,可获得较高活性的交联酶聚集体,酶活回收率达75%,对对-硝基苯基-β-D-葡萄糖苷作用的最适温度、最适pH值和Km值分别为60℃、pH4.0和4.61×10-3mol/L,与游离酶相比,表现更高的底物亲和力。将其用于大豆异黄酮活性苷元染料木素的合成,40min内对染料木苷转化率达到66%。     

重组β-葡萄糖苷酶基因和内切葡聚糖苷酶基因在大肠杆菌中的共表达

β-葡萄糖苷酶和内切葡聚糖苷酶是纤维素酶的重要组分,多基因的共表达在各领域有重大的应用价值,本研究利用pET32a和pET30b两个载体的不同抗性的特性,在大肠杆菌中将β-葡萄糖苷酶基因和内切葡聚糖苷酶基因,实现了不相容性共表达,获得了产两种酶的工程菌,酶活力可达1196.8U/mL。比单一酶组分的酶活力高,酶学性质分析显示共表达酶的最适反应pH为6.0,最适反应温度60℃,在pH5⁷范围内能保持较高活性,酶活可达最高酶活的80%以上,在30⁶0℃范围能有较高的温度稳定性,酶活维持在80%以上。这一结果将为工业应用的进一步研究提供理论基础。