实时荧光PCR检测鸭血中的动物源性成分

目的建立实时荧光PCR检测鸭血中鸭、猪、牛等动物源性成分的方法。方法对重庆市火锅店销售的鸭血进行采样检测。提取鸭血样品DNA,进行实时荧光PCR检测,确定循环阈值,分析样品中鸭、猪、牛源性成分。结果 DNA提取液OD_(260 nm)/OD_(280 nm)值为1.8～2.0,纯度较高; 8个市售鸭血样品中2个样品只检出猪源性成分, 1个样品同时检出鸭源性成分和猪源性成分,研究发现所采集的鸭血存在猪血掺假的可能。结论该方法快捷、可操作性强,适用于鸭血中动物源性成分的测定。     

临沂市鸭血制品动物源性成分检测及掺假分析

检测临沂市居民日常消费鸭血制品的动物源性成分,对临沂市2021年销售的鸭血制品进行抽样检测.提取鸭血样品的DNA,进行PCR检测,分析样品中鸭、鸡、猪、鹅、牛、火鸡、鸵鸟、狐狸、狗、兔子、貂、水貂、驴源性成分.53批市售鸭血样品中1批检测出鹅源性成分,1批检测出牛源性成分,结果表明抽检的鸭血样品中存在鹅血和牛血掺假的现...     

普通PCR与实时荧光PCR两种方法研究鸭血中的鸭源性成分

本研究采用普通PCR与实时荧光PCR两种方法对山东省菏泽市市售鸭血中的鸭源性成分进行检测,发现两种方法在检验结果上存在一致性.     

液滴数字PCR定量检测鸭血制品中掺假成分

鸭血制品作为市场常见商品,掺假现象十分严重。选取鸡、鸭、鹅基因组中的特异性单拷贝基因为靶基因,设计引物和探针,建立鸡、鸭、鹅血微滴数字PCR定量检测方法。使用人工混合样品对该方法的准确性进行验证,同时通过检测市售样品来验证方法的适用性。实验结果表明,样品含量在1~1000 μg/mg时,靶基因拷贝数与样品质量之间具有良好的线性关系,检测限和定量限分别为5 μg/mg和1 μg/mg。通过人工混合样品和市售样品检测证明,该方法具有良好的准确性和适用性,可用于对鸡、鸭、鹅血制品的定量检测。     

实时荧光PCR法检测肉制品中猪源性成分

目的S建立一个高特异性和高灵敏度的有效检测猪源性成分的检测方法。方法S以猪雌激素受体基因设计合成一对特异性引物,采用液氮研磨结合试剂盒抽提的方法提取猪肉中的DNA,分别以300S,30S,3S,0.3S和0.03Sng为模板量进行梯度反应,基于荧光定量PCR技术(SYBR法)建立检测方法。结果S以Ct值作为纵坐标,以lgXS(X为DNA的量,ng)的值作为横坐标,得到标准曲线方法Ct=30.473-3.542lgX,SR2=0.9997;该方法的检测灵敏度达到2 Spg。结论S该猪源性成分检测方法简单快捷,特异性和重复性好,灵敏度高,可作为市场监督和检测鉴定的可行性方法。     

鱼翅制品中鲨鱼源性成分的实时荧光PCR检测方法 Key words:

本研究通过鲨鱼线粒体基因组的部分序列,设计了鲨鱼的特异性引物和探针,建立了鱼翅制品中鲨鱼源性成分检测的一种新方法,据此可鉴别鱼翅制品的品质。通过物种特异性实验和灵敏度测试,表明所设计的引物和探针具有较好的物种特异性,所建立的方法具有较高的灵敏度：DNA浓度的检测灵敏度可达0.01 ng/?L,重量检测灵敏度可达0.1%（m/m）。采用该方法并结合植物源性基因检测方法对市场上随机抽取的25份鱼翅制品进行检测,其中18份样品检出鲨鱼源性成分而未检出植物源性成分,7份样品未检出鲨鱼源性成分而检出植物源性成分,表明这7份样品不是真鱼翅制品,而是采用了植物成分仿制而成。本研究所建立的方法快速、灵敏、简单,适用于市场上鱼翅制品中鲨鱼源性成分的快速检测。     

实时荧光PCR法检测明胶的牛、猪源性成分

为了快速准确鉴别明胶的动物源性,根据线粒体DNA基因COX I(cytochrome coxidase subunit I)的种间多态性差异合成特异性引物及探针,通过实时荧光PCR技术扩增与识别特异性基因片段.运用明胶牛、猪源性成分的荧光PCR检测方法并进行特异性、检出限、重复性实验.结果显示:该方法能够快速准确检测明...     

探讨《驴成分检测实时荧光PCR法》标准中检出限的合理性

目的探讨SN/T3730.4-2013《食品及饲料中常见畜类品种的鉴定方法第四部分:驴成分检测实时荧光PCR法》标准中检出限规定的合理性。方法参考SN/T 3730.4-2013提供的引物及探针序列,采用实时荧光PCR检测方法鉴别市场抽检驴肉的真伪性。结果 Ct值在25~35之间的样品按照SN/T 3730.4-2013标准规定应判为检出驴成分,但通过对上述样品用马源性引物进行扩增和测序得知样品为马肉而非驴肉。结论建议标准应根据不同的检验对象制定不同的检出限,从而降低出现假阳性的概率。     

实时荧光PCR技术快速检测莲蓉制品中芸豆成分

目的:建立基于实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测莲蓉制品中芸豆成分的方法。方法:以芸豆pvsbe2基因高度保守区域设计特异性引物和探针,通过对莲子及其他富含淀粉类植物DNA进行扩增,以验证方法的特异性;以1 ng/μL的芸豆DNA进行系列稀释,确定此法检测灵敏度;对含有1%芸豆与莲子的混合样品的DNA模板进行10倍梯度稀释,确定重量检测灵敏度;并应用此方法和PCR方法对市场样品进行了检测,对建立的荧光PCR方法进行验证。结果:该检测方法具有高度特异性,与莲子及其他高淀粉植物无交叉反应;DNA质量浓度的检测灵敏度达到1 pg/μL,重量检测灵敏度可达0.01%。含芸豆成分的莲蓉月饼扩增阳性,检测结果与食品标签相符。结论:本研究建立的实时荧光PCR方法具有特异性强、灵敏度高、快速简便的特点,更适合莲蓉制品中芸豆成分的快速检测。     

实时荧光PCR检测饲料中鸭源性成分

根据GenBank中的鸭线粒体DNA基因片段序列,用Primer6.0软件设计针对鸭的特异性扩增引物及探针,建立一种检测鸭源性成分的实时荧光PCR方法.以鸭、鸡、鹅、牛、羊、猪、马、鸽、水貂、鱼、猫肌肉组织DNA进行实时荧光PCR反应,只有鸭具扩增曲线,其余样品和空白对照则无扩增曲线,说明该引物及探针只对鸭有特异性.对不同含量的鸭肉粉进行实时荧光PCR反应,结果表明灵敏度约为0.01％(质量分数).     

实时荧光PCR法检测奶制品中常见谷物成分

建立Taqman实时荧光PCR法对奶制品中掺加物大米、玉米、小麦、高粱、大麦等谷物源性成分的初筛检测体系。方法 以常见掺加物大米、玉米、小麦、高粱、大麦等谷物的叶绿体rbcL基因作为靶基因,通过BLAST软件比对,选择其同源保守区域设计引物和探针。经通用性、特异性、灵敏性试验对探针和引物可行性进行验证,并通过模拟含谷物奶粉及市售奶类制品检测对其实际检测能力进行验证。结果 所建立体系可扩增大米、玉米、小麦、高粱、大麦等常见的谷物掺加物的DNA提取物,与市售奶制品的主成分牛奶、羊奶以及其常见添加物香蕉、红枣、菠萝、草莓、西红柿、花生、大豆等动植物源性成分无交叉扩增(Ct＞35)。对小麦纯DNA提取物检出限为0.01ng。对分别掺加5种谷物成分的模拟奶制品检出限均可达0.5%,对市售的14份奶类食品中的谷类成分的检测结果均与食品标签相符。结论 本研究建立的Taqman实时荧光PCR体系具有通用、相对特异、灵敏、实用等优点,可用于奶制品中掺加或掺杂掺假谷物源性成分的快速定性检测。     

GNM C7-8实时荧光PCR系统对掺假肉制品中多种动物源性成分的同时检测

应用GNM C7-8实时荧光PCR系统,同时快速检测掺假肉制品中多种动物源性成分。将牛肉粉、驴肉粉、鸵鸟肉粉和羊肉粉4组不同肉粉中分别混入猪肉粉、鸭肉粉、马肉粉、鸡肉粉和狐狸肉粉中的2~3种肉粉,制备人工模拟掺假肉制品。通过GNM C7-8实时荧光PCR和ABI7500荧光PCR方法,对上述四种掺假肉制品进行多种动物源性成分检测和比较。结果表明,GNM C7-8实时荧光PCR方法与ABI7500荧光PCR方法从掺假肉制品中检测猪、鸭、马、鸡和狐狸5种成分的循环数一致,分别是31、31、29、32和25,但基于八模块设计的GNM C7-8实时荧光PCR方法能同时检测四种掺假肉制品中不同动物源性成分,检测时间更短。因此,GNM C7-8实时荧光PCR系统的八个模块能够独立运行,互不干扰,无交叉污染,能够实现对掺假肉制品中多种动物源性成分的同时快速检测,为肉制品掺假检测提供强有力的方法支持。     

实时荧光PCR定量检测肉制品中猪源性成分

为了准确可靠地对肉制品中猪源性成分进行定量检测,通过生物信息学方法筛选到猪细胞核单拷贝基因(carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 2-like,CACA).以CACA基因为扩增靶标,设计了特异性引物、TaqMan探针,建立了基于实时荧光定量PCR...     

利用实时荧光定量PCR法检测食品中鹌鹑源性成分

为建立基于TaqMan实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术在食品中的鹌鹑源性成分的定量检测方法,根据现行检验检疫标准(SN/T 2727-2010)合成引物及探针。首先对13种不同动物鲜肉组织的DNA进行鹌鹑源性成分特异性检测,然后对鹌鹑源性DNA模板原液进行梯度稀释,检测方法灵敏度,最后在加工制品中检测方法的适用性。研究结果表明:建立的方法特异性强,除鹌鹑肉外,牛、羊、猪、马、驴、狗、兔子、鸡、鸭、鸽子、火鸡、鱼12种动物鲜肉组织均无特异性扩增;方法的灵敏度较高,鹌鹑组分DNA的检出限可达10 fg/mL,灵敏度可达0.001%;方法的适用性较广,可以用于加工制品中鹌鹑源性成分的检测。     

实时荧光PCR法检测芝麻酱中的芝麻成分

利用实时荧光PCR法检测芝麻酱中的芝麻源性成分,以鉴定预包装产品的真伪。选取3份市售芝麻酱产品,其中1份标示不含芝麻成分,利用荧光定量PCR法进行检测。结果显示该法检测结果与产品标签相符,建立的检测方法可行。     

SYBR Green实时荧光PCR检测食品中鲨鱼源性成分真实性方法的建立

为确保鲨鱼产品的真实性,作者研究建立了食品中鲨鱼源性成分的SYBR Green实时荧光PCR鉴定方法.运用建立的SYBR Green实时荧光PCR方法对9种鲨鱼及48种常见非鲨鱼类动植物样品进行检测,9种鲨鱼样品均出现扩增曲线,且熔解曲线在(84±1.5)℃内出现峰值;其他非鲨鱼样品中均未出现扩增曲线,熔解曲线在(84±1.5)℃也未出现峰值.该检测方法的检测限为0.0001 ng/μL鲨鱼DNA和质量分数0.01％狗鲨肉粉.运用建立的方法对20种常见的鲨鱼产品进行PCR检测,除仿鱼翅和鲨鱼肝油外所有产品中均能检测出鲨鱼成分.结果表明,该检测方法特异性强,灵敏度高,能够用于食品中鲨鱼源性成分的真实性鉴别.     

实时荧光PCR定量测定肉制品中羊源性成分

为准确定量肉制品中羊源性成分的含量,以羊单拷贝基因为扩增靶基因,设计合成羊源的引物、探针,制备羊源和脊椎动物通用基因的重组质粒以构建标准曲线,通过方程算出各自的拷贝数,根据拷贝数的比值计算样品中羊肉源成分占总肉成分的百分比含量,建立荧光定量PCR检测体系,并对已知目标肉含量的混合肉样进行定量检测。结果显示,该方法具有良好的特异性和灵敏度,最低检测到羊的DNA含量为0.02 ng/μL。对已知目标肉含量的混合肉样进行定量检测发现,羊肉掺入量为90%、50%时所得结果相对准确,相对标准偏差分别为5.69%和10.82%, 且不受外源物种的干扰。本试验建立的定量PCR方法能够准确检测出不同样品中羊肉的含量,并发现存在掺假现象。     

微滴式数字PCR与实时荧光PCR检测羊肉制品中羊源和猪源性成分方法的比较

参考外文文献中羊肉和猪肉的特异性引物及TaqMan探针,分别建立一种定量检测羊肉制品中羊源和猪源性成分的微滴式数字PCR方法,并将该方法与标准SN／T 2051－2008中实时荧光PCR方法做对比来检测3份羊肉制品中的羊源和猪源性成分。结果表明,实时荧光PCR方法检测5号、9号、23号样品中的羊源性成分的Ct值分别是14?424／19?214、18?345／20?147、17?321／20?542;猪源性成分的 Ct 值分别是18?923／34?483、20?121／28?963、20?352／33?851;微滴式数字PCR方法检测5号、9号、23号样品中的羊源和猪源性成分的DNA拷贝数分别为236／0 copies／μL、421／0?3copies／μL、402／0?11copies／μL。表明两种方法均能检出3份样品中均含有羊源和猪源性成分,而微滴式数字PCR方法能够对DNA模板定量分析。结论：在肉种成分真伪鉴定上,微滴式数字PCR方法较实时荧光PCR方法更科学、准确。     

实时荧光PCR法与环介导等温扩增法检测食品中动物源性成分的比较

目的比较实时荧光PCR(real-time PCR)法及环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测食品中动物源性成分,为食品安全监管部门动物源性成分鉴定提供准确、高效的检测方法。方法采用实时荧光PCR法及LAMP法分别对市售肉及其制品进行牛、猪和鸡源性成分鉴定,并与标签明示的肉源成分比对,以准确性和时效性2个指标对上述2个方法进行评价。结果 Real-time PCR法检出4份样品与标签明示肉源不符,LAMP法检出5份样品与标签明示肉源不符,而16份样品中仅有1份样品2种方法检测结果不同。Real-time PCR法检测用时1.5 h,提取检测用DNA用时1.5 h,总用时3 h;而LAMP法检测用时45 min,提取检测用DNA用时20 min,总用时65 min。结论 LAMP法与Real-time PCR均具有较好的特异性、准确性,但LAMP法耗时短、成本低、操作简单,便于现场快速监督抽检。     

肉制品中鸭源性成分的实时荧光PCR检测

目的：建立基于实时荧光PCR技术的鸭源性成分的快速检测方法。方法：以鸭线粒体DNA序列为目的基因,设计并筛选了鸭源性特异性引物及探针,进行荧光定量PCR扩增,建立鸭源性成分检测方法。通过特异性、灵敏性、及盲样检测试验,对该体系进行验证。结果：该方法能够快速有效的检测鸭源性成分,具有较强的特异性及灵敏性,灵敏度约为0．01％（质量分数）;通过市售盲样肉制品的检测,表明该体系可用于定性检测加工肉制品中的鸭源性成分。结论：该方法特异性强,灵敏度高,可用于对肉制品中鸭源性成分的掺假鉴别。