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1.
目的纯化大肠杆菌表达的重组幽门螺杆菌粘附素。方法将表达HpaA蛋白的工程菌经高压均质机破菌获得包涵体,经洗涤、变性、复性,Q Sepharose High Performance阴离子交换层析和亲和层析分离纯化。采用SDS-PAGE和HPLC检测纯度,用Western blot检测其抗原性。结果纯化后HpaA蛋白纯度高达95%以上,具有良好的抗原性。结论建立了从包涵体中获得高纯度HpaA纯化工艺,为进一步的研究打下了基础。 相似文献
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目的 建立重组羧肽酶原B复性方法及活性羧肽酶B的纯化方法。方法 重组大肠杆菌发酵后 ,表达的羧肽酶原B包涵体经洗涤、变性 ,采用凝胶过滤的方法对其进行复性及纯化。所得的复性液经Trypsin酶解后 ,采用DEAE FF阴离子交换层析进行羧肽酶B的分离纯化 ,并采用SDS PAGE检测纯度。结果 经凝胶过滤后得到了复性和纯化的羧肽酶原B包涵体 ,在蛋白终浓度相同的情况下 ,复性效率比稀释复性提高了 5 0 % ,经DEAE离子交换柱一步纯化 ,得到了活性羧肽酶B ,纯度达到 90 %以上。以Hippuryl -L arg为底物测活 ,得到的活性酶的比活为 15 0u mg。结论 所建立复性方法及纯化方法为进一步的研究奠定了基础。 相似文献
3.
目的对表达HIV-1跨膜蛋白gp41截短体包涵体进行纯化。方法将收获的表达菌体洗涤、超声波破菌、预处理后进行疏水层析。结果纯化后的gp41截短体的融合蛋白纯度达到90%,并且具有较好的抗原性和特异性。结论利用疏水层析可以将目的蛋白进行有效的纯化,为下一步的应用打下基础。 相似文献
4.
大肠杆菌表达的rhGM—CSF发酵纯化工艺研究 总被引:4,自引:0,他引:4
重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)基因表达产物在大肠杆菌的胞浆中以不溶性包涵体的形式存在、包涵体用超声破菌分离后,经变性、复性,用流水层析、离子交换层析、凝胶过滤层析等进行纯化。SDS—PAGE表明终产物纯度达97.8%。纯化蛋白的比活性根据MTT法在TF—1细胞测定的结果,可达3×107u/mg蛋白。 相似文献
5.
目的优化重组HIV-1跨膜蛋白Gp41包涵体的纯化条件。方法将表达Gp41的大肠杆菌菌体高压匀浆破碎、洗涤分离提取包涵体,以不同pH值的低浓度变性剂溶解包涵体,稀释复性并用离子交换层析纯化目的蛋白,纯化产物经West-ernblot进行鉴定。结果以50mmol/LTris buffer、2mol/L,pH11.5尿素溶解的包涵体蛋白得到很好的溶解,目的蛋白复性得率大于40%。经纯化后,目的蛋白的纯度大于90%,且具有良好的反应原性。结论优化了重组HIV-1跨膜蛋白Gp41包涵体的纯化条件,为HIV-1Gp41抗原纯化工艺的放大提供了依据。 相似文献
6.
从包涵体中高效纯化HBx-蛋白 总被引:2,自引:0,他引:2
目的获得具有生物学活性的重组HBx-蛋白。方法经TNFMX缓冲液清洗表达的包涵体,再将 此包涵体变性,复性后,经亲和层析,分步洗脱、收集。结果获得大量高纯度的HBx-蛋白,HBx-该蛋白的纯度和回 收率分别达到96%和28%。结论此方法具有较好的纯化效果,也可应用于其他重组蛋白的制备。 相似文献
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目的 研究IL-18在大肠杆菌中高效表达及纯化工艺,并诱导KG-1 细胞产生IFN-γ。 方法利用RT-nPCR从正常人胎肝组织中扩增获得人IL-18基因,克隆于pThiohisA载体,转化宿主菌BL-21,1mmol/LIPTG;诱导,表达产物以包涵体形式存在,经2%Triton X-100洗涤,在 8mol/L尿素下变性阴离子柱层析,透析复性后再经凝胶过滤纯化,通过纯化产物诱导入骨髓瘤单核细胞 KG-l(ATCC CCL-246)产生 IFN-γ,并检测其生物学活性。结果 获得了在大肠杆菌中的稳定高效表达,表达的目的蛋白占菌体总蛋白的25%左右,纯化后纯度可达95%以上,具有显著的刺激细胞产生IFN-γ的活性。结论 制备具有生物学活性高纯度的rhIL-18方法的建立,为基础研究与临床应用开发奠定了基础。 相似文献
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目的 从大肠杆菌中获得载脂蛋白A I(米兰变体 ) 的包涵体 ,对包涵体进行复性、纯化 ,最终获得具有生物活性的载脂蛋白A I(米兰变体 ) 。方法 包涵体以尿素溶解后 ,以疏水层析法复性重组蛋白 ;以离子交换层析对其进一步纯化 ,并对所得的蛋白进行生物活性分析。结果 经复性纯化的蛋白纯度达 95 % ,体外生物活性检测显示其具有生物活性。结论 本法能快速有效地对目的蛋白进行复性、纯化 ,并且有望放大至工业生产规模 相似文献
9.
GM-CSF工程菌W3100经发酵培养后,将菌体低渗裂解,经流水柱─分子筛─阴离子交换树脂的一系列层析,最后得到纯化的GM-CSF,其纯度为98%以上,比活性大于20×107。 相似文献
10.
用盐析与疏水层析相偶合快速分离提纯猪胰激肽释放酶 总被引:4,自引:0,他引:4
将疏水层析技术用于从猪胰脏中分离纯化激肽释放酶,建立了一种简便、快速的分离提纯方法:将粗品溶解后经过硫酸铵沉淀处理,然后经过Butyl Sepharose FF疏水层析后得到目标蛋白,分析其纯度大于500U/mg,盐析和疏水两步纯化的收率大于85.0%,同时比较了Phenyl Sepharose FF,Octyl Sepharose FF和Butyl Sepharose FF三种疏水介质分离纯化胰K的效果,本实验工艺与传统工艺相比,具有操作简单、快速、回收率和纯化倍数高等优点,有望成为一种从动物组织中快速分离纯化药用蛋白质的有效技术平台。 相似文献
11.
目的 在原核细胞表达抗HIV-1gp120单链抗体基因,纯化后检测其活性。方法 将单链抗体基因插入pET28原核表达载体进行诱导表达,对包涵体进行变性复性处理后,利用Ni-NTA金属螯合层析柱对表达的蛋白进行初步纯化,纯化后的单链抗体与gp120标准抗原膜条反应。结果 表达产物主要以包涵体形式存在,最高表达量占菌体总蛋白量的51%,金属螯合层析一步纯化后纯度超过85%。纯化后的单链抗体可以特异地识别gp120标准抗原。结论 在原核细胞表达的单链抗体,复性纯化后具有生物学活性。 相似文献
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目的 探索重组人肽抗生素hPAB β的纯化工艺 ,为制备高纯度、高活性的重组hPAB β奠定基础。方法 将构建的含pQE32 CP hPAB β重组质粒的基因工程菌扩大培养 ,诱导表达后所得菌体经溶菌酶法裂解 ,鉴定融合蛋白表达形式 ;以含融合蛋白的溶液作为纯化的初始样品 ,采用Ni NTAresin亲和层析柱对融合蛋白进行纯化 ,用CNBr裂解 ,利用SephadexG 5 0、Bio gelP6DG凝胶进行分子筛层析 ,利用Macro PrepHighS进行阳离子交换层析 ,对层析峰行Tris Tricine电泳分析。结果 融合蛋白以包涵体形式存在 ;亲和层析获得了纯度为 82 .6 %的融合蛋白 ,CNBr作用 2 0h可完成融合蛋白的裂解 ;目的肽经纯化后 ,纯度达 95 %以上。结论 已初步建立了重组人肽抗生素hPAB β的纯化工艺 ,并获得了高纯度的肽抗生素hPAB β。 相似文献
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目的获得具有生物学活性的与导向肽融合表达的重组TRAIL蛋白,提高TRAIL对肿瘤细胞的杀伤作用。方法构建TRAIL与导向多肽PEPHC1的融合基因,克隆入质粒pGEM-3zf(-)中进行测序,序列正确后,亚克隆入表达载体pBV220中,转化大肠杆菌DH5α,温度诱导表达。结果42℃诱导4h,融合基因得到了表达,SDS-PAGE表明目的蛋白占菌体总蛋白的15%以上,以包涵体形式存在。经包涵体洗涤、变性、复性,并经离子交换层析柱纯化后可得到融合蛋白PE-TRAIL,经体外试验证明具有生物学活性。结论成功克隆并表达了具有生物学活性的与导向肽融合表达的重组TRAIL蛋白。 相似文献
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嵌合蛋白sTNFRⅡ-IgG Fc纯化与生物学活性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 建立嵌合蛋白sTNFR IgGFc的纯化工艺 ,并对该蛋白的理化和生物活性进行研究。方法 嵌合蛋白sTNFRⅡ IgGFc经变性、复性后 ,用金属螯合层析进行纯化 ,纯化的蛋白进行配基结合实验和拮抗TNF活性检测。结果 该嵌合蛋白的纯度大于 95 % ,在体外能够二聚化 ,保留了sTNFRⅡ对hTNFα的结合特性 ,同单体sTNFRⅡ相比 ,对hTNFα的拮抗活性明显提高。结论 为进一步研究奠定了基础 相似文献