纤维素酶的滤纸酶活和CMC酶活的测定

采用3，5-二硝基水杨酸（DNS）为显色剂、滤纸或CMC为底物，测定纤维素酶的滤纸酶活（FPA）和CMC酶活（CMCA）。分析确定了酶活测定用波长为530nm，参比溶液应为失活酶、底物和DNS等共热的反应物，比较了两种底物的酶活测定方法，结果表明：纤维素酶的CMC酶活比滤纸酶活高，酶对水溶性底物有较高的活力，吸附对酶的活性部位与纤维素分子链段的结合及催化均有很大影响。     

纤维素酶的主要酶学性质的研究

用DNS为显色剂,以滤纸和CMC为底物,测定纤维素酶A的滤纸酶活和CMC酶活(PA和CMCA),探讨纤维素酶A的主要酶学性质。结果表明:FPA和CMCA的最适温度范围为50℃～60℃和50℃～70℃;最适pH为5.0和4.6～5.0。     

促进剂H对纤维素滤纸酶活及酶促反应动力学特性的影响

采用3,5-二硝基水杨酸（DNS）为显色剂,滤纸为底物,测定纤维素酶的酶活。考察了在不同的酶促反应温度、pH、底物浓度、反应时间等反应条件下,促进剂H对纤维素酶滤纸酶活（FPA）的影响。结果表明,促进剂H对纤维素酶的FPA活性有明显促进作用,且在不同条件下的促进效果有较大差异。      

纤维素酶活力测试探讨

采用3,5-二硝基水杨酸为显色剂,分别以滤纸和CMC为底物,测定纤维素酶的FPA和CMC酶活,比较了两种底物测定酶活的方法,结果表明酶液稀释倍数与酶活力之间存在一较窄的线性范围,在此范围内酶活力测试相对较稳定;另外,从酶的应用效果看内切酶活力对之影响较大.     

纤维素酶活力测试探讨

采用3,5-二硝基水杨酸为显色剂,分别以滤纸和CMC为底物,测定纤维素酶的FPA和CMC酶活,比较了两种底物测定酶活的方法,结果表明酶液稀释倍数与酶活力之间存在一较窄的线性范围,在此范围内酶活力测试相对较稳定;另外,从酶的应用效果看内切酶活力对之影响较大。     

促进剂H对纤维素滤纸酶活及酶促反应动力学特性的影响

采用3,5-二硝基水杨酸(DNS)为显色剂,滤纸为底物,测定纤维素酶的酶活。考察了在不同的酶促反应温度、pH、底物浓度、反应时间等反应条件下,促进剂H对纤维素酶滤纸酶活(FPA)的影响。结果表明,促进剂H对纤维素酶的FPA活性有明显促进作用,且在不同条件下的促进效果有较大差异。     

裂褶菌产纤维素酶条件的研究

对一株裂褶菌(Schizorhyllum commune ATCC38548)进行液态发酵生产纤维素酶。通过单因素试验考察发酵时间、碳源、碳源质量浓度和接种量等因素对菌株产酶的影响,用二硝基水杨酸法(DNS法)对羧甲基纤维素酶(CMC)、滤纸酶(FPA)和微晶纤维素酶(AVI)进行酶活测定。结果表明:3种酶的分泌高峰不一致,但在第6天时纤维素酶总酶活达到最高。滤纸是诱导裂褶菌产纤维素酶的良好碳源,且质量浓度为20g/L时产酶效果最佳;接种量为5mL时,总酶活相对最高。不同的培养条件对裂褶菌产CMC、FPA和AVI的影响各异。     

蔗渣纤维素分解菌的筛选、鉴定及酶活的测定

为充分利用蔗渣,筛选高效降解蔗渣的菌株,本文从堆肥中分离得到有显著透明圈、可产纤维素酶的真菌8株,选其中3株测定了羧甲基纤维素酶(CMCase)和滤纸酶(FPA)活性。结果表明,菌株SC8的透明圈直径、CMCase和FPA活性均最大。经菌落形态特征分析,初步鉴定菌株SC8属于曲霉属(Aspergillus)。相关性分析表明,所筛选菌株在纤维素透明圈直径的大小与CMCase、FPA酶活性成极显著正相关(p0.01)。     

超高压处理对蛹虫草汁纤维素酶活性的影响

为了明确超高压加工技术对纤维素酶活性的影响,分别研究了压力、保压时间、温度、乙醇体积分数、加压次数和pH值等对蛹虫草汁中纤维素酶的羧甲基纤维素酶活性(CMC)和滤纸酶活(FPA)的影响。结果表明,纤维素酶的最适压力、保压时间、温度、乙醇体积分数、pH值和加压次数分别为:400MPa、10min、35℃、30%,pH4.0~7.0,加压1次,在最适条件下,CMC酶活比处理前分别提高了82.07%、52.41%、87.22%、54.48%、67.52%和66.67%;FPA酶活比处理前分别提高了97.37%、61.4%、69.4%、61.4%、1.31%和33.91%。因此,利用超高压处理能有效提高蛹虫草汁中的纤维素酶活性。     

微波诱变筛选纤维素酶高产菌株

利用透明圈法和刚果红染色法从堆肥中分离出产纤维素酶活力较高的霉菌7株。通过测定其羧甲基纤维素(CMC)酶活力和滤纸(FPA)酶活力,筛选出酶活力较高的5株菌,分别命名为D_2、D_(12)、D_(13)、D_(21)、D_(23),其中菌株D_2产酶能力最强,CMC酶活和FPA酶活分别为252.3U/mL和104.4U/mL。根据D_2菌株的菌落、菌丝、分生孢子梗、孢子的形态等特征,初步鉴定该菌株为黑曲霉(Aspergillus niger)。为了进一步提高菌株D_2的产酶能力,对其进行了微波诱变,得到产酶活力最高的突变株W_(41),其滤纸(FPA)酶活达到128.7U/mL,比D_2菌株提高了23.3%。经连续传代,其性能稳定。     

纤维素酶耐高温高产菌株的选育

该文以绿色木霉N0为出发菌株，经紫外线、亚硝基胍诱变处理，采用刚果红透明圈法，在含有制霉菌素浓度为20U的平板上挑取Hc值(透明圈直径与菌落直径之比)比N0大的菌株分别在不同温度下进行固态发酵复筛，得到耐高温(38℃)高酶活菌株110。     

里氏木霉液体发酵法生产纤维素酶

通过比较几株霉菌产纤维素酶活力，发现里氏木霉ＲｕｔＣ－３０活力最高；采用Ａｖｉｃｅｌ与麸皮复合碳源，以及使用ＫＨ２ＰＯ４－Ｋ２ＨＰＯ４缓冲系统控制发酵液ｐＨ，２８℃摇瓶发酵６ｄ，最高酶活达到ＣＭＣａｓｅ１００－１２５Ｕ／ｍｌ，ＦＰＡ９－１２Ｕ／ｍｌ。采用２．５升发酵罐培养，通过控制ｐＨ和溶氧，纤维素酶活力为ＣＭＣａｓｅ１３３．４Ｕ／ｍｌ，ＦＰＡ１１．６７Ｕ／ｍｌ。用硫铵盐析法提取制得纤维素酶干粉，其活力为ＣＭＣａｓｅ３０７４．９Ｕ／ｇ，ＦＰＡ１６６．７Ｕ／ｇ。     

四种纤维素酶酶活测定方法的比较

研究和分析滤纸酶活（FPA）测定方法、羧甲基纤维素钠盐（CMC-Na）酶活性测定方法、染色纤维素测定方法以及CMC粘度降低测定方法,比较了这4种方法测定的线性相关性以及稳定性,经过实验研究表明,FPA测定方法和CMC-Na酶活性测定方法较稳定,线性相关性较高,可以作为研究测定的方法.     

红树林土壤纤维素酶产生菌筛选及产酶条件研究

采用CMC唯一碳源平板法和内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等3种酶平板鉴别法从海南红树林土壤中分离到109个有阳性信号的菌株,经发酵产酶复筛选出一株产纤维素酶活相对较高的真菌HBZ003。经鉴定该菌为产紫青霉(Penicillium purpurogenum)。通过发酵产酶条件优化,获得最佳培养基组成为:麸皮8 g/L,CMC 2 g/L,(NH4)2SO43 g/L,KNO32 g/L,KH2PO43 g/L,NaCl 6 g/L,CaCl20.5 g/L;发酵条件为250mL三角瓶中装培养液100mL,在pH4.0、30℃,160 r/min条件下振荡培养5 d,测得发酵液中CMCase和FPA分别为16.04U和4.08 U。     

马铃薯渣高效降解菌的紫外诱变选育及发酵试验

以选育马铃薯渣高效降解菌为目的,对康宁木霉进行紫外诱变,以致死率在80%~90%之间的菌株进行初筛,通过羧甲基纤维素钠刚果红筛选平板复筛,选育出两株具有较高酶活的菌株,并命名为P12、P13。通过诱变,完全培养基中P12的纤维素酶活(CMCA)及滤纸酶活(FPA)分别提高了1.45倍、1.738倍,P13的羧甲基纤维素酶活(CMCA)及滤纸酶活(FPA)分别提高了1.4倍和1.667倍。并通过发酵试验,发酵培养基中CMC酶活分别是初始菌株的1.72倍和1.84倍。P12和P13具有良好的降解马铃薯渣的能力。     

N~+离子注入-紫外复合诱变选育纤维素酶高产菌株

对产纤维素酶菌株Rhizopus sp.TY1原生质体进行N+离子注入-紫外复合诱变,以期获得高产菌株。以原生质体形成率和再生率为指标,确定最佳酶解时间3h;以致死率和正突变率为指标,确定最佳N+离子注入剂量为2.0×1015ions/cm2、最佳紫外照射时间为90s。实验筛选得到一株高产菌株Rhizopus sp.TY1.2,液态发酵终点时滤纸酶活力(FPA)和羧甲基纤维素酶活力(CMC)分别达到5.1、20.9U/mL,与出发菌株相比,FPA和CMC分别提高了75.9%和175.0%。传代实验结果显示Rhizopus sp.TY1.2产纤维素酶性能稳定,该结果表明N+离子注入-紫外复合诱变所产生的变异是可遗传的变异。     

分批与流加发酵法生产纤维素酶的研究

采用里氏木霉ＲｕｔＣ－３０,对２．５Ｌ罐分批和流加发酵产酶条件及优化进行了系统研究。通过研究不同浓度的ＳｏｌｋａＦｌｏｃ（纤维素粉）对分批发酵产酶的影响,发现菌体浓度与产酶量随底物浓度增加而增加,当采用５０ｇ／ＬＳｏｌｋａＦｌｏｃ复合１０ｇ／Ｌ麸皮为碳源时,菌体浓度和产酶量最大,最大ＤＣＷ１３．８２ｇ／Ｌ,ＣＭＣａｓｅ２３４．２Ｕ／ｍｌ,ＦＰＡ２１．２５Ｕ／ｍｌ,但ＳｏｌｋａＦｌｏｃ增加至６０ｇ／Ｌ,高浓度底物对菌体初始生长产生强烈抑制,产酶下降。通过研究不同初始Ｓｏｌ－ｋａＦｌｏｃ浓度对流加发酵产酶的影响,发现当初始底物浓度为５０ｇ／ＬＳｏｌｋａＦｌｏｃ复合１０ｇ／Ｌ麸皮时,菌体量和产酶均达到最大值,分别为ＤＣＷ１５．４１ｇ／Ｌ,ＣＭＣａｓｅ３５９．７Ｕ／ｍｌ,ＦＰＡ３０．６Ｕ／ｍｌ,高菌体量是获得纤维素酶高产的关键因素之一。此外用硫铵盐析法对纤维素酶进行了提取。