固定化磷脂酶A1水解卵磷脂的研究

对固定化磷脂酶A1水解卵磷脂的条件进行优化，经正交试验确定最佳的酶解条件，即酶解温度为50℃，反应溶液pH为8．0，2％溶血磷脂4mL酶解时间10h，且酶解溶液中加入溶血磷脂对磷脂的水解影响最显著。     

磷脂酶A1水解蛋黄卵磷脂的研究

采用磷脂酶A1水解蛋黄卵磷脂,通过单因素实验和正交实验确定该酶水解蛋黄卵磷脂经济合理的工艺条件为：反应温度50℃,反应时间5h,加酶量0．40 IU／g,起始pH6．0,底物质量浓度80g／L;利用电喷雾飞行时间质谱仪分析水解前后蛋黄卵磷脂组分,磷脂酶A1水解Sn-1位脂肪酸,生成含Sn-2位不饱和脂肪酸的溶血磷脂,反应过程中有酰基位移发生。     

磷脂酶A1催化水解大豆油研究

通过正交试验获得了磷脂酶A1催化水解大豆油的最佳水解条件:水解温度35℃、加酶量26U/g、加水量40%,水解时间8h.在此条件下,以KOH计,水解体系上层油层酸值达65.51 mg/g.当用O.1%的氯化钙水溶液作为水解反应物时,和蒸馏水相比,钙离子对维持磷脂酶A1多次循环利用的残余活力有促进作用.水解反应残余活力的磷脂酶A1再加上50%的新添加酶,表现出很强的催化水解活力,酶回收使用6次时,残余酶活力仍然有初次使用活力的86.88%.     

磷脂酶A1水解大豆浓缩磷脂研究

该研究采用磷脂酶A1水解大豆浓缩磷脂,通过单因素实验确定各因素合适范围,利用响应面实验方法,得到磷脂酶A1水解大豆磷脂最佳工艺条件为:反应温度51℃、反应时间6h、加酶量3．6％、 pH值5．0、底物浓度0．25 g／mL;利用气相色谱仪分析水解前后磷脂脂肪酸组成,硬脂酸完全水解,棕榈酸含量从20．2％减至5．1％。     

己烷体系中磷脂酶A1催化卵磷脂乙醇解制备溶血卵磷脂的研究

在己烷体系中,采用磷脂酶A1催化卵磷脂乙醇解制备溶血卵磷脂。首先通过单因素试验分别考察了加酶量、加水量、底物比、温度和溶剂比对卵磷脂乙醇解制备溶血卵磷脂的影响,并在此基础上利用响应面法对反应工艺进行了优化。最终确定最佳工艺条件为:卵磷脂1.5 g,加酶量40μL/g(磷脂酶A1/卵磷脂),加水量25μL/g(水/卵磷脂(PC)),底物比:1∶3(PC/无水乙醇,mol/mol),温度30℃,溶剂比:1∶2(PC/正己烷,W/V),反应时间3.55 h,溶血磷脂转化率达98.3%。结果表明,磷脂酶A1可以催化磷脂酰胆碱乙醇解反应制备溶血磷脂酰胆碱。     

非水介质中磷脂酶A1催化水解磷脂酰胆碱的研究

在非水介质中,采用磷脂酶A1——Lecitase Ultra作为催化剂研究了PC的水解反应。经HPLC分析,在不同的溶剂体系中,水解产物亦不同。溶剂和界面的疏水性质是影响产物组成的关键因素。水分含量对反应初速率的影响显著,非极性溶剂中的最大反应初速率大于极性溶剂体系中的。     

磷脂酶A1(Lecitase Ultra)大孔树脂固定化研究

选用9种树脂对磷脂酶A1(Lecitase Ultra)进行固定化,比较得出最适合的固定化载体为D101型号的大孔树脂.对其固定化条件进行优化,得到了固定化最优的条件为:酶液和树脂液料比1∶1(mL/g),磷酸盐缓冲液pH为6.5,室温下固定化时间60 min.在此条件下的得到的固定化酶的酶活力为750.0 U/g.通过扫描电子显微镜观测了固定化前后,树脂表面特征的变化.     

磷脂酶A1催化水解大豆油制备甘油二酯研究（I）——水解条件优化

以大豆油为原料,经磷脂酶A1催化水解甘油三酯,生成甘油二酯与脂肪酸。研究了水解时间、水解温度、加酶量和加水量对酶解反应的影响。通过正交试验得出磷脂酶A1水解大豆油的最佳反应条件为：水解温度35℃,加酶量26U／g,加水量40％,水解时间8h。在此条件下,水解物酸值（KOH）达58．07mg／g。     

大豆卵磷脂的酶法改性研究

利用实验室自制的液态磷脂酶A2，水解大豆卵磷脂得到溶血卵磷脂。设计了正交实验研究该磷脂酶A2在水浴中静止水解大豆卵磷脂的最佳工艺条件：底物浓度为4％，反应温度30℃，起始pH值7．5，Ca^2＋浓度0．10％，反应时间13h。在最佳条件下，得到的产物经酸碱滴定法及HPLC检测，大豆卵磷脂的转化率为86．30％。     

磷脂酶A2水解菜籽油脚的研究

油脚中含有丰富的磷脂,磷脂的酶改性产物溶血磷脂有极广的应用。以菜籽油脚为底物,以实验室自制的磷脂酶A2为水解酶,采用水相反应方式,通过单因素实验和多因素正交实验,分别对底物用量、Ca2 添加量、反应温度、起始pH等因素进行了系统的研究。结果表明,菜籽油脚酶解的最佳条件为:底物浓度20%,钙离子浓度0.3%,温度50℃,起始pH8.0。在最佳条件下,FFA生成量可达到172.3μmol/g。     

磷脂酶A_2水解大豆浓缩磷脂的研究(II)贫水相的水解及产品性能的测定

研究了磷脂酶A2 在水相 (贫水 )中水解大豆浓缩磷脂 ,经过正交试验得到最佳工艺条件 :浓缩磷脂和水比例 5∶2 ;加酶量 173.2IU/g浓缩磷脂 ;反应温度 6 5℃ ,钙离子浓度 0 .1mol/L。研究了溶血磷脂产品乳化性能 ,结果表明其HLB值大于 8,能很好的乳化O/W型体系。     

磷脂酶A_2水解大豆浓缩磷脂的研究(I) 富水相的水解及反应速度的测定

研究了磷脂酶A2 在水相 (富水 )中水解大豆浓缩磷脂 ,经过正交试验得到最佳工艺条件 :底物浓度 10 %,反应温度 5 5℃ ,pH值 8.5 ,Ca2 +浓度 0 .2mol/L。反应的水解率在 75 %～ 85 %。并研究了水解时间和水解速度的关系。     

水相体系中磷脂酶A1酶解南极磷虾磷脂制备溶血磷脂的分析

采用磷脂酶A1（phospholipase A1,PLA1）在水相体系中酶解南极磷虾磷脂,以期得到富含二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid,EPA）和二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid,DHA）的溶血磷脂。以酸价衡量磷脂酶解程度,通过高效液相色谱对酶解前后磷脂组分进行分析,结合甘油磷脂酰胆碱（glycerol phosphatidylcholine,GPC）含量分析进一步证实酰基位移现象,并利用气相色谱-质谱分析磷脂酶解前后脂肪酸组成。结果表明：酸价随加酶量的增加呈现先上升后下降的趋势。随着酶解时间的延长,Sn-2-溶血磷脂酰胆碱（Sn-2-lysophosphatidylcholine,Sn-2-LPC）含量先增加后趋于平衡,Sn-1-溶血磷脂酰胆碱（Sn-1-lysophosphatidylcholine,Sn-1-LPC）含量先升高后降低,这是由于部分Sn-2-LPC发生酰基位移生成Sn-1-LPC,而Sn-1-LPC又进一步被PLA1酶解生成GPC,且在较短酶解时间内,温度对酰基位移的影响不大。最后通过气相色谱-质谱分析得出酶解产物Sn-2-LPC中EPA和DHA含量较高,且其乳化稳定性也得到了提高。     

辅助蛋白基因的剪接对磷脂酶A1酶活的影响

为探究磷脂酶A1辅助蛋白(phospholipase A1 accessory protein,PlaS)对磷脂酶A1 (phospholipase A1,PlaA1)酶活关键调控区域,根据PlaS的结构特点,设计出截短突变体,利用聚合酶链式反应技术将PlaA1与PlaS共表达基因plaB中编码辅助蛋白的基因plaS进...     

氨基化Fe3O4-SiO2固定化磷脂酶A1

以磁性Fe3O4-SiO2纳米颗粒为载体,研究固定化条件对磷脂酶活力的影响,通过响应面试验得到最优固定化条件为：固定化pH 6.7、固定化温度30 ℃、固定化时间7.9 h、戊二醛质量分数8.3%、加酶量8.2 mL/50 mg,在此条件下酶活力回收率能达到63.6%,蛋白固载率68%。并对制备的固定化磷脂酶的化学组分、形态结构和粒径进行分析,结果表明磷脂酶固定化效果较好,粒径均一,载体平均粒径为200 nm左右。固定化酶热稳定性、pH值稳定性和贮藏稳定性增强,最适反应温度为50 ℃,最适pH 6.0,重复操作10 次后保留60%以上的初始酶活力。     

环氧基修饰磁性微球固定化磷脂酶A1

以自制的环氧基修饰的Fe3O4磁性微球为载体固定化磷脂酶A1,采用响应面试验优化固定化条件,并研究固定化酶的酶学性质。结果表明：最佳固定化条件为缓冲液pH?4.0、固定化时间1.9?h、酶液添加量3.6?mL/g,得到的酶活力为3?675?U/g,固定化率为61.1%。固定化酶与游离酶比较,最适pH值向碱性方向偏移1.0,最适温度提高5?℃;贮藏稳定性有一定程度的提高;在重复菜籽油脱胶8?个批次后,仍保留81.1%的酶活力。此外,通过X射线衍射、衰减全反射傅里叶变换红外光谱、扫描电子显微镜和透射电子显微镜等现代分析手段对载体进行表征,表明成功制备纳米尺寸的微球,且微球表面成功修饰上环氧基团。