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采用硫酸铵分部盐析、Phenyl
Sepharose CL-4B疏水层析、Sephadex G-75凝胶过滤层析、DEAE Sepharose fast flow阴离子交换层析等分离技术,从宇佐美曲霉(Aspergillus
usamii)YL-01-78菌株固态曲浸出液中分离出1种SDS-PAGE电泳纯和HPLC色谱纯的酸性β-甘露聚糖酶组分,其最终回收率为12.6%,纯化倍数为32.3.经SDS-PAGE和凝胶过滤层析测得该纯化酶的分子质量分别为42
ku和40 ku,表明该酶以单体形式存在;其等电点pI为4.2;含糖量为23.2%.以角豆胶半乳甘露聚糖为底物,测得该酶的Km值和Vmax值分别为6.3
mg /mL和1 667 μmol/(min·mg). 相似文献
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对香葱中蒜氨酸酶进行分离纯化并研究其酶学性质。通过均浆、离心、硫酸铵分级沉淀、透析、DEAE-52离子交换层析和Sephadex G200凝胶过滤层析技术分离纯化得到纯度较高的蒜氨酸酶,并利用SDS-PAGE电泳对其纯度进行鉴定。结果表明,经分离纯化可得纯化倍数为19.6倍的蒜氨酸酶,酶比活力为11.44U/mg,酶活回收率为32.1%,达到电泳纯,其亚基的分子质量约为54.5ku。纯酶的最适反应温度为45℃,最适pH7.0,以S-甲基-L-半胱氨酸亚砜为底物,蒜氨酸酶的Km为45.31mmol/L,Vmax为40.32μmol/(mg·min)。 相似文献
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宇佐美曲霉木聚糖酶的纯化及其性质 总被引:4,自引:1,他引:3
宇佐美曲霉E001固态发酵成熟曲经水浸提、硫酸铵盐析、Phenyl-SepharoseCL-4B疏水层析、SephadexG-75凝胶过滤层析、DEAESepharosefastflow阴离子交换层析等提纯步骤,获得了比酶活3047IU/mg蛋白的纯木聚糖酶,其SDS-PAGE呈单一条带。用SDS-PAGE和凝胶过滤测得木聚糖酶的相对分子质量分别为23.2kD和23.0kD,表明该酶蛋白为单亚基。纯木聚糖酶的最适作用温度和pH值分别为50℃和4.6;以燕麦木聚糖为底物的酶动力学常数Km和Vmax值分别为5.27mg/ml和6494μmol/(min·mg);Ca2+、EDTA对酶有激活作用,而Sn2+、Pb2+、Fe3+有强烈的抑制作用。 相似文献
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采用不同饱和度的硫酸铵溶液对内切β-1,3-葡聚糖酶粗酶液进行分段盐析,以确定最佳盐析条件,将盐析处理后的酶液经透析浓缩、DEAE-Sephadex A-50离子交换层析、Sephadex G-75凝胶过滤层析等进一步分离纯化,浓缩纯化后的含酶组分,经过SDS-PAGE电泳分析其纯度并初步确定其分子量。结果显示:经过纯化后的内切β-1,3-葡聚糖酶的比活力由20.90U/mg提高到933.37U/mg,纯化倍数为44.7倍,酶活回收率为11.6%,电泳分析呈单一条带,分子量近似为45ku。 相似文献
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首先利用不同相对分子质量聚丙烯酸钠从动物血液中分离纯化出超氧化物歧化酶(SOD),探索不同相对分子质量聚丙烯酸钠对SOD提取酶活性的影响。鉴于离子交换层析和凝胶过滤层析纯化时所用材料较昂贵,探索出一条适合工业化大规模生产的纯化方法。利用壳聚糖、亚氨基二乙酸(IDA)和环氧氯丙烷等材料合成一种新填料,根据亲和层析原理去除杂蛋白质,获得电泳纯级超氧化物歧化酶,使酶活性进一步提高,并和离子交换层析和凝胶过滤层析方法相对照,以期自制填料能代替Sephedex,DEAE-sepherose-fast flow等传统昂贵填料,以适合工业化生产。结果显示,低相对分子质量聚丙烯酸钠在血液SOD提纯工艺中更为适用,超滤后的粗酶液经离子交换层析、凝胶过滤层析和壳聚糖亲和层析纯化后经SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳后呈明显的单一条带,单亚基分子量16 kD,比活力达5 585 U/mg和6 148 U/mg,4 739 U/mg;产品得率分别为18.1%和13.7%,15.5%;纯化后活性回收率分别为61.2%,50.8%,42.6%。表明壳聚糖亲和层析方法在新工艺后续纯化工艺中有望代替Sephedex DEAEsepherose-fast flow为基础的传统纯化方法,适合工业化大规模生产。 相似文献
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设计了利用硫酸铵分级沉淀,凝胶过滤层析和羟基磷灰石吸附层析相结合及二次羟基磷灰石吸附层析二种分离方案,使一种黑曲霉β-D甘露聚糖酶得到纯化,纯化酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示基本为单一蛋白带。凝胶过滤法测的全酶相对分子质量为49000,SDS-PAGE法测得相对分子质量为51000.聚丙烯酰胺等电聚焦测得此纯化酶等电点为3.8. 相似文献
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作者对毛云芝菌利用桑叶和麸皮固体发酵所产漆酶进行了分离纯化,并研究了纯化后漆酶的酶学性质。将毛云芝菌固体发酵漆酶粗提液通过离心、过滤、大孔树脂脱色、硫酸铵分级盐析、DEAE-Sepharose fast flow层析、Sephadex G-100凝胶过滤层析,结果得到电泳纯的漆酶,纯化倍数15.53,酶活回收率51.21%。用SDS-PAGE测得该酶相对分子质量62 600;该酶反应的最适温度为50℃,在柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中最适pH值为4.0,在醋酸缓冲液中最适pH值3.0;氧化ABTS的Km为0.093 mmol/L,对邻苯二酚的Km为3.71 mmol/L。 相似文献
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对来源于菌株黑曲霉1504的葡萄糖氧化酶(GOD)进行分离纯化,研究其酶学性质,并将其应用于面粉及馒头品质改良。GOD经PEG20000浓缩、硫酸铵分级沉淀、DEAE-SFF离子交换层析和Sephacryl S-200凝胶过滤层析,得到电泳单条带,纯化倍数为51.13,酶活回收率为27.07%,用凝胶过滤层析测得酶的分子质量为150.2 ku;纯酶的最适反应pH值为6.1,30℃时pH值稳定范围是4.5~8.0,最适反应温度40℃,50℃时处理4 h保留75%以上的酶活力。各种金属离子中,Pb~(2+)对酶促反应的促进作用最强,Ag~+对酶促反应的抑制作用最强。利用双倒数作图法求得此GOD的K_m为36.7 mmol/L,V_(max)为20.83μmol/(L·s);考察GOD对馒头品质的影响:当加酶量为2.5 mg/kg时,馒头比容增加13.7%,延展率提高6.5%,同时馒头硬度明显下降,仅为对照组的41.1%。 相似文献
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以红枣(Ziziphus jujube Mill.)核为原料,探索一条提取枣核11S球蛋白的方法.将枣核粉碎粗提,然后离心去掉杂质,再将得到的上清液用20%~50%的硫酸铵进行分级盐析.离心得到的蛋白粗提液经透析后,用DEAE-Sepharose弱阴离子交换层析和Superdex 200prep grade凝胶过滤层析进一步分离纯化.SDS-PAGE电泳结果表明,枣核球蛋白含有2种亚基,分子量分别为26ku和26.5 ku,Native-PAGE电泳测得分子量约为210ku.蛋白质的2个亚基的N端序列结果显示为11S球蛋白. 相似文献
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嗜热拟青霉(Paecilomyces thermophila)J18利用玉米芯能产胞外木糖苷酶,通过(NH_4)_2SO_4沉淀、DEAE-52离子交换层析及Q-琼脂糖凝肢-FF(QSFF)离子交换层析从上清液纯化得到了电泳纯的木糖苷酶,纯化倍数为31.9倍,回收率为2.27%。SDS-PAG E及Superdex-75凝胶过滤层析测定木糖苷酶的分子量分别为53.5 ku和51.8 ku。该酶最适温度及pH分别为55℃和pH 6.5。木糖苷酶能够水解木二糖和低聚木糖但不能水解木聚糖,水解低聚木糖的相对速率随聚合度增加而增加。该酶对木糖的抑制常数Ki值为139 mmol/L,具有很高的木糖耐受性。木糖苷酶与内源木聚糖酶一起水解木聚糖产生更多的还原糖,表现出协同作用。 相似文献
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纯化的黑曲霉Aspergillus niger WM20-11所产的酸性β-甘露聚糖酶经Sephadex G-100凝胶过滤层析和SDS-PAGE分别测得相对分子质量为39 000和40 000;IEF-PAGE测得酶的等电点为4.0;最适作用pH值和温度分别为3.5和70℃;糖质量分数19.6%;Mg2 、Ca2 、Li 、Na 、K 对酶有激活作用,Pb2 、Co2 、Fe3 、Mn2 、Hg2 对酶有抑制作用;酶对角豆胶的Km和Vmax分别为66.7 g/L和333μmol/(min.mg);酶蛋白的氨基酸组成中Asp和Glu含量最高;HPLC分析角豆胶酶水解液的主要产物是低聚糖。 相似文献
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采用缓冲液浸提、硫酸铵盐析、Phenyl—Sepharose CL-4B疏水层析和Sephadex G-75凝胶过滤层析等分离纯化手段,从宇佐美曲霉E001固态发酵曲中分离出木聚糖酶组分,再经DEAE-Sepharose fast flow阴离子交换层析进一步纯化,获得了两种电泳纯木聚糖酶XynⅠ和XynⅡ.分别采用SDS-PAGEG-75凝胶过滤层析测得XynⅠ、XynⅡ相对分子质量,两种酶均为单体蛋白质;等电聚焦电泳测得两种酶的等电点(pI);测定了XynⅠ、XynⅡ的酶动力学常数;序列测定XynⅡN末端15个氨基酸残基的. 相似文献
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从纳豆菌发酵液中提取纳豆激酶,采用20%~60%饱和度的硫酸铵沉淀,Supherdex G-75凝胶过滤层析对活性组分进行分离提纯.并用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电(SDS-PAGE)对分离纯化的效果进行了检验.结果表明在SDS-PAGE中观察到单一条带,分子量27.7 ku. 相似文献