海洋细菌Pseudoalteromonas sp.G23产低温淀粉酶发酵条件的研究

从江苏连云港海域筛选和分离到1株产低温淀粉酶的海洋细菌Pseudoalteromonas sp.G23,对该菌株进行了产α-淀粉酶发酵条件研究,结果表明,该菌株发酵16h后到达产酶高峰,最适产酶温度为15℃,最适产酶pH值为8.5,装液量为20%。可溶性淀粉、酵母膏和蛋白胨促进产酶。利用响应面方法对菌株Pseudoalteromonas sp.G23产α-淀粉酶的发酵条件进行了优化,结果表明,可溶性淀粉浓度为1.16%、蛋白胨浓度为2.11%,发酵温度12.38℃,酶活为41.4U/mL,较优化前提高了7倍。     

Bacillus sp.L1胞外蛋白酶EL1基因克隆及酶学性质分析

目的:对菌株Bacillus sp. L1分泌的胞外蛋白酶EL1进行分离纯化、基因克隆及酶学性质研究。方法:利用硫酸铵沉淀、阴离子交换层析从菌株Bacillus sp. L1的发酵液中分离纯化出胞外酶EL1,对其进行了质谱分析、基因克隆及酶学性质研究。结果:质谱结果提示EL1属于丝氨酸蛋白酶,该酶基因开放阅读框为1326 bp,蛋白序列共441个氨基酸,氨基酸序列与菌株Bacillus stratosphericus分泌的丝氨酸蛋白酶(WP₀07499449)同源性最高(98%)。该酶最适温度60℃,具有较好的热稳定性;最适pH8.0,在pH8.0时稳定性较好;Mn²⁺对其有一定的激活作用,Cu²⁺对其有一定的抑制作用。结论:Bacillus sp. L1分泌的胞外蛋白酶EL1具有较好的热稳定性,在碱溶液中可以保持较高的活力,具有潜在的工业应用价值。     

海洋细菌Pedobacter sp.NJ-02产κ-卡拉胶酶的发酵条件优化

通过筛选分离获得一株产κ-卡拉胶酶活力较高的菌株NJ-02,通过生理生化实验,16S r RNA基因序列测定和系统发育树分析,鉴定其为农杆菌属Pedobacter sp.。通过设计单因素和响应面实验,确定该菌株的最佳产酶发酵条件。通过单因素实验得其最佳发酵产酶条件为:碳源为κ-卡拉胶(2.00 g/L)、氮源为酵母浸提物(4.00 g/L)、p H 7.00、接种量5%、培养温度30℃、摇床转速150 r/min。通过液体培养基单因素研究,确定了三个影响产κ-卡拉胶酶的关键因素,分别是碳源、氮源和初始p H。根据Box-Behnken中心组合方法采用三因素三水平响应值设计实验优化,得到最佳的培养基配方为:卡拉胶浓度2.15 g/L、酵母浸提物4.32 g/L、p H 7.10。结论:优化后酶活最高可达19.01 U/m L,较优化前提高了1.20倍,NJ-02最佳发酵条件的建立,为获得大量的κ-卡拉胶酶进行更深入的研究提供了实验基础和理论依据。     

低分子量岩藻多糖的生产途径及药理作用

介绍了近年来一些产岩藻多糖酶的微生物菌株及酶的固态发酵条件，经过酶解得到低分子量的岩藻多糖，有着诸多药理作用。     

枯草杆菌Bacillus sp F26产过氧化氢酶的发酵条件

从内蒙古呼伦贝尔草原的盐碱湖中分离到的一株低度嗜盐嗜碱细菌Bacillus sp F26，能积累高水平过氧化氢酶（CAT）。对Bacillus sp F26发酵产过氧化氢酶的环境与营养条件的研究结果表明，其积累高水平过氧化氢酶的适宜环境条件为：温度37℃，种龄20-22h，接种量5％，装液量50mL／（250mL的摇瓶）。适宜发酵培养基组成（g／L）为：葡萄糖15，牛肉膏10，玉米浆10，酵母膏5，磷酸二氢钾1，氯化镁0．2，氯化钠50，碳酸钠10。采用上述条件进行摇瓶分批发酵实验，发酵20h，过氧化氢酶酶活达到16．32U／mL，细胞干重为4．12g／L。进一步研究发现，在对数生长后期（16h）添加2mmol／L的H2O2可以明显刺激产酶，在5L的发酵罐上进一步以指数速率方式流加H2O2，由于该流加方式可降低H2O2对细胞的毒害作用，过氧化氢酶酶活达到29．89U／mL，与分批发酵相比提高了92．8％。     

海洋细菌Sphingomonas sp. Q2产琼胶酶发酵条件优化、酶学性质及降解产物研究

本研究旨在对从江蓠中筛选获得的Sphingomonas sp. Q2菌株产琼胶酶能力条件进行优化并对其酶学性质及降解产物进行研究。通过响应面法对发酵条件进行优化,采用硫酸铵沉淀、离子交换层析和凝胶层析等方法对发酵所得酶液进行纯化并对纯化后的酶液进行酶学性质研究。发酵优化结果表明该菌株产琼胶酶的最佳培养基组成为：琼脂4.42 g/L、磷酸氢二钾1.30 g/L、氯化钠10.51 g/L。优化后的酶活力为1085.71 U/mL,较优化前提高了1.58倍。纯化后的琼胶酶比活为112048.82 U/mg,纯化倍数为7倍,回收率为48.04%。酶学性质结果表明该酶最适反应温度为40℃,最适pH为6.5,且在最适温度下保存8 h,酶活仍保持在90%以上。MS和¹³C-NMR结果表明,该琼胶酶的降解产物主要为新琼四糖。该琼胶酶具有良好的热稳定性及较高的酶活力,为琼胶寡糖的开发制备提供了基础。     

海洋细菌Bn-103产抑菌物质发酵条件及部分理化性质

对从海泥中分离到的一株海洋细菌Bn-103产抑菌物质的培养基、发酵条件及所产抑菌物质的热稳定性、pH值稳定性进行了初步研究。结果表明,海洋细菌Bn-103适宜培养基成分组合为：葡萄糖1 g/dL,蛋白胨0.1～0.3 g/dL,酵母膏0.1 g/dL,海水添加量60%～80%;培养基初始pH 5.0～7.0;接种体积分数2%～4%;发酵时间48～72 h;抑菌物质80℃处理90 min,保留活性80%以上,pH值稳定在pH 3～8之间。     

海洋黄杆菌来源岩藻多糖酶Fcn1的异源表达及酶学性质

为了寻找和挖掘降解岩藻多糖的新型酶,以从海带中筛选获得的一株可以降解岩藻多糖的海洋黄杆菌Flavobacterium sp. RC2-3为研究对象,对其进行了全基因组测序。通过与已报道的岩藻多糖酶氨基酸序列比对,并进行转录组学分析及实时荧光定量PCR验证,挖掘了1个可能的岩藻多糖酶基因,并将其命名为Fcn1。Fcn1基因全长1221bp,编码406个氨基酸,蛋白分子质量约为46.8kDa。通过引物设计、PCR扩增,将Fcn1基因克隆,进一步构建了Fcn1基因异源表达载体Fcn1-pET-28a(+),并将其成功地在大肠杆菌BL21(DE3)表达宿主中进行了诱导表达。所得重组酶Fcn1通过带有His标签的镍柱进行分离纯化,采用铁氰化钾法测定纯化酶酶解岩藻多糖的比酶活(332U/mg),纯化倍数为2.25。酶学性质研究表明,重组酶Fcn1最适反应温度为50℃,最适反应pH值为8.0,在20~30℃和pH值为7.0~8.0时表现出较好的稳定性。结合酶学性质研究结果,确定酶的最适反应条件为30℃,pH值为8.0,并测定了岩藻多糖酶水解反应的动力学参数,K_m为1.17mg/mL,V_max为10.53g·L-1·min-1。该酶降解岩藻多糖的酶活力较高,在岩藻多糖资源的开发领域具有较大应用潜力。     

海洋低温葡萄糖氧化酶细菌选育及其酶学性质研究

为获得产低温葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)的细菌,提高其产酶能力,研究GOD酶学性质,通过平板显色法从海泥样品中筛选低温GOD生产菌株,经形态特征、生理生化鉴定及分子生物学鉴定确定菌株分类。经诱变育种获得高产GOD菌株,并对所产GOD进行酶学性质研究。研究获得1株编号8-III的高产低温GOD细菌,鉴定为柠檬酸杆菌属(Citrobacters sp. 8-III),产GOD酶活力为0. 75 U/m L。经诱变得到可稳定遗传的突变菌株8-III-a44,产GOD酶活力为1. 77 U/m L,为原始菌株的2. 36倍。最适p H为6. 5,最适作用温度为15℃,在0～35℃有较高酶活力,为低温酶。并且添加K+、Ni2+对GOD活性有明显促进作用。该研究为其在海产品保鲜、饲料防腐方面的应用奠定基础。     

响应面法优化海洋细菌Bacillus sp.YP07淀粉酶发酵条件研究

从海南洋浦近海分离到1株产淀粉酶的海洋细菌Bacillus sp.G23,利用Plackett-Burman设计对发酵条件进行了筛选,结果表明,蛋白胨、酵母粉和NaCl浓度对酶产量具有显著的影响;利用响应面法对3个因子进行了优化,获得了最佳发酵条件:可溶性淀粉5.00g/L,蛋白胨3.88g/L,酵母粉3.97g/L,NaCl 37.69g/L,pH7.0,180r/min、35℃培养48h,酶产量为665.4U/mL,较初始酶产量提高了4.3倍.     

产胞外多糖芽胞杆菌的发酵动力学研究

对芽胞杆菌胞外多糖发酵动力学进行了研究.基于Logistic和Luedeking-Piret方程,得到了描述芽胞杆菌发酵过程菌体生长、多糖形成、底物消耗的动力学数学模型和模型参数.模型反映了该菌株发酵过程的动力学特征,模型值与实验数据拟合良好,平均误差小于10%.     

细菌Flavobacteriaceae sp.CZ1127产海参岩藻聚糖硫酸酯酶的发酵条件优化

以从海洋中分离筛选得到的细菌Flavobacteriaceae sp.CZ1127为研究对象,通过单因素实验和正交试验对其产海参岩藻聚糖硫酸酯酶的培养基成分进行优化,提高其产酶量.得出其最佳培养基组成为(w/v):海参岩藻聚糖硫酸酯0.25%、酵母粉0.15%、MgSO4·7H2O0.05%、CaCl20.02%、KC...     

岩藻多糖酶产生菌的筛选、鉴定及发酵条件初探

从我国厦门海域采集的样品中分离得到129株真菌,以岩藻多糖为唯一的碳源,经过初筛和复筛得到28株岩藻多糖酶产生菌,其中PZ322号菌株岩藻多糖酶产量最高为3.83IU/ml,且发酵性能较稳定,被确定为下一步研究的出发菌株。我们对该菌株进行了形态学鉴定及ITS序列分析,表明该菌为温特曲霉(Aspergillus wentii)。发酵实验结果表明,PZ322产岩藻多糖酶的较优培养基为(%):麸皮5,海带粉2,(NH4)2SO40.4,此时酶活力最高可达6.90IU/ml。     

产胞外多糖海洋细菌M4的发酵动力学研究

应用logistic方程和Luedeking-Piret方程,通过产多糖海洋细菌M4发酵过程得到菌体生长,多糖合成,底物消耗的动力学参数,确定了动力学方程.经验证,动力学模型与实验数据较好拟合.发酵到48h菌体生长趋于稳定期,胞外多糖的合成在快速生长期与稳定期都有合成,120h多糖产量达到最大8.1g/L,属混合型发酵.同时发现在生长稳定期减少氧供给亦能正常合成多糖.     

红酵母RY-08产类胡萝卜素的发酵条件研究

研究不同碳源和氮源对红酵母RY-08产类胡萝卜素的影响,并用正交试验对碳源、氮源、装液量及发酵时间进行优化。结果表明在葡萄糖40 g/L,蛋白胨20 g/L,装液量30 mL/250 mL,发酵时间72 h的发酵条件下其生物量、类胡萝卜素含量和产量分别达到19.7 g/L,418.6μg/g,8.2 mg/L。     

纳豆菌液体发酵条件的初步研究

纳豆菌为具有很多生理功能的益生菌,能开发多种有保健功能的产品.以实验室选育的纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)BN.0301为出发菌株,研究其液体发酵,对碳源和氮源进行了初步筛选,并确立了其发酵条件为种龄18hr,接种量1%,温度30℃,摇瓶转速180rpm,装液量40ml/250ml,初始pH值6.0,摇瓶发酵周期33hr.     

Bacillus sp.CAMT22370源葡萄糖氧化酶对南美白对虾贮藏性能的影响

培养Bacillus sp.CAMT22370菌株并提取葡萄糖氧化酶制成质量分数0.1%的粗酶液,分别以亚硫酸钠、植酸和VC为对照,探讨所得葡萄糖氧化酶对南美白对虾冷藏过程中感官、质构、挥发性盐基氮含量、菌落总数等品质指标的影响。结果表明,经葡萄糖氧化酶浸渍处理后于4℃冷藏120 h,感官评分在10分以上,不仅能有效防止对虾褐变,而且对其色泽、气味、硬度、弹性、咀嚼性和黏附性等品质指标都有良好的保持作用,显著优于空白对照组(P0.05),挥发性盐基氮含量和菌落总数分别为20.40 mg/100 g和4.41(lg(CFU/g)),表明Bacillus sp.CAMT22370源葡萄糖氧化酶对南美白对虾冷藏保鲜有一定的作用。