基于λ噬菌体裂解基因表达的PHB分离新工艺

将S基因琥珀突变的λ噬菌体裂解基因(S-RRz)引入产聚β-羟基丁酸酯（PHB）的重组大肠杆菌VG1(pTU14)中以实现细胞的可控裂解破壁.采用EDTA/Tris(pH值8.0)缓冲液处理结果表明,S-RRz在VG1(pTU14)中能够成功表达,且EDTA对细胞裂解的决定性作用是由于它模拟了S基因产物的功能.当细胞内PHB含量为85％～90％时,大量积累的PHB颗粒可以改变细胞膜的通透性,实现重组细胞的内控自裂解.对PHB与细胞进行直接分离的后处理工艺研究表明,在S-RRz成功表达的基础上,采用升温处理模拟S基因产物的功能诱导细胞自裂解,PHB产品纯度可以达到95％以上.     

重组大肠杆菌VG1(pTU14)产PHB的补料分批培养

利用已构建的同时含有透明颤菌血红蛋白基因 (vgb)、λ噬菌体裂解基因 (S-RRz)和PHB合成基因(phbCAB)的产PHB基因工程大肠杆菌VG1(pTU14 ) ,在 5L发酵罐里进行补料分批培养 .研究发现 :碳氮比(C/N) ,DO(溶氧 )及碳源和氮源的浓度是影响菌体生长和PHB积累的重要因素 ;补料时间可以通过DO和 pH值两个参数的变化在线综合识别 ;流加策略应使发酵前期菌体大量生长 ,发酵后期PHB大量积累 .在优化条件下 ,对VG1(pTU14 )进行 6 0h的补料分批培养 ,菌体细胞浓度、PHB浓度和PHB占细胞干质的分数分别高达2 15 .9g·L^-1、 193.7g·L^-1和 89.7% .