核盘菌和草酸诱导下的油菜几种酶活力的变化分析

油菜菌核病是油菜生产中的重要病害之一,为了进一步探讨菌核病的致病机理和抗病机制,采用草酸浸叶和接种核盘菌菌丝两种方法分别处理甘蓝型油菜叶片,确定草酸最佳浓度为3 mmol/L,分析叶片中过多酚氧化酶(PPO)、氧化物酶(POD)、纤维素酶和几丁质酶的活力变化,发现草酸和核盘菌都可以诱导防御酶PPO和POD活力升高,可增...     

影响球毛壳菌原生质体转化的因素

采用PEG介导的原生质体转化法研究了含有多菌灵抗性基因的质粒pRBl29转化球毛壳菌的影响因素．结果表明，最佳转化条件为：以1．0mol／L山梨醇作为渗透压稳定剂，20mmol／L Ca^2 和终质量分数为50％的PEG4000作为转化介质，于25℃转化10min，采用缓慢逐步稀释的方法，转化后l.5d筛选转化子，此时，转化率最高，且有较高的重复性，DNA平均转化率为5．6个／μg．该结果对球毛壳菌其他性状的改进及其他丝状真菌的遗传转化具有重要参考价值．     

影响球毛壳菌原生质体转化的因素

采用 PEG 介导的原生质体转化法研究了含有多菌灵抗性基因的质粒 pRB129转化球毛壳菌的影响因素.结果表明,最佳转化条件为:以1.0 mol/L 山梨醇作为渗透压稳定剂,20 mmol/L Ca~(2+)和终质量分数为50%的 PEG4000作为转化介质,于25℃转化10 min,采用缓慢逐步稀释的方法,转化后1.5 d 筛选转化子,此时,转化率最高,且有较高的重复性,DNA 平均转化率为5.6个/μg.该结果对球毛壳菌其他性状的改进及其他丝状真菌的遗传转化具有重要参考价值.     

大肠杆菌无细胞蛋白质合成系统的初步研究

陈海琴，徐志南，汪诚，廖玉华，岑沛霖在近几年来被广泛研究和应用的大肠杆菌无细胞蛋白质合成系统中，大肠杆菌抽提物的制备、底物浓度的配比以及能量再生体系的选择是最关键的几个因素.以绿色荧光蛋白(GFP)为报导基因，以缺失核酸酶I基因的大肠杆菌A19为实验菌株，通过对大肠杆菌无细胞抽提物制备过程中菌体收集时间、细胞破碎压力、后处理条件等参数的摸索和确定、无细胞蛋白质合成系统中底物浓度配比的正交实验优化以及系统中能量再生体系的比较和选择，制备得到了GFP表达量为154 μg/mL的大肠杆菌无细胞蛋白质合成系统，与优化前相比产量提高了29倍.     

无抗性选择标记的植酸酶基因转化DNA的构建

构建了无抗性选择标记植酸酶基因的转化片段DNAphyAⅡ 。两侧设置了高等植物基因组DNA保守序列CAATbox,TATAbox和polyA的DNA片段 (DNAphyAⅡ ,5’ CAATbox TATAbox CaMV3 5S phyAⅡ GUS Nos Tem polyA 3’) ,为提高转化率奠定了分子基础 ,此外DNAphyAⅡ 中植酸酶蛋白编码基因phyAⅡ前后的启动子和终止子序列 ,确保了phyAⅡ会得以正确表达     

贻贝粘合蛋白基因转化巴斯德毕赤酵母

贻贝粘合蛋白可以作成性能优异的生物防腐剂和粘合剂。报道了一种新的贻贝(Mytilussp.JHX 2002)的粘合蛋白基因(msfp 1)转化载体的构建,以及该质粒转化巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris,Gs115)。将克隆载体pUC118/msfp 1以及质粒pPIC9K分别用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切,连接获得表达载体pPIC9K/msfp 1,电击法转化至Gs115中。组氨酸野生型检测以及PCR检测,从而获得msfp 1基因重组酵母菌Gs115/msfp 1。     

贻贝粘合蛋白基因转化巴斯德毕赤酵母

贻贝粘合蛋白可以作成性能优异的生物防腐剂和粘合剂。报道了一种新的贻贝(Mytilus sp．JHX-2002)的粘合蛋白基因(msfp-1)转化载体的构建，以及该质粒转化巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris，Gs115)。将克隆载体pUC118／msfp-1以及质粒pPIC9K分别用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切，连接获得表达载体pPIC9K／msfp-1，电击法转化至Gs115中。组氨酸野生型检测以及PCR检测，从而获得msfp-1基因重组酵母菌Gs115／msfp-1。     

LC-1 ScFv偶联GFP基因的构建及表达

从具有高效蛋白表达及活力的抗肺癌杂交瘤单克隆细胞株（LC-1）抽提总RNA，反转录成cDNA。根据肿瘤单链抗体（ScFv）基因设计引物，用多聚酶链式反应（PCR）克隆出抗体的重链和轻链基因，并通过重叠延伸PCR法将重链基因与修饰后的轻链基因连接为单链抗体基因。改造后的ScFv与绿色荧光蛋白（GFP）基因连接，构建表达质粒ProGFP-ScFv，随后转化大肠杆菌JM109，用诱导剂IPTG进行诱导表达。表达产物采用Ni-NTA树脂进行纯化，进行SDS-PAGE电泳分析其纯度。酶联免疫检测（ELISA）表明该蛋白已具有抗体活性。395 nm激光激发显示绿色荧光，表明目的基因在原核生物中存在表达。     

重组质粒pMG36e-nisI-gfp在乳酸菌中的应用

本研究将带有nisI和咖（绿色荧光蛋白）基因的乳酸菌表达载体pMG36e-nisI-gfp转化至乳酸菌中,观察其在宿主内的稳定性．对重组菌进行了菌体形态、传代培养、质粒验证等研究,考察了该质粒的稳定性．结果显示：重组菌在不含抗生素的培养基中连续传代20代后,质粒丢失率低;菌体大小和形态基本不变;质粒经HindⅢ酶切后大小不变;GFP在第0、5、10、15和20代宿主菌中都可以表达,表达量没有明显差别,在SDS-PAGE中的带型一致;初步的动物实验验证了该质粒作为遗传标记的应用效果．说明该质粒在宿主菌中具有良好的稳定性．     

多环境目标模糊优化的绿色设计方法研究

产品的绿色设计过程是针对产品预期的环境目标,各相关绿色设计策略的综合平衡和总体优化的过程.不同的绿色设计策略解决产品系统中不同的环境问题.根据多目标模糊优化原理,并考虑到各个绿色设计目标的重要性程度和各目标之间的矛盾与平衡,建立了产品环境特性的多目标模糊优化设计模型.通过分析电子加热器所用材料的环境相对负荷,在不增加产品重量和保证结构强度的前提下,以降低产品系统环境相对负荷为目标,考虑各设计策略的制约和平衡,对各材料的比重及相关过程进行了优化设计.最终,产品材料的环境相对负荷总值降低了12.3%,能源消耗减少了14.8%,材料成本降低了6.2%.     

基于“绿当量”的济南绿地生态补偿建设方案

城市生态绿地系统是生态城市建设的核心内容,是改善维持城市生态环境,提高舒适和谐的人居环境质量的重要保障.城市绿地生态补偿能力定量化的研究是科学合理的进行城市生态绿地系统规划和城市规划及建设的前提和基础.文章以济南市为例,以RS和GIS技术为支撑,应用生态学、景观生态学和城市生态绿地系统规划的相关理论,基于碳氧平衡原理,采用“绿当量”方法,对济南市生态绿地系统生态补偿能力进行了分析研究,定量化提出了济南市各行政区加强生态补偿能力的绿地建设方案.     

水产品中孔雀石绿及其代谢物快速检测方法研究

建立一种简便、快速的检测水产品中孔雀石绿及其代谢物残留量的方法。采用乙腈提取、固相萃取柱净化浓缩,氧化剂将隐性孔雀石绿氧化为孔雀石绿,用化学比色法观察结果,从而建立一种简便、快速的初筛方法。加标回收率为70%～95%,相对标准偏差为5.46%～9.90%,孔雀石绿及代谢物的检出限分别为2μg/kg和4μg/kg。本方法相对于国标法操作更简便快速,适用于大批量样品检测。     

QM基因研究进展

对QM基因的研究进展做了综述,希望为深入开展不同物种QM基因功能研究提供一些参考。     

Lrrcl0蛋白表达载体的构建

为了构建重组质粒pET～Lrrcl0和Lrrcl0蛋白表达,利用NcoI和BamHI双酶切载体pMDl8-T-Lrrcl0,回收目的片段与经同样酶切后的表达载体pET-30a（＋）,转入E．colistrainDH5d．茵落PCR筛选阳性茵落,提取阳性茵质粒并进行PCR和酶切鉴定;将重组子转入E．colistrainB121（DE3）,于37℃振荡培养,用1mmol／LIPTG诱导目的蛋白的表达。结果表明,成功构建了融合表达载体并命名为pET-Lrrcl0。转入E．colistrainBL21（DE3）进行目的蛋白的表达,获得与预期分子量大小相一致的融合表达蛋白Lrrcl0;Lrrcl0蛋白以包涵体形式存在于宿主菌中,且IPTG诱导4小时,目的蛋白表达量最大。     

克鲁维酵母菊粉酶基因在毕赤酵母中的表达

从菊粉酶酶源菌株克鲁维酵母GKluyveromycesmarxianus)Y109中提取菊粉酶基因,PCR扩增Y109的菊粉酶基因inuB1,核苷酸序列测定分析表明inuB1的阅读框架全长1665bp,没有内含子,其中存在4个潜在的N 糖基化位点。以pPIC9K为表达载体,构建inuB1的酵母转化载体,转化毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115,获得菊粉酶基因工程菌GS115/inuB1。GS115/inuB1甲醇诱导发酵表达菊粉酶,inuB1基因重组胞外菊粉酶表观分子量为90kD(SDS PAGE),比酶活性是12.29U/mg。     

克鲁维酵母菊粉酶基因在毕赤酵母中的表达

从菊粉酶酶源菌株克鲁维酵母GKluyveromyces marxianus)Y109中提取菊粉酶基因，PCR扩增Y109的菊粉酶基因inuB1，核苷酸序列测定分析表明inuB1的阅读框架全长1665bp，没有内含子，其中存在4个潜在的N一糖基化位点。以pPIC9K为表达载体，构建inuB1的酵母转化载体，转化毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115，获得菊粉酶基因工程菌GS115／inuB1。GS115／inuB1甲醇诱导发酵表达菊粉酶，inuB1基因重组胞外菊粉酶表观分子量为90kD(SDS-PAGE)，比酶活性是12．29U／mg。     

我国实施绿色会计的必要性与对策研究

通过《2009年中国环境状况公报》中的数据,分析了我国当前的环境现状.从＂绿色GDP＂、经济增长方式的转变、对外开放国策三方面阐述我国实施绿色会计的必要性.提出我国实施绿色会计的现实对策,即政府出台更加完善的执行和监管制度,扩大资源税的征收范围和征收力度以及提高我国绿色会计的理论水平等.     

武汉地区结核分枝杆菌链霉素耐药分离株 rpsL 基因分子特征研究

探讨武汉地区结核分枝杆菌链霉素（ SM）耐药临床分离株rpsL基因分子特征。收集71株临床分离株,采用刃天青法测定临床分离株对SM的最低抑菌浓度（ MIC）,同时用直接测序法分析rpsL基因的突变情况;用RD105基因缺失检测法鉴定71株临床分离株中“北京基因型”菌株。结果显示20株SM敏感株rpsL基因未发现突变（ MICs＜0．25 mg/L）;51株SM耐药株中,35株（68．6％）检测到rpsL基因突变,主要发生在第43位和88位密码子,MIC≤1 mg/L的SM耐药株（低水平耐药株）总突变率低于MIC≥2 mg/L （高水平耐药株）;北京基因型与耐药株的相关性不大。研究表明SM耐药菌株rpsL基因突变类型存在地域差异;rpsL突变与SM高水平耐药的相关性在本研究中关联度不大;“北京基因型”菌株在武汉地区呈流行趋势。     

虚拟制造在绿色制造中的应用研究

虚拟制造技术为设计者提供一个设计产品和评估可制造性的环境,在绿色制造中应用虚拟制造技术,能够缩短制造周期,降低生产成本.分析虚拟制造在绿色制造中的应用,探讨产品加工工艺、制造、装配、拆卸等环节的模拟仿真.     

物理化学实验室绿色化建设探讨

物理化学实验室绿色化建设在高等教育中具有重要意义。本文从绿色化学意识、硬件设施、实验装置、实验测定体系和废弃物五个方面，详细评述了物理化学实验室的绿色化建设现状。