固定化磷脂酶A催化制备DHA型磷脂

以磷脂酰胆碱(PC)富集物和二十二碳六烯酸(DHA)浓缩液为底物,正己烷为反应介质,在固定化磷脂酶A1(PLA1)的催化作用下,制备DHA型磷脂(PL-DHA)。研究了底物摩尔比、加酶量、溶剂用量、反应温度、水活度、反应时间对PL-DHA制备的影响。通过条件优化,确定最佳条件为:DHA浓缩液和PC的摩尔比为4∶1,加酶量为2种底物总质量的20%,溶剂用量为4 m L,反应温度为40℃,反应时间为2 h。经气相色谱定量分析,得到的磷脂中DHA的含量为17.7 mg/g PL,并用棒状薄层色谱火焰离子检测器(TLC-FID)分析了PC含量随反应的变化。     

磷脂酶A1催化大豆粉末磷脂水解工艺研究

利用磷脂酶A1对大豆粉末磷脂进行水解,研究了反应温度、加酶(PLA1)量、反应时间、加水量及搅拌速度对磷脂酶A1水解大豆粉末磷脂的影响.通过单因素试验确定的最佳反应条件为:反应温度60℃,加酶量8%,反应时间8 h,加水量5 mL,搅拌速度500 r/min.在此条件下产物酸价可以达到101.4mgKOH/g.     

磷脂酶A1催化水解大豆浓缩磷脂的研究

研究了反应温度、加酶量、底物比(水/磷脂,mL/g)、反应时间对磷脂酶A1水解大豆浓缩磷脂的影响.采用正交设计方法,确定了各因素影响的显著性顺序为:底物比>反应温度>反应时间>加酶量;磷脂酶A1水解大豆浓缩磷脂的最佳工艺条件为:反应温度40℃,加酶量600μL,底物比12,反应时间10h.最佳工艺条件下产物酸值达129.6mgKOH/g.     

响应面优化磷脂酶A1催化酯化制备甘油二酯

以大豆油脂肪酸和甘油为原料,经磷脂酶A1(Lecitase Ultra)催化酯化制备甘油二酯。利用响应面法优化试验条件,研究反应温度、加酶量、底物摩尔比值(甘油与脂肪酸摩尔比值)、反应时间对酯化率的影响。得出的最佳反应条件为:反应温度40℃,加酶量90 U/g,底物摩尔比值2.2,反应时间12 h。最佳条件下平均酯化率81.12%。反应混合液经过静置分层,采用分子蒸馏法除去油层中未反应的游离脂肪酸和副产物甘油单酯,得到甘油二酯产品,产品得率为51.32%,产品甘油二酯含量为72.62%。     

磷脂酶D的制备及催化磷脂酰胆碱合成磷脂酰丝氨酸

选用穗色链霉菌(Streptomyces racemochromogenes)作为磷脂酶D的生产菌株进行了酶的制备及条件优化,并在两相体系中进行了酶催化磷脂酰胆碱合成磷脂酰丝氨酸的研究。结果表明,最适的产酶条件为葡萄糖10 g/L、酵母粉5 g/L、鱼粉蛋白胨5 g/L、司班-60 10 g/L、氯化钙3 g/L,接种量1%、培养基初始p H 7.0、培养温度30℃,在最适产酶条件下酶活达到2 967 U/L,是优化前的2.12倍;最适的催化工艺条件为有机相二氯甲烷、反应温度35℃、p H 5.5、酶用量1.15 U/m L、钙离子浓度10 mmol/L,在该催化工艺条件下反应10 h后磷脂酰胆碱的生成率达94%。     

水相体系中磷脂酶A1酶解南极磷虾磷脂制备溶血磷脂的分析

采用磷脂酶A1（phospholipase A1,PLA1）在水相体系中酶解南极磷虾磷脂,以期得到富含二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid,EPA）和二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid,DHA）的溶血磷脂。以酸价衡量磷脂酶解程度,通过高效液相色谱对酶解前后磷脂组分进行分析,结合甘油磷脂酰胆碱（glycerol phosphatidylcholine,GPC）含量分析进一步证实酰基位移现象,并利用气相色谱-质谱分析磷脂酶解前后脂肪酸组成。结果表明：酸价随加酶量的增加呈现先上升后下降的趋势。随着酶解时间的延长,Sn-2-溶血磷脂酰胆碱（Sn-2-lysophosphatidylcholine,Sn-2-LPC）含量先增加后趋于平衡,Sn-1-溶血磷脂酰胆碱（Sn-1-lysophosphatidylcholine,Sn-1-LPC）含量先升高后降低,这是由于部分Sn-2-LPC发生酰基位移生成Sn-1-LPC,而Sn-1-LPC又进一步被PLA1酶解生成GPC,且在较短酶解时间内,温度对酰基位移的影响不大。最后通过气相色谱-质谱分析得出酶解产物Sn-2-LPC中EPA和DHA含量较高,且其乳化稳定性也得到了提高。     

磷脂酶A1催化水解大豆油研究

通过正交试验获得了磷脂酶A1催化水解大豆油的最佳水解条件:水解温度35℃、加酶量26U/g、加水量40%,水解时间8h.在此条件下,以KOH计,水解体系上层油层酸值达65.51 mg/g.当用O.1%的氯化钙水溶液作为水解反应物时,和蒸馏水相比,钙离子对维持磷脂酶A1多次循环利用的残余活力有促进作用.水解反应残余活力的磷脂酶A1再加上50%的新添加酶,表现出很强的催化水解活力,酶回收使用6次时,残余酶活力仍然有初次使用活力的86.88%.     

非水介质中磷脂酶A1催化水解磷脂酰胆碱的研究

在非水介质中,采用磷脂酶A1——Lecitase Ultra作为催化剂研究了PC的水解反应。经HPLC分析,在不同的溶剂体系中,水解产物亦不同。溶剂和界面的疏水性质是影响产物组成的关键因素。水分含量对反应初速率的影响显著,非极性溶剂中的最大反应初速率大于极性溶剂体系中的。     

聚乙烯醇-海藻酸钠固定化磷脂酶A1的研究

以聚乙烯醇、海藻酸钠为载体,以固定化磷脂酶活力和回收率为依据,确定最佳固定化工艺为:以10%聚乙烯醇和2%海藻酸钠为载体,酶的加入量为10 mg/100 g,在4%硼酸和2%氯化钙的交联剂中处理30 min,载体粒径为4 mm,得到的固定化磷脂酶的活力为140.48 U/g,其热稳定性和pH稳定性较游离酶得到提高,并且具有较好的操作稳定性、贮藏稳定性及动力学特性。     

磷脂酶A1水解大豆浓缩磷脂研究

该研究采用磷脂酶A1水解大豆浓缩磷脂,通过单因素实验确定各因素合适范围,利用响应面实验方法,得到磷脂酶A1水解大豆磷脂最佳工艺条件为:反应温度51℃、反应时间6h、加酶量3．6％、 pH值5．0、底物浓度0．25 g／mL;利用气相色谱仪分析水解前后磷脂脂肪酸组成,硬脂酸完全水解,棕榈酸含量从20．2％减至5．1％。     

固定化磷脂酶A1水解卵磷脂的研究

对固定化磷脂酶A1水解卵磷脂的条件进行优化，经正交试验确定最佳的酶解条件，即酶解温度为50℃，反应溶液pH为8．0，2％溶血磷脂4mL酶解时间10h，且酶解溶液中加入溶血磷脂对磷脂的水解影响最显著。     

磷脂酶D的纯化及催化制备磷脂酰丝氨酸研究

采用硫酸铵分级沉淀、离子交换层析和凝胶层析对广岛链霉菌SK43.001-11发酵液中的磷脂酶D进行纯化,并对双液相体系中酶法制备磷脂酰丝氨酸的工艺进行研究。结果表明,纯化后,磷脂酶D比酶活提高到49.48 U/mg,是粗酶液的54. 37倍,回收率为32.31%。磷脂酶D双液相催化制备磷脂酰丝氨酸的最佳条件为:有机相为乙醚,pH6.5,反应温度30℃,L-丝氨酸与磷脂酰胆碱质量比15∶1,有机相与水相体积比1∶1,反应时间2.5h。在最佳条件下,磷脂酰丝氨酸生成率达到74.8%。     

固定化脂肪酶催化制备甘油三酯型鱼油

以固定化脂肪酶作为催化剂,以甘油和鱼油乙酯为原料进行酯交换反应制备甘油三酯型鱼油。通过单因素试验考察了酶种类、真空度、反应温度、加酶量对酯交换反应的影响,并采用正交试验对酯交换反应条件进行了优化。结果表明：固定化脂肪酶催化制备甘油三酯型鱼油的最佳反应条件为Novozym 435脂肪酶作为催化剂、真空度500 Pa、反应温度50 ℃、加酶量2%、反应时间15 h,在该条件下产物中甘油三酯含量达到78%,经过分子蒸馏后甘油三酯含量达到82.08%;脂肪酶重复使用15次,酯交换反应后产物中甘油三酯含量仍能达到74%。     

环氧基修饰磁性微球固定化磷脂酶A1

以自制的环氧基修饰的Fe3O4磁性微球为载体固定化磷脂酶A1,采用响应面试验优化固定化条件,并研究固定化酶的酶学性质。结果表明：最佳固定化条件为缓冲液pH?4.0、固定化时间1.9?h、酶液添加量3.6?mL/g,得到的酶活力为3?675?U/g,固定化率为61.1%。固定化酶与游离酶比较,最适pH值向碱性方向偏移1.0,最适温度提高5?℃;贮藏稳定性有一定程度的提高;在重复菜籽油脱胶8?个批次后,仍保留81.1%的酶活力。此外,通过X射线衍射、衰减全反射傅里叶变换红外光谱、扫描电子显微镜和透射电子显微镜等现代分析手段对载体进行表征,表明成功制备纳米尺寸的微球,且微球表面成功修饰上环氧基团。     

利用酶抑制剂固定化磷脂酶A1（PLA1）的研究

在固定化磷脂酶A1时,利用酶抑制剂与磷脂酶A1活性中心氨基酸残基结合,使戊二醛基与磷脂酶A1的非活性氨基残基缩合,从而起到保护酶活性中心基团,提高固定化酶活力作用。实验证明磷酸盐是磷脂酶A1的竞争性抑制剂,并求出Ki值。     

氨基化Fe3O4-SiO2固定化磷脂酶A1

以磁性Fe3O4-SiO2纳米颗粒为载体,研究固定化条件对磷脂酶活力的影响,通过响应面试验得到最优固定化条件为：固定化pH 6.7、固定化温度30 ℃、固定化时间7.9 h、戊二醛质量分数8.3%、加酶量8.2 mL/50 mg,在此条件下酶活力回收率能达到63.6%,蛋白固载率68%。并对制备的固定化磷脂酶的化学组分、形态结构和粒径进行分析,结果表明磷脂酶固定化效果较好,粒径均一,载体平均粒径为200 nm左右。固定化酶热稳定性、pH值稳定性和贮藏稳定性增强,最适反应温度为50 ℃,最适pH 6.0,重复操作10 次后保留60%以上的初始酶活力。     

壳聚糖／海藻酸钠微胶囊固定化磷脂酶A1及其结构考察

对壳聚糖／海藻酸钠微胶囊固定化磷脂酶A1方法进行优化，利用红外光谱和电子扫描显微镜（SEM），对微胶囊结构进行考察。表明微胶囊具有规则的通孔结构，有很大的内表面积，可增加包埋酶的效率，提高磷脂酶与卵磷脂的接触界面面积和固定化酶的活力回收。     

利用酶抑制剂固定化磷脂酶A1（PLA）的研究

在固定化磷脂酶A1时，利用酶抑制剂与磷脂酶A1活性中心氨基酸残基结合，使戊二醛基与磷脂酶A1的非活性氨基残基缩合，从而起到保护酶活性中心基团，提高固定化酶活力作用。实验证明磷酸盐是磷脂酶A1的竞争性抑制剂，并求出Ki值。     

均相壳聚糖固定化磷脂酶A1(PLA1)的研究

以壳聚糖为载体、戊二醛为交联剂、酶液,三者均相反应,固定化磷脂酶A1,对它的固定化条件及固定化酶的各种性质进行了研究。固定化最佳条件,以脱乙酰度为92.8%,平均分子量为7.84×105,戊二醛浓度为3%缩合后,在0.5mg/100mL酶、pH6.0、25mmol/L CaCl2、4℃条件下固定化酶,酶活力回收可达59%。固定化酶最适温度60℃、最适pH值8.0,Km=9.08mmol/L。     

磷脂酶A1催化水解大豆浓缩磷脂的研究

研究了反应温度、加酶量、底物比(水/磷脂,mL/g)、反应时间对磷脂酶A1水解大豆浓缩磷脂的影响。采用正交设计方法,确定了各因素影响的显著性顺序为:底物比>反应温度>反应时间>加酶量;磷脂酶A1水解大豆浓缩磷脂的最佳工艺条件为:反应温度40℃,加酶量600μL,底物比12,反应时间10h。最佳工艺条件下产物酸值达129.6mgKOH/g。