低能氮离子注入和紫外线复合诱变选育高产酿酒酵母

通过离子注入联合紫外线辐射诱变选育高产酿酒酵母菌株,根据存活率及突变率确定离子注入的诱变条件为电荷18 ke V,剂量400×10~(14) cm~(-2),紫外线辐射60 s。在该条件下,诱变获得的菌株正突变率和致死率都最高,诱变效果最好。在该条件下进行研究后获得目标菌株SC-N9015,酒精产量从14.65%提升到15.53%。多次传代实验结果显示遗传性状稳定。研究表明,通过低能氮离子注入和紫外线联合诱变选育高产酒精酵母效果显著。     

重离子辐照对红酵母的诱变作用

应用重离子加速器的50MeV／u^12C^6 重离子对胡萝卜素生产菌-红酵母(Rhodotorula RY Strain)进行辐照处理,经酵母发酵实验,发现50MeV／u^12C^6 重离子对胡萝卜素生产菌-红酵母具有诱变作用。初步筛选到了胡萝卜素产量有变化的辐照变异菌株,并对这些辐照变异菌株进行了RFLP(限制性片段长度多态性)和RAPD(随机扩增DNA多态性)分析,这些工作为工业上利用重离子对胡萝卜素生产菌进行诱变育种展现了新的前景。     

快中子、高能电子辐射处理卡那霉素产生菌的初步结果

我们曾多次进行快中子、高能电子辐射处理卡那菌株。实践证明,当选择适宜的诱变剂量时,如:高能电子为0.1～0.2KGy,快中子为1～8×10~(12)中子数/cm~2,具有较高的诱变效应。除了选择诱变剂量外,诱变效应还与菌株的敏感性、处理方法、筛选条件等有关。快中子、高能电子诱发产生的新菌株,摇瓶效价提高10.34～30.8％,投产后产量提高4.07～5.23％。     

绿色木霉原生质体的激光诱变及纤维素酶发酵条件优化

采用Nd:掺钕的钇铝石榴石固体激光器,在266 nm激发波长下,对绿色木霉CICC13038原生质体进行辐照诱变,通过微晶纤维素筛选,得到高产纤维素酶的菌株JG13,运用正交试验对诱变菌株发酵条件进一步优化,在28℃、180 r/min、发酵72 h条件下的正交试验结果表明:发酵条件为1%(NH4)2SO4为氮源,2%麸皮为碳源,0.5%Tween-80为产酶促进剂,瓶装量25 mL(250 mL 发酵瓶),纤维素酶酶活可达35.68 U/mL,相同发酵条件下,较原始菌株酶活提高25.76%.菌株JG13也可作为进一步诱变筛选的出发菌株,获得更高活性菌株.     

氮离子注入番茄红素产生菌诱变选育的研究

采用了低能氮(N )注入技术,对发酵生产番茄红素的三孢布拉霉Blakeslea trispora(-)进行了诱变选育研究.实验结果表明N 注入B.trispora(-)后得到较高的突变率和较广的突变谱,并通过诱变筛选得到BH3-701等4株高产菌株,经过连续五代遗传稳定性实验考察,高产菌株番茄红素的平均产量比出发菌株提高50%.其中BH3-701表现出很强的发酵积累番茄红素的能力,尤其在发酵后期更为突出,极大地提高了生产效率.     

~(60)Co γ射线对糖多孢红霉菌的重复诱变研究

糖多孢红霉菌963是60Co γ射线对糖多孢红霉菌M诱变筛选获得的具有抑菌活性的突变株。本实验采用60Co γ射线对糖多孢红霉菌963进行诱变,研究了重复诱变效应。结果表明,各个辐照剂量下,突变株963的致死率均低于出发菌株M。重复诱变后,菌株的形态变异率达24.1‰,比以M菌株作为出发菌株的单次诱变提高了4.8倍。实验获得了1株产物抑菌活性增强的突变株,其抑菌活性比菌株963提高了40%,正突变率为2.01‰,比单次诱变提高了20.36%。采用重复诱变的方法,总体变异丰富,菌株的形态变异率和正突变率显著提高,有利于提高诱变育种工作的筛选效率。     

N+和Ti+离子注入井冈霉素生产菌诱变筛选高产菌株的研究

利用N 和Ti 离子注入对井冈霉素生产菌株进行诱变选育,比较了出发菌株经过两种离子源注入后的诱变效应.初步探索使用金属离子和气体离子交替注入诱变方法,得到了较高的正突变率和突变增幅.用该方法诱变得到一株高产菌株B1-3,其产井冈霉素A组分的效价为21514,比出发菌株提高54.4%.经多次传代实验表明该菌株的遗传稳定性较好.     

伽马射线辐射结合亚硝基胍诱变选育他克莫司高产菌株

为了选育稳定高产的他克莫司菌株,提高发酵水平,对他克莫司出发菌株采用450 Gy剂量的~(60)Coγ辐射诱变及3 mg/mL亚硝基胍(NTG)处理30 min诱变,并分别结合链霉素和庆大霉素进行抗性筛选。经选育获得一株高产、遗传稳定的他克莫司突变株FIM-17-17,该菌株的摇瓶发酵水平较出发菌株提高了65%。考察该突变株的稳定性,及树脂AB-8、D101、HT60、XAD16、HP20和XDA-8对发酵水平的影响,并在容量1 t的发酵罐进行中试发酵验证。结果表明,突变株FIM-17-17遗传稳定,且在发酵培养基中添加2%的D101树脂后,发酵水平又提高了29.8%,发酵罐中试发酵水平平均达1 319μg/mL。结果提示,利用~(60)Coγ射线辐射和NTG复合诱变能有效获得他克莫司高产菌株。     

紫外线γ射线复合诱变筛选S-腺苷甲硫氨酸和谷胱甘肽联产发酵菌株

S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAM)和谷胱甘肽(Glutathione,GSH)均是生物体内重要的含硫类小分子活性物质,在医药、化妆品、保健品行业有着广泛的应用。本研究旨在通过复合诱变改善产朊假丝酵母Candida utilis细胞内的硫代谢途径,以实现SAM和GSH的高效联产。首先对出发菌株C.utilis SZU07-01进行两轮紫外线诱变和一轮γ射线诱变,并通过选择性培养基(含1g/LL-蛋氨酸,0.5g/L乙硫氨酸,及2g/LNaHSO3的YPD培养基)进行分离培养后,筛选获得一株可联产SAM和GSH的高效正突变菌株C.utilis SUGS-01。摇瓶发酵结果显示,SAM和GSH产量分别达到324.0mg/L和220.5mg/L,较出发菌株分别提高了131.4%和26.0%,而且该菌株经连续传代10次后,遗传性状稳定,具有良好的产业化应用前景。     

离子束诱变选育高效降解有机磷农药菌株

采用~(12)C~(6+)离子束辐照诱变有机磷降解菌,结合选择性培养基初筛突变菌株,摇瓶复筛获得1株高效降解有机磷菌株LA-1,并对有机磷农药降解进行研究。结果表明:吸收剂量为150 Gy时诱变效果最佳,通过筛选和连续8代培养,获得稳定的突变菌株LA-1,其降解有机磷量为161.71 mg/L,较原始菌株解磷能力提高了2.89倍,当有机磷农药辛硫磷和氧乐果浓度分别为800μg/mL和400μg/mL时,菌株的降解率分别为93.5%和83.6%。突变菌株LA-1对有机磷农药具有良好的降解效果。     

低能N+离子注入选育抗菌脂肽高产菌及其发酵的研究

采用了低能N^＋离子注入技术,以淀粉液化芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）ES-2为出发菌株。进行诱变选育抗菌脂肽高产菌株。研究了不同注入剂量对存活率和正突变率的影响,并获得一株抗菌脂肽高产菌,命名为淀粉液化芽孢杆菌（B.amyloliquefaciens）ES-2—4。与原始菌株相比,脂肽含量提高了15．2％。此外,对突变株的发酵特性进行了初步研究。结果表明：突变株（B．amyloliquefaciens）ES-2-4的延滞期短,稳定期长,脂肽产量高,其发酵性能有利于脂肽的大规模生产。     

高能脉冲电子束诱变筛选高产酒精酵母及其发酵条件优化

为获得更高酒精产量的菌株,以高能脉冲电子束为诱变源,以酿酒酵母Saccharomyces Cerevisiae YE0为出发菌株,通过乙醇胁迫筛选和气相色谱法测定酒精浓度,筛选得到一株性状优良的高产酒精酵母YF1.运用正交试验对诱变菌株发酵条件进行优化并比较其与出发菌株YE0的生长曲线和热致死温度,结果表明:在发酵温度...     

80 MeV/u C-12离子诱变选育PHB高产菌株

用80MeV/u12C6+离子对一株积累聚β-羟基丁酸酯(PHB)的芽孢杆菌(BacillusP-9)进行诱变选育,最终获得PHB高产株菌G15,其PHB产量达2.93g/L,与出发菌株相比较,PHB积累量提高了1.5倍。研究结果表明,本试验辐照最佳剂量为15Gy。重离子辐照诱变育种效果显著,具有广阔的发展应用前景。     

Optimization of L-lactic Acid Production of Rhizopus Oryzae Mutant RLC41-6 by Ion Beam Implantation at Low-Energy

In order to obtain an industrial strain with a higher L（＋）-lactic acid yield, the strain Rhizopus oryzae RF3608 was mutated by means of nitrogen ion beam implantation and the mutant strain RLC41-6 was isolated. Under optimal conditions the yield of L（＋）-lactic acid produced in a shake-flask reached 133 g/L - 137 g/L after 36 h cultivation, indicating that the conversion rate based on glucose was as high as 88% - 91% and the productivity was 3.75 g/L.h. It was almost a 115% increase in lactic acid production compared with the original strain RF3608.     

~(12)C离子束辐照对酵母发酵能力的影响

利用100MeV/u的12C6+离子束辐照酵母Saccharomyces cerevsiea YY,选育出一株高产突变菌株C03A,考察C03A发酵过程中不同温度、pH、糖汁浓度对发酵的影响。通过正交实验确定最佳发酵条件为:糖汁浓度24%、温度35℃、pH5.0。在10L发酵罐实验中,C03A发酵速率相对原始菌株高,36h发酵完全,比原始菌株缩短12h;发酵产酒率达到13.2%(V/V),比原始菌株高1.6%(V/V)。     

氮离子注入选育高效发酵木糖生产L(+)-乳酸的米根霉

为了获得能够高效发酵木糖生产L( )-乳酸的菌株,采用氮离子注入诱变方法,对出发菌株米根霉RLC41-6进行改良,获得高产L( )-乳酸菌株RQ4012,发酵周期为72h,产酸能力达74.37g/L,产酸速率达1.03g/(L.h),比RLC41-6提高了1.6倍.经过多次传代实验证明该菌株具有较好的遗传稳定性.     

Mutation-Screening in Xylanase-Producing Strains by Ion Implantation

With ion implantation (N+, energy 10 keV and dosage 1.56×1015 N+cm-2), a high xylanase-producing strain Aspergillus niger N212 was selected. Based on an orthogonal experiment, an optimal fermentation condition was designed for this high-yield strain. The suitable medium was composed of 8% corncob; 1.0% wheat bran; 0.1%TWEEN20; 0.5% (NH4)2SO4; 0.5%NaNO3; 0.5%FeSO4, 7.5 × 10-4; MnSO4·H2O, 2.5 × 10-4; ZnSO4, 2.0 × 10-4; CoCl2, 3.0 × 10-4. At present, under our experiment condition, xylanase activity of Aspergillus niger N212 reached a level of 600 IU/ml, almost increased by 100% in xylanase production and the time of yielding xylanase was largely reduced to 12 h at 28℃.     

氮离子束注入诱变选育胞外多糖高产菌株

采用氮离子束注入胞外多糖产生菌进行诱变处理来获得胞外多糖高产菌株。氮离子注入过程采用的能量为10 keV,剂量为60×1014–140×1014cm-2。根据其存活率及突变率确定最佳的注入剂量。结果表明:菌株存活率曲线遵循氮离子注入生物效应的"马鞍型曲线",当注入剂量为120×1014cm-2时,获得了最佳的诱变效果。通过筛选和连续5次传代,获得具有良好稳定性的突变株,其多糖产量达到3.29 g/L,较出发菌株提高了19.20%,且发酵周期缩短了6 h。     

重离子辐照柠檬酸菌株的诱变选育

应用不同剂量重离子束12C+6对黑曲霉出发菌株4﹟进行辐照选育,选育出的高产酸菌株进行发酵试验,应用酸碱中和法测定发酵液中柠檬酸的含量。结果表明:当重离子12C+6的辐照剂量为60 Gy时,正突变率最大,为21%。诱变后的菌株通过酸斑法初筛、摇瓶复筛选育出1株菌株H4002,其发酵液中柠檬酸含量比出发菌株4﹟提高了18%。这说明利用重离子束12C+6辐照处理黑曲霉产生菌可以得到高产柠檬酸突变菌株,其诱变效果显著。