弹性蛋白酶高产菌株摇瓶发酵条件优化研究

对假单胞菌属B菌种发酵条件进行了优化,B菌株生产弹性蛋白酶的最适发酵条件为:0.5%葡萄糖、3%干酪素、1%酵母膏、0.2%K2HPO4、0.01%MgSO4·7H2O;起始pH为7;最适发酵温度为28℃;装液量为20mL;接种3%、种龄为12h的种子培养液;B菌株在24h左右产弹性蛋白酶的量达到最高,为23.3U/mL。     

额尔齐斯河野生丁(鐬)肠道产蛋白酶菌株的初步鉴定及产酶条件的研究

采用酪素培养基和脱脂乳培养基筛选额尔齐斯河野生丁(鐬)肠道内产蛋白酶菌株,共获得40株蛋白酶产生菌,其中8株蛋白水解圈较大,菌株编号为P1～P8.选取水解圈直径最大的P15为出发菌株,进行生理生化鉴定,同时摇瓶发酵探讨最佳产酶条件.结果:生理生化反应将P5初步鉴定为芽孢杆菌;蛋白酶最适产酶条件为:40℃、初始pH7.0、接种量3%、15mL/250mL的装液量、180r/min、培养时间35h,最大产酶量168.3U/L;添加微量Mg2 、Mn2 、Ca2 有稳定酶活的作用.     

产角蛋白酶菌株的筛选及发酵条件优化

采用以羽毛为唯一碳氮源的无机盐培养基,通过考察HC值(水解圈直径与菌落直径的比值)、羽毛的降解程度,筛选得到10株产角蛋白酶的菌株,经测定10株菌株摇瓶发酵液的蛋白酶活力,确定了一株产酶能力较强的菌株CJPE209,并对菌株进行鉴定,菌株CJPE209被鉴定为芽孢杆菌(Bacillus sp.),其发酵液酶活为267 U/mL。通过单因素实验,确定了菌株CJPE209产角蛋白酶的最适发酵条件:发酵周期48 h,培养基装液量25 mL/250 mL,发酵温度37℃,初始pH7,摇床转速220 r/min,发酵液酶活为337.6 U/mL,是优化前的1.26倍。     

产聚半乳糖醛酸酶菌株Asperaillus niger M-8的筛选及产酶条件研究

从腐烂的葡萄干中定向分离筛选出适合液态发酵法生产聚半乳糖醛酸酶的菌株M-8,鉴定为黑曲霉(Asperaillus niger)。经摇瓶产酶实验可知,此菌株的产酶培养基组成及发酵条件为:果胶0.7%,NaNO30.1%,MgSO40.02%,FeSO40.001%,KH2PO40.03%,豆粉1.0%,马铃薯20.0%;培养温度28℃,初始pH7.0,装液量50mL/250mL,接种量7%(v/v),培养时间48h。在此优化发酵条件下,酶活力达964U/mL。该菌株生长周期短,产酶性状稳定,在食品领域有良好的应用前景。     

产β-D-半乳糖苷酶马克斯克鲁维酵母的分离鉴定及其产酶特性

从藏灵菇中分离筛选到的一株高产β-D-半乳糖苷酶菌株ZX-5,经ITS DNA序列分析,鉴定为马克斯克鲁维酵母。对产酶培养基的最佳碳源和氮源优化结果为半乳糖2.0%,胰蛋白胨1.0%;产酶优化条件:温度30℃,培养基初始pH 6.5,装液量30%,转速100 r/min,接种量2.0%,发酵36 h。粗酶液酶活力为2.60 U/mL;经硫酸铵分级沉淀和DEAE离子交换层析,获得纯化酶的比活力为157.35 U/mg。酶最适反应温度35℃,最适pH 6.0,在20~40℃和pH 5.0~7.0的范围内酶的稳定性较好;Mn2+对酶的活性有促进作用。利用菌株ZX-5β-D-半乳糖苷酶分解乳糖并合成低聚半乳糖(galacto-oligosaccharide,GOS),在35℃、乳糖质量浓度60 g/100 mL、酶浓度1.0 U/mL条件下,乳糖水解率达68.34%(50 h),GOS产率达34.70%(40 h),具有潜在的应用前景。     

鲍鱼肠道海带降解菌株的筛选、鉴定及粗酶学性质研究

从皱纹盘鲍肠道中筛选出能够高效降解海带的菌株,并进行菌种鉴定及粗酶学性质研究。首先以褐藻酸钠为唯一碳源,筛选出褐藻胶裂解酶酶活较高的YY7菌株,通过16S rRNA初步鉴定YY7为弧菌属菌株;通过各种选择性培养基鉴定,YY7菌株不具有溶血性,产蛋白酶和淀粉酶,菌株生长速度快,其褐藻胶裂解酶活力在20 h达到最高54. 31 U/mL,最适温度为35℃,最适pH 7. 5,Na~+、Mg~(2+)、K~+等金属离子对褐藻胶裂解酶活力具有促进作用,Fe~(2+)和Cu~(2+)起抑制作用。利用YY7菌株发酵液降解海带粉,降解得率可达65%以上,降解效果佳。     

物理诱变法选育高产弹性蛋白酶的枯草芽胞杆菌

目的筛选弹性蛋白酶高产菌株,通过物理诱变,进一步提高弹性蛋白酶的产量。方法从土壤中收集样品,经反复初筛﹑复筛后,选择1株产弹性蛋白酶活性较高且稳定的细菌。通过对菌株的形态、生长特征及生理生化性质的研究,对菌株进行初步鉴定,然后进行紫外线诱变。结果该菌株属枯草芽孢杆菌(B1)。经诱变后得到1株诱变菌株,其HC值比原始菌株高1.33倍;酶活性达到120U/mL,比原始菌株提高了1.61倍。结论物理诱变可以有效提高弹性蛋白酶的酶活。     

聚半乳糖醛酸酶高产菌的筛选及产酶条件研究

从腐烂的苹果中定向分离筛选出适合液态发酵法生产聚半乳糖醛酸酶的菌株YL-9,鉴定为扩展青霉(Penicillium expansumLink).经摇瓶产酶试验可知,此菌株的产酶培养基组成为:果胶0.7%,NaNO3 0.1%,MgSO4 0.02%,FeSO4 0.001%,KH2PO4 0.03%,豆粉1.0%,马铃薯20.0%;发酵条件为培养温度28℃,初始pH7.0,装液量50mL/250mL,接种量7%(v/v),培养时间48h.该条件下,酶活力达8.52U/mL.     

枯草芽孢杆蔚BS-05产纤维素酶条件的研究

以实验室筛选的枯草芽孢杆菌产纤维素酶菌株BS-05为出发菌株,对其产纤维素酶条件进行了研究。实验结果表明,菌株BS-05产纤维素酶的最佳条件是:以2%的CMC-Na为碳源,2%的蛋白胨和2%的酵母粉为氮源,产酶培养基初始pH为7,装液量为60mL/250mL,接种量5%,在37℃,150r/min下培养48h。在此条件下,该菌株产酶能力最强,羧甲基纤维素酶活力CMCA达195.46U/mL,滤纸酶活力FPA达174.52U/mL。     

产低温几丁质酶菌株的筛选、鉴定与产酶条件优化

目的:筛选产低温几丁质酶菌株,并对其进行鉴定及发酵条件优化。方法:本实验以渤海海域海泥为样品,以胶体几丁质为唯一碳源,通过平板筛选法筛选产低温几丁质酶细菌,对其进行形态学鉴定和分子生物学鉴定,并对其发酵产酶条件进行了单因素优化。结果:菌株鉴定结果为发光杆菌(Photobacterium sp.),单因素优化结果为:胶体几丁质12.0 g/L、酵母膏6.0 g/L、发酵温度15 ℃、初始pH7.0、转速为220 r/min、装液量75 mL/250 mL、接种量1%、发酵时间96 h,酶活力达4.566 U/mL,比优化前提高389.91%。结论:为下一步酶学性质研究及低温几丁质酶在工业中的应用提供参考。     

乳酸菌β-葡萄糖苷酶水解大豆异黄酮的研究

利用乳酸菌液态发酵得到一种高活性的大豆异黄酮水解酶--乳酸菌β-葡萄糖苷酶,通过单因素试验及正交试验优化了乳酸菌β-葡萄糖苷酶水解大豆异黄酮的条件.正交试验结果显示,当加酶量为25 μg/mL,水解温度50℃,水解时间2.0 h,pH 6.0时,黄豆苷水解率可达96.51%;在加酶量为25 μg/mL,水解温度40℃,水解时间2.0 h,pH 5.5时,染料木苷水解率为92.36%.     

产纤维素酶细菌菌株的分离鉴定及产酶条件优化

该实验分离鉴定了高产纤维素酶细菌菌株并探究其产酶条件。 采用3种培养基进行分离筛选。 经菌落形态观察、16S rRNA基 因序列分析菌株在系统分类地位。通过单因素试验确定最适产酶条件。结果表明,从西岭山原始森林保护区土壤中筛选到1株高产纤 维素酶细菌菌株,鉴定为伯克霍尔德氏菌（Burkholderia cepacia）。 其最适产酶条件：碳源为麦麸,最佳氮源为酵母粉,接种量为2% （V/V）,初始pH值为7,产酶时间为48 h。在此条件下,酶活最高可达2.76 U/mL。酶学特性研究显示,在pH5.0、温度60 ℃条件下CMCase 酶活力最高。     

高产碱性蛋白酶枯草芽孢杆菌菌株选育及其水解条件的研究

通过对三种枯草芽孢杆菌的比较分析,以其中酶活力最高的一株作为出发菌株,用15W紫外灯于30cm处照射120s,获得菌株UV-12-3,酶活力为4238.6u/mL。通过正交实验,确定其最适水解条件为:pH6.5、温度32℃、水解42h、接种量为8%。在此条件下水解度可达到46.7%。     

产低温弹性蛋白酶菌株的筛选及酶学特性分析

筛选获得一株产生低温型弹性蛋白酶菌株并研究酶学性质,为该酶在肉类嫩化中应用奠定理论基础。在不溶性的弹性蛋白琼脂平板上,以弹性蛋白作为惟一氮源,根据水解圈直径和菌落直径的比值筛选到一株分泌低温型弹性蛋白酶的菌株,命名为XZE116,通过形态学、生理生化试验以及16s rDNA序列分析,该菌株鉴定为短芽孢杆菌(Bacillus brevis)。菌株所产弹性蛋白酶最适作用pH值8.0,在较广的pH值范围(7.0～12.0)内酶稳定性较好。酶最适作用温度25℃,在40℃以下保温2 h,酶稳定性好。浓度为5 mmol/L的Mg2+离子对酶有激活作用,但Hg2+、Pb2+强烈抑制酶活性。丝氨酸蛋白酶特异性抑制剂苯甲基磺酰氟(PMSF)强烈抑制酶活性,但E-64对酶活性没有影响,表明菌株XZE116弹性蛋白酶是丝氨酸蛋白酶。0.1%的阴离子表面活性剂SDS、阳离子表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)以及非离子型表面活性剂Triton X-100对酶活性有轻微的抑制作用。这些酶的优良生化特性赋予了该酶在肉品工业中具有潜在的应用价值。     

高产纤维素酶生二素链霉菌的鉴定与选育研究

从朽木中分离到1株产纤维酶活力高的NC-7菌株,经形态观察和生理生化测定,初步鉴定为放线菌,链霉菌属,生二素链霉菌(Streptomyces ambofaciens)。采用硫酸二乙酯60min与紫外70s、硫酸二乙酯60min与紫外80s的复合诱变方法对NC-7孢子进行诱变,得到产纤维酶活力高的2株菌,即X402菌株、P303菌株,其FPA酶活力分别为2.85IU/mL、2.52IU/mL,比NC-7出发菌株分别提高38.95%、22.44%;CMC酶活力分别为4.83IU/mL、5.29IU/mL,比NC-7出发菌株提高13.21%、23.92%。     

鸡血血红蛋白酶法提取血红素工艺优化

为了实现禽血高值转化利用,以鸡血血红蛋白为底物,采用蛋白酶酶解技术提取血红素。比较酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶水解度确定合适的水解蛋白酶;研究并分析底物浓度、酶添加量、酶解时间对血红蛋白水解度、血红素得率、血红素纯度的影响;设计正交试验确定最优血红素提取工艺;采用最优酶解工艺参数酶解,经离心、冷冻干燥得到血红素产品,应用液相色谱-串联质谱（lipid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）鉴定产品中血红素含量。结果表明,采用中性蛋白酶酶解,底物浓度4.0 g/100 mL、酶添加量2.0 g/100 mL、酶解时间4 h时,血红素得率、血红素纯度分别为52.23%、49.26%。血红素产品与血红素标准品保留时间相一致,血红素产品中血红素含量为50.24%。     

酶法制备乳铁蛋白抗菌肽的工艺

乳铁蛋白具有抗菌活性,胃蛋白酶酶解乳铁蛋白时得到的乳铁蛋白多肽的抗菌活性远高于其自身。通过响应面回归分析,得到了胃蛋白酶酶解乳铁蛋白的优化条件为:底物浓度30 mg/mL、水解时间2 h、温度45℃、加酶量1%(w/w)、pH 2.5。在优化酶解条件下,水解度约为11%,抑菌率为98.8%。高效液相排阻色谱分析表明,多肽的分子质量主要分布在200～6 000 u。     

产原果胶酶菌株的筛选及其产酶条件优化

从土壤中筛选得到1株高产原果胶酶的菌株WJ-2,经初步鉴定为曲霉属(Aspergillus sp)。研究了菌种在不同初始pH值、温度、培养时间、接种量下的产酶情况并进行了产酶条件优化。通过单因素实验和正交实验确定了该菌株液体产酶的最佳条件:初始pH5.0、温度35℃、培养时间48h、接种量为10%,优化条件下的原果胶酶活力可达4545.235U/mL。     

产脂肪酶菌株的筛选鉴定及产酶条件优化

以橄榄油为唯一碳源,采用油脂同化平板从食堂废弃物中筛选出一株产脂肪酶菌株HFE722。通过测定与分析该菌株16S rRNA基因序列,鉴定该菌株为芽孢杆菌（Bacillus sp.）。菌株HFE722在初始条件（发酵温度30 ℃,接种量为1%,自然pH,装液量为100 mL/250 mL,摇床转速为200 r/min）下培养36 h,测得发酵液上清液脂肪酶酶活为2.17 U/mL。优化后所得菌株HFE722产酶的最适发酵条件为：发酵温度30 ℃,发酵周期为36 h,接种量为1%（V/V）,初始pH 7.0,装液量为50 mL/250 mL,摇床转速为160 r/min。在最佳发酵条件下,发酵液上清液酶活可达到5.8 U/mL,酶活较优化前提高了167.28%。     

一株纤维素酶真菌的筛选鉴定及产酶条件优化

以羧甲基纤维素钠为唯一碳源,从自然界筛选出一株纤维素酶高产菌HJC-79,通过单因素试验和正交试验对其培养基成分和发酵条件进行优化。结果表明,经形态观察和ITS序列分析,菌株HJC-79被鉴定为杂色曲霉（Aspergillus versicolor）。最佳培养基成分为蔗渣、麸皮和Mandels营养盐液的添加量分别为2%、9%、89%;最佳发酵条件为发酵温度33 ℃,初始pH值为4,接种量9.0%,发酵时间48 h。在此优化条件下,葡聚糖内切酶、β-葡萄糖苷酶和滤纸酶酶活分别为2.22 U/mL、1.93 U/mL、1.53 U/mL,分别比优化前提高了125.55%、76.37%和172.47%。