凝结芽孢杆菌TQ33产抗疫霉物质特性研究

凝结芽孢杆菌TQ33是从脱脂奶粉中分离出来的,发现其发酵液中活性代谢产物对甜瓜疫霉菌（Phytophthora drechsleri Tucker）、灰葡萄孢霉菌（Botrytis cinerea）、番茄早疫病菌（Alternaria solani）、甜瓜枯萎病菌（Fusarium ox-ysporum）、苹果炭疽病菌（Glomerella cingulate）植物致病真菌有很好的抑制作用,其中对甜瓜疫霉菌具有较强的抑制作用,同时对抗甜瓜疫霉物质特性进行了研究,将具有抑菌活性的发酵液分别经过调节pH、加热、蛋白酶处理后发现,凝结芽孢杆菌TQ33发酵液具有一定的热稳定性;在pH,5～6时具有最大抑菌活性,发酵液经胰蛋白酶、中性蛋白、蛋白酶K处理后失去部分抑菌活性,初步分离纯化实验表明其中一种抗菌物质可能是苯乳酸,这表明凝结芽孢杆菌TQ33发酵液中可能含有苯乳酸,以及其他蛋白类抑菌物质.     

干酪乳杆菌IMAU10041抗甜瓜枯萎病菌的作用及理化性质

从60株乳酸菌中筛选出22株具有抗甜瓜枯萎病菌活性的乳酸菌菌株,其中9株具有较强抗甜瓜枯萎病菌活性.对这9株乳酸菌的抗植物致病真菌谱进行研究发现,9株菌对番茄早疫病菌（Alternaria solani）、甜瓜疫霉菌（Phytophthora drechsleri Tucker）、苹果炭疽病菌（Glomerella cingulate）、灰葡萄孢霉菌（Botrytis cinerea）的生长均有抑制作用.其中干酪乳杆菌IMAU10041对甜瓜枯萎病菌具有较强的抑制作用,并且对甜瓜疫霉和番茄早疫病菌有较高的抑菌活性.分别经过调节pH、加热、蛋白酶处理干酪乳杆菌IMAU10041的发酵滤液后,发现干酪乳杆菌IMAU10041发酵液具有一定的热稳定性;在pH 4.0时具有最大抑菌活性,在碱性条件下抑菌活性迅速失活;发酵液经胰蛋白酶、中性蛋白、蛋白酶K处理后失去部分抑菌活性,这表明干酪乳杆菌IMAU10041发酵液中可能含有一定的蛋白类抑菌物质.     

来源于酸马奶的植物乳杆菌Bx6-2抑制甜瓜疫霉菌的研究

采用生长速率法测定植物乳杆菌Bx6．2的发酵液对甜瓜疫霉菌菌丝生长的影响,并对抑菌活性物质的理化性质进行了研究．结果表明,该菌的发酵液对甜瓜疫霉菌菌丝的生长有抑制作用．发酵液中的活性物质有较好的热稳定性,在pH6．0时抑菌效果较好,对酸性蛋白酶敏感,对中性蛋白酶不敏感,常温下10d的稳定性较好．通过调节pH、酶处理和加热处理实验,说明其抑菌活性物质不是乳酸,蛋白质类物质起了一定的抑菌作用,但其抑菌现象可能是与其他物质共同作用的结果．     

3株生防芽孢杆菌的筛选及对棉花枯萎病的防治研究

从植物根际土壤中筛选到3株对大豆根腐病、棉花枯萎病、小麦赤霉病等多种作物真菌病害有较强拮抗性的芽孢杆菌菌株Bacillus sp．920,Bacillus sp．930和Bacillus sp．932。用琼脂块法分别测定了它们对11种植物病原真菌的抗菌谱、发酵液的抑菌活性大小及其热稳定性,并对发酵液中的抑菌活性物质进行了初步提取。结果表明,920和932菌株为广谱性抗真菌菌株;930菌株仅表现出对稻瘟病菌具有较强的桔抗性。Bacillus sp．920发酵液中的抑菌活性物质可被酸沉淀,并具有较好的热稳定性。棉花盆栽试验结果表明,接种芽孢杆菌920菌剂可使棉花枯萎病引起的棉苗死亡率由15％降至3．7％,发芽率比对照提高了10％。     

木霉菌株对草莓炭疽病菌抑菌效应评价

采用木霉菌株HZ0501,通过生物发酵法制备发酵液,以草莓炭疽病菌为靶标菌进行发酵液抑菌活性评价.结果表明,发酵液对草莓炭疽病菌具有明显的抑菌活性.超声波处理发酵液12 min,显著提高发酵液抑菌活性,说明木霉菌胞内外均存在抑菌活性成分.发酵液中抗菌活性物质对高温、酸碱处理具有良好稳定性,60℃高温和中等酸度pH 5处理显著提高发酵液对炭疽病菌的抑菌活性.与未稀释的发酵液相比,发酵液稀释100倍后明显提高对炭疽病菌的抑菌活性.此外,发酵液中具有较高的纤维素酶和B-葡聚糖酶活性.     

解淀粉芽孢杆菌BI_2的鉴定及其对黄曲霉的抑制作用

菌株BI2是从青贮玉米秸秆饲料中分离得到的一株革兰氏阳性芽孢杆菌.经16S rDNA序列分析,发现该菌株与解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens（NC_009725）的相似性达到99.6%;进一步结合Biolog及生理生化分析,将该菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌.以番茄叶霉病菌、黄瓜枯萎病菌等12种植物病原菌及部分霉菌、酵母、食品乳酸菌和人类致病细菌为指示菌进行抑菌实验.结果表明：BI2主要抑制丝状真菌,而对细菌无拮抗作用;BI2菌株生长36 h的上清液能明显抑制黄曲霉孢子萌发及其菌丝生长,抑制率分别达到67.4%和74.8%;而且该上清液经120℃高温处理20 min后对黄曲霉的抑制效果基本没有影响.     

烟草赤星病菌的拮抗放线茵筛选

为有效防治烟草赤星病,从烟草赤星病菌感染区和秦岭山区的土壤样品中,采用平板对峙、抑菌率测定及发酵液扩散法,筛选对烟草赤星病菌有拮抗作用菌株．结果表明：有31株初筛放线菌与烟草赤星病菌平板对峙培养后抑制作用较稳定,抑菌率检测有19株菌株抑菌率达到了20％以上,12株菌株抑菌率大于309／6;进一步通过发酵液扩散试验,有9株放线茵能够产生拮抗烟草赤星病菌的活性物质,其中Y26—2和Y82—2抑菌效果最好,且所产抑菌物质较稳定．而且,这2株放线茵对辣椒疫霉菌、黄瓜枯萎菌、苹果轮纹菌三种植物病原真菌也有拮抗作用．     

3株生防芽孢杆菌的筛选及对棉花枯萎病的防治研究

从植物根际土壤中筛选到 3 株对大豆根腐病、棉花枯萎病、小麦赤霉病等多种作物真菌病害有较强拮抗性的芽孢杆菌菌株 Bacillus sp.920,Bacillus sp.930 和 Bacillus sp.932.用琼脂块法分别测定了它们对 11 种植物病原真菌的抗菌谱、发酵液的抑菌活性大小及其热稳定性,并对发酵液中的抑菌活性物质进行了初步提取.结果表明,920 和 932 菌株为广谱性抗真菌菌株;930菌株仅表现出对稻瘟病菌具有较强的拮抗性.Bacillus sp.920 发酵液中的抑菌活性物质可被酸沉淀,并具有较好的热稳定性.棉花盆栽试验结果表明,接种芽孢杆茵 920 菌剂 可使棉花枯萎病引起的棉苗死亡率由 15% 降至 3.7%,发芽率比对照提高了10%.     

解淀粉芽孢杆菌BW-13产生的抗真菌物质特性研究与初步分离纯化

解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amylolique aciens)BW-13发酵滤液对酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和植物病原真菌灰霉(Botrytis cinerea)均具有显著的抑制活性,并具有热稳定性好、对紫外线照射和蛋白酶处理不敏感、在pH 3～9范围内稳定,尤其在酸性条件下基本不丧失活性的特点.通过发酵液预处理,活性炭吸附,D293强碱性季铵型阴离子交换树脂柱层析,对解淀粉芽孢杆菌BW-13产生的抗真菌物质进行了初步分离纯化.高效液相色谱(HPLC)分析显示分离得到的抗真菌物质在220 nm处有单一的活性峰.     

抗黄瓜灰霉病的枯草芽孢杆菌筛选及其抑菌活性的初步研究

结合涂布平板法和温室盆栽植株法,测定了41株枯草芽孢杆菌发酵液对灰霉病病原菌及黄瓜灰霉病的抑制效果,以此筛选出针对灰霉病的生防菌株．结果表明,抑菌效果最好的枯草芽孢杆菌为BS01和BS03．采用涂布平板法研究了菌株BS01和BS03抑菌活性,结果表明,抑菌效果均为50％时,BS03比BS01的菌体浓度低,得到抑菌效果最好的菌株BS03．采用温室盆栽植株法测试了菌株BS03的抑菌活性,结果表明,菌悬液比发酵滤液的抑菌效果好,并且在菌悬液处理黄瓜苗后的第3天抑菌活性最高．     

新型抗真菌代谢产物发酵条件的响应面优化

从浙江东海土壤中筛选获得1株菌株(ZS09-33)能产生抑制白色念珠菌的代谢产物,经16S rRNA序列测定和Genbank数据库搜索,确定其属于Bacillus amyloliquefaciens. Plackett Burman实验发现,影响抗真菌效价的主要因素为：黄豆饼粉、可溶性淀粉以及(NH4)2SO4.最陡爬坡实验和Box-Behnken实验得到响应面（RSM）优化的最佳培养基质量浓度为：黄豆饼粉2.72 g/L,可溶性淀粉 26.67 g/L,(NH4)2SO4 3.95 g/L,K2HPO4 1.8 g/L,NaCl 2 g/L,MgSO4 0.5 g/L,CaCO3 0.72 g/L,CuSO4 0.02 g/L,FeSO4 0.02 g/L,MnSO4 0.02 g/L,初始pH 6.5.在此条件下发酵液抗真菌效价达16 806.48 U/mL,与模型值相符.与单因素优化结果相比,效价提高了239%.产物经ESI/MS、¹H-NMR及¹³C-NMR确定为相对分子质量为402的大环内脂类物质.     

链霉菌TD-1菌株抑菌活性物质发酵条件的优化

利用正交设计法及均匀设计法对链霉菌TD-1菌株发酵条件进行了优化,研究不同发酵因子对链霉菌TD-1产抑菌活性物质的影响.结果表明,发酵培养基中影响抑菌活性大小的主要因素为葡萄糖、黄豆粉、硫酸亚铁、磷酸氢二钾及硝酸钾;抑菌活性物质较佳发酵条件为90 mL/250mL三角瓶,接种量的体积分数为0.06,发酵周期8 d,初始pH值为7.15.在此条件下,最终抑菌效率与原发酵液相比发酵液对串珠镰刀菌抑菌活性提高了53.38%.     

绿僵茵发酵液灭杀粘虫活性的研究

为了获得有效杀粘虫的生物农药,通过对发酵液杀虫效果的初步测试,从实验室保藏的4株绿僵菌中,筛选出1株效果明显的绿僵菌Ma977．将菌株Ma977的发酵液除去茵体,用其滤液的1、2、4、8倍的稀释液进行室内毒力测试．结果表明：该滤液的原液对粘虫的致死率为100％;随着滤液稀释倍数的增加,致死率逐步降低．对该滤液的有效成分进行液相色谱分析,结果表明,发酵液中含有毒素DtxA、DtxB、DtxB2和DtrxE．     

黑曲霉液体发酵生产β-葡聚糖酶的工艺条件研究

探讨了黑曲霉-(Aspergillus niger)液体发酵的最适工艺条件，在250mL三角瓶中装液量50mL，摇瓶转数为200r／min，发酵培养基起始pH为5．0，发酵温度为32℃，发酵周期为50h，酶活达到86U／mL。     

米多霉素衍生物的生物合成及结构鉴定

通过在龟裂链轮丝菌（Streptoverticillium rimofaciens ZJU 5119）的发酵过程中添加5-氟胞嘧啶，得到了一种新的核苷类化合物A.通过电喷雾质谱及核磁共振氢谱分析主要信号的归属，推测化合物A是米多霉素的衍生物，区别在于嘧啶环上第5位的取代基是F，而米多霉素则是羟甲基.发酵液中化合物A的产量达到了0.8 g/L.化合物A的最低抑菌质量浓度为0.157 g/L，只有米多霉素的一半.     

滴定法测定棒酸发酵液中甘油含量

为了消除发酵液中还原糖的影响,建立了高碘酸钠滴定法测定棒酸发酵液中甘油含量的方法,该方法的回收率为98.5%,RSD值为1.69%。本法操作简便,成本低廉,适用于发酵液中甘油含量的测定。     

蕈状芽孢杆菌SH-1抗菌活性物质发酵条件优化

从土壤中筛选到一株芽孢杆菌SH-1,该菌株能够产生抑制多种细菌的活性物质,初步确定该菌株为蕈状芽孢杆菌．通过单因素实验及正交实验对蕈状芽孢杆菌SH-1菌株所产生抗菌物质的发酵条件进行优化,采用牛津杯法测定该菌株所产抗菌物质的抑菌活性,最终确定蕈状芽孢杆菌SH-1菌株产生抗菌物质的最适发酵条件为：温度36℃,pH8,转速180r／min,接菌量体积分数4％,发酵时间24h．     

南极假丝酵母诱变育种及产脂肪酶条件优化

通过紫外诱变、硫酸二乙酯诱变及复合诱变,对南极假丝酵母菌种进行了选育,筛选出一株高产菌株UDAan-1,其酶活达到42.7 U.mL-1,为原始菌株的1.8倍。在摇瓶条件下对发酵培养温度、初始pH值等南极假丝酵母诱变菌株产酶工艺参数进行了优化。最终确定了各发酵工艺参数:培养温度26℃,初始pH值6.5,发酵用菌种培养20h,接种量6%(体积分数),摇床转速200 r.min-1,250 mL摇瓶装液量50 mL,表面活性剂选用0.1%吐温-80(体积分数)。