免疫磁分离法高效富集牛奶中大肠杆菌O157:H7

目的建立一种免疫磁分离(immunomagnetic separation,IMS)方法高效富集大肠杆菌O157:H7。方法合成一种核壳型的纳米磁珠(magnetic nanobeads, MNBs),并基于制备的MNBs构建了IMS。通过优化制备免疫MNBs时抗体浓度, IMS过程免疫MNBs的用量和孵育时间,构建了高效的IMS方法。结果构建的IMS方法能够在35 min内完成牛奶中大肠杆菌O157:H7的高效富集,当大肠杆菌O157:H7浓度低于10~5 CFU/m L时,捕获效率高于93.4%,当菌浓度达到10~7CFU/mL,捕获效率仍大于50%。结论该方法简单高效,可被广泛应用于其他食源性致病菌检测的样品前处理。     

流式分析技术快速定量检测牛乳中大肠杆菌O157:H7

建立一种基于流式分析技术的快速定量检测牛乳中大肠杆菌O157:H7的方法。用偶联有异硫氰酸荧光素的大肠杆菌O157单克隆抗体对大肠杆菌O157:H7进行特异性标记,通过优化抗体反应条件,建立流式检测方法,然后对磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffer saline,PBS）和人工污染牛乳样品中不同浓度的大肠杆菌O157:H7进行定量检测。本研究建立的流式检测方法的在PBS中的检测范围为2.57×103～1.12×108?CFU/mL,灵敏度达到2.57×103?CFU/mL。将所建立的流式检测方法应用于牛乳样品检测,当人工污染牛乳样品中大肠杆菌O157:H7的浓度在2.31×104～1.48×108?CFU/mL之间时,流式检测方法与平板计数方法检测结果基本一致,方法的灵敏度为2.31×104?CFU/mL,检测时间为35?min。该方法能快速、定量地检测出牛乳样品中的大肠杆菌O157:H7,在食源性致病菌的快速筛查和监控中具有重要的应用价值。     

Escherichia coli O157: H7 Growth in Laboratory Media as Affected by Phenolic Antioxidants

Five strains of Escherichia coli O157:H7 with ATCC 11775 E. coli were grown in brain heart infusion (BHI) broth (pH 5.8, adjusted with citric acid) and treated with butylated hydroxyanisole (BHA), butylated hy-droxytoluene (BHT), tertiary butylhydroquinone (TBHQ), and propyl gallate (PG) individually or combined. Additives ranged from 100–400 ppm with inocula levels between 5 and 104 CFU/mL in tissue culture plates or in flasks; samples were incubated at 4°C or 37°C for 24 hr. Additive antimicrobial efficacy varied with inoculum level and incubation temperature. BHA at <200 ppm was bactericidal on all strains. Poly-hydroxyl additives (TBHQ, PG) were less effective at 4°C. BHA-BHT combinations were synergistic at 4°C.     

生物传感器检测食源性大肠杆菌O157:H7研究新进展

近年来, 生物传感器因具有快速、简便、灵敏度高、低成本等优势被广泛应用到临床检测、环境监测等领域。该技术在食品安全领域也逐步得到重视, 尤其在病原微生物的快速检测方面。本文从免疫识别和核酸识别两方面简要介绍生物传感器技术检测食源性大肠杆菌O157:H7研究的最新进展, 对生物传感器技术存在的问题及未来的研究方向进行了总结及展望。     

贮藏于4℃的家制酸奶中低浓度大肠杆菌O157:H7的存活研究

牛奶预热后分装并分别接种体积分数3%的酸奶和2.15(lg(CFU/mL))的大肠杆菌O157:H7,在45℃下发酵5h后贮藏于4℃的冰箱中。利用Pathatrix大体积循环系统中偶联了抗体的免疫磁珠特异性地捕获这些酸奶中的大肠杆菌O157:H7。免疫磁珠重悬于1%的蛋白胨水后涂布于添加了新生霉素(5mg/L)的山梨醇麦康凯固体培养基中,培养基在37℃恒温培养箱中放置24h。实验结果表明,酸奶中大肠杆菌O157:H7的数量逐渐减少,12d后才检测不到。因此乳制品加工及保存过程中,需要加强对大肠杆菌O157:H7污染的监测,以保证乳制品的安全性。     

大肠杆菌O157:H7量子点免疫层析试纸条的研制

研制一种大肠杆菌O157:H7量子点免疫层析试纸。利用自制水溶性量子点静电偶联大肠杆菌O157:H7单克隆抗体,将大肠杆菌O157:H7单克隆抗体和羊抗兔二抗划线于硝酸纤维素膜分别作为检测线和质控线,制备双抗体夹心法检测大肠杆菌O157:H7的量子点免疫层析试纸。该试纸条能在5min内完成检测,检测限制为1×104 CFU/mL,对常见的8种食源菌无交叉反应。基于量子点的大肠杆菌O157:H7免疫层析试纸操作简便,灵敏度和特异性较好,可用于食品快速检测。     

大肠杆菌O157:H7胶体金试纸条的研制

采用胶体金标记抗大肠杆菌O157:H7 单克隆抗体(鼠源),通过将大肠杆菌O157:H7 多克隆抗体和驴抗鼠抗体(二抗)喷涂于硝酸纤维素膜分别作为检测线和质控线,研制大肠杆菌O157:H7 胶体金快速检测试纸条。通过优化实验,确定最佳条件为标记量16.8μg/mL、标记pH8.0、封闭剂PEG20000、检测时样品最佳pH7.0～7.5。对26 株常见细菌交叉反应结果表明,该试纸条除与鼠伤寒沙门氏菌ATCC 13311 和金黄色葡萄球菌CMCC 26003 有轻微交叉反应外,与其他24 株菌均无交叉反应。该试纸条灵敏度为104CFU/mL。用该试纸条检测大肠杆菌O157:H7操作简便、快捷、灵敏度高、特异性强。     

Survival of Escherichia coli O157:H7 in dry sausage fermented by probiotic lactic acid bacteria

Probiotic Lactobacillus rhamnosus GG, L rhamnosus E‐97800, L rhamnosus LC‐705 and commercial Pediococcus pentosaceus were studied for their ability to inhibit the growth of Escherichia coli O157:H7 in dry sausage. The strains were able to produce technologically high‐quality dry sausage. The number of E coli O157:H7 decreased from approximately 5 to approximately 2 log cfu g⁻¹ It was concluded that the above‐mentioned strains and the commercial culture were equally effective in inhibiting E coli O157:H7. © 2000 Society of Chemical Industry     

食源性致病菌大肠杆菌O157:H7检测方法的研究进展

食源性致病菌是引起食物中毒的重要病原微生物,严重威胁人类健康,对食源性致病菌进行快速、准确的鉴定检测,是预防和控制致病菌的有效方法,而大肠杆菌O157:H7因其感染剂量低,致病性强,引起公众的广泛关注.本文综述了目前用于检测食源性致病菌大肠杆菌O157:H7的主要方法,包括细菌分离法,免疫学检测方法,分子生物学检测方法...     

肠出血性大肠杆菌O157:H7的分子生物学检测及PCR检测

大肠杆菌一些特殊的血清型具有致病性,肠出血性大肠杆菌是大肠杆菌的一个亚型,主要致病菌株为O157:H7,可引起感染性腹泻,因能引起人类的出血性肠炎而得名。本文综述了分子生物学检测肠出血性大肠杆菌O157:H7的研究进展。分子生物学检测是利用抗原抗体特异性结合反应检测各种物质的分析方法,主要包括酶联免疫吸附法(ELISA)、胶体免疫金层析法以及免疫磁珠分离法(IMS)。PCR技术检测肠出血性大肠杆菌O157:H7,主要包括常规PCR检测、多重PCR检测以及实时荧光定量PCR检测。这两种方法灵敏度高、特异性强、操作简便、结果准确等优点,是检测肠出血性大肠杆菌O157:H7的常用方法。     

特异性抗肠出血性大肠杆菌O157:H7内毒素鸡卵黄抗体的制备

目的:比较研究LPS和O-SP的免疫原性,制备出特异性抗内毒素(LPS)鸡卵黄免疫球蛋白(eggyolkimmunoglobulin,IgY),用于对E.coliO157:H7的免疫预防及检测。方法:分别用灭活E.coliO157:H7菌体、不同浓度内毒素(LPS)及O-特异性多糖链(O-SP)与不完全弗氏佐剂充分乳化后作抗原免疫临产蛋母鸡,以水稀释法从卵黄中提取抗体,阴离子交换色谱法实现对抗体的纯化,间接ELISA及双向免疫扩散检测抗体产生效价与活性。结果与结论:所制内毒素(LPS)和O-SP均有较好的免疫原性,刺激鸡体后可产生高效价抗体,灭活菌体、600μg/mlLPS、1200μg/mlLPS、2000μg/mlLPS、O-SP抗体产生效价最高可分别达1:32000、1:28000、1:32000、1:12000、1:40000。结合离子交换色谱,用0.185mol/L的离子强度可实现一步洗脱纯化抗体,制备出高纯度、高活性、特异性强的鸡卵黄免疫球蛋白IgY,为大肠杆菌O157:H7的感染防治提供了可靠的保证,在此实验基础之上可进一步探讨应用特异性IgY对大肠杆菌O157:H7的检测。     

Acid resistance and verocytotoxin productivity of enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7 exposed to microwave

Abstract: We examined the acid resistance and verocytotoxin (VT) productivity of enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7 irradiated by microwave with a domestic microwave oven and a commercial microwave radiator equipped with a thermo‐regulator. When the cell suspension (5 mL) chilled at 0 °C was treated with a domestic microwave oven at weak power (2.45 GHz, 100 W) for 60 s, the living cell number was reduced by 2 orders (final temperature, about 65 °C). The surviving cells showed lower acid resistance and VT productivity than nonirradiated cells. To examine the nonthermal effect of microwave on acid resistance and VT productivity, the cells in Luria‐Bertani medium were intermittently irradiated to keep the culture temperature at 37 °C with the microwave radiator (2.45 GHz, 0.6 W/mL). The intermittent radiation slightly reduced the acid resistance, but clearly suppressed the VT productivity. Microwave oven is probably useful for reducing not only the living cell number but also the acid resistance and VT productivity of EHEC O157:H7.     

利用光纤倏逝波生物传感器检测食品中 大肠杆菌O157:H7

目的 建立一种应用光纤倏逝波生物传感器快速检测食品中大肠杆菌O157:H7的方法。方法 对光纤用大肠杆菌O157:H7抗体包被制备检测探针,用纳米量子点对抗体进行偶联制备检测抗体,并确定其检测的灵敏度和特异性,同时通过对人工污染样品的检测确认该方法检测实际样本的可行性。结果 建立的光纤倏逝波生物传感器检测大肠杆菌O157:H7的灵敏度达到50 CFU/mL,并具有较强的特异性。结论 利用光纤倏逝波生物传感器检测食品中污染的大肠杆菌O157:H7方法快速、准确,具有较强应用价值。     

大肠杆菌O157:H7快速培养的初步研究

本研究将Oxyrase酶加入到接种了大肠杆菌O157:H7的培养基中以促进这种兼性厌氧微生物的生长。与不加Oxyrase酶的对照组相比,添加了Oxyrase酶的培养基中的大肠杆菌O157:H7的浓度明显提高。实验结果表明,Oxyrase酶在大肠杆菌O157:H7 快速培养中具有潜在的利用价值。     

乳酸菌对肠出血性大肠杆菌O157:H7抑制作用的研究

为探讨乳酸菌对肠出血性大肠杆菌O157：H7 ATCC43895(E．Coli O157：H7)的抑制作用,在培养基上进行了研究。将E．Coli O157：H7与干酪乳杆菌干酪亚种、植物乳杆菌、发酵乳杆菌、乳酸乳球菌和瑞士乳杆菌同时接种在培养基中,E．Coli O157：H7的活性不受影响;将E．Coli O157：H7接种到培养了24h的乳酸茵培养液中,E．Coli O157：H7活性显下降。以乳酸调整的低pH值对E．Coli O157：H7有一定的杀灭作用。本研究表明：乳酸菌的代谢产物乳酸对E．Coli O157：H7有杀灭作用。