Survival of Escherichia Coli O157:H7 During Storage of Yogurt at Different Temperatures

ABSTRACT: The behavior of E. coli O157:H7 strains during the storage of plain live yogurt at 4, 8, 17, and 22 °C was investigated. Lactic acid bacteria and pH were also studied. Linear regression analysis was carried out to obtain the specific death rate, the death rate and time of death. During the 1st 24 h, the pathogenic strains decreased slightly at 4 and 8 °C. This decrease was greater at 17 °C, and even greater at 22 °C. E. coli O157:H7 was not detected after 312, 168, 28, and 16 h at 4, 8, 17, and 22 °C, respectively. Counts of Lactobacillus and Streptococcus were about 9 log CFU/g during the study. An increase was detected in the values for time of death from refrigeration to room temperatures. A decrease in the values of both the specific death rate and the death rate related with the increase of temperature was observed. Counts of E. coli O157:H7 were higher than those of non-pathogenic E. coli during the storage period at 4 and 8 °C, showing a better and a higher adaptation capacity to acid pH environments at refrigeration temperatures. This behavior was not observed at room temperatures.     

流式分析技术快速定量检测牛乳中大肠杆菌O157:H7

建立一种基于流式分析技术的快速定量检测牛乳中大肠杆菌O157:H7的方法。用偶联有异硫氰酸荧光素的大肠杆菌O157单克隆抗体对大肠杆菌O157:H7进行特异性标记,通过优化抗体反应条件,建立流式检测方法,然后对磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffer saline,PBS）和人工污染牛乳样品中不同浓度的大肠杆菌O157:H7进行定量检测。本研究建立的流式检测方法的在PBS中的检测范围为2.57×103～1.12×108?CFU/mL,灵敏度达到2.57×103?CFU/mL。将所建立的流式检测方法应用于牛乳样品检测,当人工污染牛乳样品中大肠杆菌O157:H7的浓度在2.31×104～1.48×108?CFU/mL之间时,流式检测方法与平板计数方法检测结果基本一致,方法的灵敏度为2.31×104?CFU/mL,检测时间为35?min。该方法能快速、定量地检测出牛乳样品中的大肠杆菌O157:H7,在食源性致病菌的快速筛查和监控中具有重要的应用价值。     

Survival of Escherichia coli O157:H7 in meat product brines containing antimicrobials

Brine solution injection of beef contaminated with Escherichia coli O157:H7 on its surface may lead to internalization of pathogen cells and/or cross-contamination of the brine, which when recirculated, may serve as a source of new product contamination. This study evaluated survival of E. coli O157:H7 in brines formulated without or with antimicrobials. The brines were formulated in sterile distilled water (simulating the composition of freshly prepared brines) or in a nonsterile 3% meat homogenate (simulating the composition of recirculating brines) at concentrations used to moisture-enhance meat to 110% of initial weight, as follows: sodium chloride (NaCl, 5.5%) + sodium tripolyphosphate (STP, 2.75%), NaCl + sodium pyrophosphate (2.75%), or NaCl + STP combined with potassium lactate (PL, 22%), sodium diacetate (SD, 1.65%), PL + SD, lactic acid (3.3%), acetic acid (3.3%), citric acid (3.3%), nisin (0.0165%) + ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA, 200 mM), pediocin (11000 AU/mL) + EDTA, sodium metasilicate (2.2%), cetylpyridinium chloride (CPC, 5.5%), or hops beta acids (0.0055%). The brines were inoculated (3 to 4 log CFU/mL) with rifampicin-resistant E. coli O157:H7 (8-strain composite) and stored at 4 or 15 °C (24 to 48 h). Immediate (0 h) pathogen reductions (P < 0.05) of 1.8 to ≥ 2.4 log CFU/mL were observed in brines containing CPC or sodium metasilicate. Furthermore, brines formulated with lactic acid, acetic acid, citric acid, nisin + EDTA, pediocin + EDTA, CPC, sodium metasilicate, or hops beta acids had reductions (P < 0.05) in pathogen levels during storage; however, the extent of pathogen reduction (0.4 to > 2.4 log CFU/mL) depended on the antimicrobial, brine type, and storage temperature and time. These data should be useful in development or improvement of brine formulations for control of E. coli O157:H7 in moisture-enhanced meat products. PRACTICAL APPLICATION: Results of this study should be useful to the meat industry for developing or modifying brine formulations to reduce the risk of E. coli O157:H7 in moisture-enhanced meat products.     

大肠杆菌O157:H7的冷冻损伤及解冻存活

为探讨冷冻后残存的大肠杆菌O157:H7（Escherichia coli O157:H7）在解冻后的存活情况,本研究首先比较4 株E. coli O157:H7冷冻后的死亡和损伤情况,进而采用无营养的磷酸盐缓冲液作为基质研究冷冻后不同解冻方式对E. coli O157:H7存活的影响。结果表明：4 株E. coli O157:H7 －20 ℃冷冻24、48、72 h后均发生了一定程度的死亡和损伤,冷冻时间越长细菌致死和致伤程度越明显,且存在菌株差异,冷冻72?h时菌株CICC21530的损伤率最高,为87.70%。采用混合菌株进行解冻实验,4?株E.?coli?O157:H7磷酸盐缓冲液菌液冷冻后立即置于20、30、37?℃解冻,细菌发生了进一步的死亡,解冻温度越高死亡越明显,3?个温度组在解冻48?h时菌落数均显著低于冷冻72?h时菌落数（P＜0.05）。进一步探讨缓慢解冻方式对菌体存活的影响,菌液冷冻后先置于4?℃一定时间（0、2、6、12?h）,再置于37?℃不同时间（5、10、30?min）观察菌株存活情况,结果表明4?℃缓慢解冻时间越长,越有利于细菌的存活,4?℃、12?h/37?℃、5～30?min解冻方式下改良山梨醇麦康凯琼脂上菌落数仍显著低于胰蛋白胨大豆琼脂上的菌落数（P＜0.05）,表明仍有损伤菌的存在。本实验提示采用缓慢解冻反而有利于残存菌的存活,冷冻食品风险评估时应重视残存菌尤其是损伤菌的检测和控制。     

Escherichia coli O157: H7 Growth in Laboratory Media as Affected by Phenolic Antioxidants

Five strains of Escherichia coli O157:H7 with ATCC 11775 E. coli were grown in brain heart infusion (BHI) broth (pH 5.8, adjusted with citric acid) and treated with butylated hydroxyanisole (BHA), butylated hy-droxytoluene (BHT), tertiary butylhydroquinone (TBHQ), and propyl gallate (PG) individually or combined. Additives ranged from 100–400 ppm with inocula levels between 5 and 104 CFU/mL in tissue culture plates or in flasks; samples were incubated at 4°C or 37°C for 24 hr. Additive antimicrobial efficacy varied with inoculum level and incubation temperature. BHA at <200 ppm was bactericidal on all strains. Poly-hydroxyl additives (TBHQ, PG) were less effective at 4°C. BHA-BHT combinations were synergistic at 4°C.     

Survival of Escherichia coli O157:H7 in dry sausage fermented by probiotic lactic acid bacteria

Probiotic Lactobacillus rhamnosus GG, L rhamnosus E‐97800, L rhamnosus LC‐705 and commercial Pediococcus pentosaceus were studied for their ability to inhibit the growth of Escherichia coli O157:H7 in dry sausage. The strains were able to produce technologically high‐quality dry sausage. The number of E coli O157:H7 decreased from approximately 5 to approximately 2 log cfu g⁻¹ It was concluded that the above‐mentioned strains and the commercial culture were equally effective in inhibiting E coli O157:H7. © 2000 Society of Chemical Industry     

免疫磁分离法高效富集牛奶中大肠杆菌O157:H7

目的建立一种免疫磁分离(immunomagnetic separation,IMS)方法高效富集大肠杆菌O157:H7。方法合成一种核壳型的纳米磁珠(magnetic nanobeads, MNBs),并基于制备的MNBs构建了IMS。通过优化制备免疫MNBs时抗体浓度, IMS过程免疫MNBs的用量和孵育时间,构建了高效的IMS方法。结果构建的IMS方法能够在35 min内完成牛奶中大肠杆菌O157:H7的高效富集,当大肠杆菌O157:H7浓度低于10~5 CFU/m L时,捕获效率高于93.4%,当菌浓度达到10~7CFU/mL,捕获效率仍大于50%。结论该方法简单高效,可被广泛应用于其他食源性致病菌检测的样品前处理。     

温度生长预测模型在大肠杆菌O157:H7控制中的应用

大肠杆菌O157:H7是严重危害人类健康的肠道致病菌。本实验研究了该菌在温度、pH、NaCl浓度影响下的生长繁殖规律,确定了大肠杆菌O157:H7的最适生长条件。建立了在pH、NaCl浓度最佳情况下鸡肉和肉汤中该菌的温度生长预测模型。以模型为依据,提出了出口分割鸡肉中控制大肠杆菌O157:H7的措施。     

大肠杆菌O157:H7快速培养的初步研究

本研究将Oxyrase酶加入到接种了大肠杆菌O157:H7的培养基中以促进这种兼性厌氧微生物的生长。与不加Oxyrase酶的对照组相比,添加了Oxyrase酶的培养基中的大肠杆菌O157:H7的浓度明显提高。实验结果表明,Oxyrase酶在大肠杆菌O157:H7 快速培养中具有潜在的利用价值。     

肠出血性大肠杆菌O157:H7的分子生物学检测及PCR检测

大肠杆菌一些特殊的血清型具有致病性,肠出血性大肠杆菌是大肠杆菌的一个亚型,主要致病菌株为O157:H7,可引起感染性腹泻,因能引起人类的出血性肠炎而得名。本文综述了分子生物学检测肠出血性大肠杆菌O157:H7的研究进展。分子生物学检测是利用抗原抗体特异性结合反应检测各种物质的分析方法,主要包括酶联免疫吸附法(ELISA)、胶体免疫金层析法以及免疫磁珠分离法(IMS)。PCR技术检测肠出血性大肠杆菌O157:H7,主要包括常规PCR检测、多重PCR检测以及实时荧光定量PCR检测。这两种方法灵敏度高、特异性强、操作简便、结果准确等优点,是检测肠出血性大肠杆菌O157:H7的常用方法。     

抗大肠杆菌O157:H7的卵黄特异性IgY的研究

以大肠杆菌O157:H7为抗原免疫产蛋母鸡,从鸡卵黄中提取免疫球蛋白,建立抗大肠杆菌O157:H7的特异性IgY的效价检测方法,并研究母鸡的免疫应答性,以及抗体的提取方法和体外抑菌效果.研究结果表明,初次免疫后第6d,在卵黄中可以检测到抗大肠杆菌O157:H7 IgY,效价为1:7200;经加强免疫后效价迅速上升,至第44d达到最高效价1:230400;免疫后360 d,效价仍维持在1:7200.用水稀释法、硫酸铵分级盐析和Sephadex G-25凝胶过滤以提取IgY,提纯后IgY的效价是之前的4倍.SDS-PAGE鉴定抗体的纯度,电泳图谱中出现抗体的轻链和重链两条带.体外抑菌实验表明,IgY能抑制大肠杆菌O157:H7的生长.     

生物传感器检测食源性大肠杆菌O157:H7研究新进展

近年来, 生物传感器因具有快速、简便、灵敏度高、低成本等优势被广泛应用到临床检测、环境监测等领域。该技术在食品安全领域也逐步得到重视, 尤其在病原微生物的快速检测方面。本文从免疫识别和核酸识别两方面简要介绍生物传感器技术检测食源性大肠杆菌O157:H7研究的最新进展, 对生物传感器技术存在的问题及未来的研究方向进行了总结及展望。     

食源性致病菌大肠杆菌O157:H7检测方法的研究进展

食源性致病菌是引起食物中毒的重要病原微生物,严重威胁人类健康,对食源性致病菌进行快速、准确的鉴定检测,是预防和控制致病菌的有效方法,而大肠杆菌O157:H7因其感染剂量低,致病性强,引起公众的广泛关注。本文综述了目前用于检测食源性致病菌大肠杆菌O157:H7的主要方法,包括细菌分离法,免疫学检测方法,分子生物学检测方法,并简单介绍了这些方法的优缺点,以期为检测大肠杆菌O157:H7时提供参考。     

应用DPO-PCR技术检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7

利用双启动寡核苷酸引物（dual-priming oligonucleotide,DPO）聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）技术检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7。根据DPO引物设计原则,以肠出血性大肠杆菌O157∶H7 rfbE 基因为靶基因设计一对DPO引物,经过反应体系的优化,建立了肠出血性大肠杆菌O157∶H7 DPO-PCR检测方法, 其检测灵敏度约为94 CFU/mL。与常规PCR方法相比,所建立的DPO-PCR方法对退火温度不敏感,在引物设计和实 验过程中不需要对引物及其退火温度反复优化,同时基于DPO引物的特殊结构又增强了其特异性。DPO-PCR方法 设计简易、特异性强,为致病性微生物的快速准确检测提供了新途径。     

大肠杆菌O157:H7胶体金试纸条的研制

采用胶体金标记抗大肠杆菌O157:H7 单克隆抗体(鼠源),通过将大肠杆菌O157:H7 多克隆抗体和驴抗鼠抗体(二抗)喷涂于硝酸纤维素膜分别作为检测线和质控线,研制大肠杆菌O157:H7 胶体金快速检测试纸条。通过优化实验,确定最佳条件为标记量16.8μg/mL、标记pH8.0、封闭剂PEG20000、检测时样品最佳pH7.0～7.5。对26 株常见细菌交叉反应结果表明,该试纸条除与鼠伤寒沙门氏菌ATCC 13311 和金黄色葡萄球菌CMCC 26003 有轻微交叉反应外,与其他24 株菌均无交叉反应。该试纸条灵敏度为104CFU/mL。用该试纸条检测大肠杆菌O157:H7操作简便、快捷、灵敏度高、特异性强。     

大肠杆菌O157:H7量子点免疫层析试纸条的研制

研制一种大肠杆菌O157:H7量子点免疫层析试纸。利用自制水溶性量子点静电偶联大肠杆菌O157:H7单克隆抗体,将大肠杆菌O157:H7单克隆抗体和羊抗兔二抗划线于硝酸纤维素膜分别作为检测线和质控线,制备双抗体夹心法检测大肠杆菌O157:H7的量子点免疫层析试纸。该试纸条能在5min内完成检测,检测限制为1×104 CFU/mL,对常见的8种食源菌无交叉反应。基于量子点的大肠杆菌O157:H7免疫层析试纸操作简便,灵敏度和特异性较好,可用于食品快速检测。     

PCR-免疫胶体金试纸条方法检测食品中 肠出血性大肠杆菌O157:H7

目的建立PCR-免疫胶体金试纸条法快速检测食品中肠出血性大肠杆菌O157:H7的分析方法。方法通过设计特异性引物建立肠出血性大肠杆菌O157:H7 PCR检测方法并使用免疫胶体金技术以及双抗体夹心法建立PCR产物快速检测试纸条并设计核酸检测展开液;将1株大肠杆菌O157:H7标准菌株和7株其他常见食源性致病菌作为试验菌株,用试验菌株检测PCR-免疫胶体金试纸条方法的检测特异度,并比较PCR-免疫胶体金试纸条法和PCR-琼脂糖凝胶电泳法的检测敏感度。结果 PCR-免疫胶体金法具有良好的特异度,灵敏度比标准琼脂糖凝胶电泳法高100倍。结论本文建立的肠出血性大肠杆菌O157:H7检测PCR-免疫胶体金试纸条法特异度好,灵敏度高,价格低廉,适用于食品中肠出血性大肠杆菌O157:H7的检测。     

利用光纤倏逝波生物传感器检测食品中 大肠杆菌O157:H7

目的 建立一种应用光纤倏逝波生物传感器快速检测食品中大肠杆菌O157:H7的方法。方法 对光纤用大肠杆菌O157:H7抗体包被制备检测探针,用纳米量子点对抗体进行偶联制备检测抗体,并确定其检测的灵敏度和特异性,同时通过对人工污染样品的检测确认该方法检测实际样本的可行性。结果 建立的光纤倏逝波生物传感器检测大肠杆菌O157:H7的灵敏度达到50 CFU/mL,并具有较强的特异性。结论 利用光纤倏逝波生物传感器检测食品中污染的大肠杆菌O157:H7方法快速、准确,具有较强应用价值。     

乳酸菌对肠出血性大肠杆菌O157:H7抑制作用的研究

为探讨乳酸菌对肠出血性大肠杆菌O157：H7 ATCC43895(E．Coli O157：H7)的抑制作用，在培养基上进行了研究。将E．Coli O157：H7与干酪乳杆菌干酪亚种、植物乳杆菌、发酵乳杆菌、乳酸乳球菌和瑞士乳杆菌同时接种在培养基中，E．Coli O157：H7的活性不受影响；将E．Coli O157：H7接种到培养了24h的乳酸茵培养液中，E．Coli O157：H7活性显下降。以乳酸调整的低pH值对E．Coli O157：H7有一定的杀灭作用。本研究表明：乳酸菌的代谢产物乳酸对E．Coli O157：H7有杀灭作用。