雪白弯颈霉C41发酵液稳定性及粗提物的抑菌活性

[目的]研究雪白弯颈霉C41菌株固体发酵粗提物的抑菌活性及其发酵液在不同条件下的稳定性。[方法]采用菌丝生长速率法,以7种植物病原真菌为供试菌,测定雪白弯颈霉C41固体发酵粗提物的抑菌活性;以玉米弯孢菌叶病菌为指示菌,测定发酵液在不同条件下的稳定性。[结果]固体发酵粗提物对玉米灰斑病、玉米弯孢菌叶斑病和玉米大斑病病菌菌丝生长均具有较强的抑制作用,抑制率分别为90%、84.38%和80%。发酵液在25~60℃范围内有较好的热稳定性,温度高于60℃则稳定性降低;有较广泛的酸碱稳定性,在pH值为6时抑菌活性最好;发酵液对日光和紫外线的稳定性较强。[结论]雪白弯颈霉C41菌株的代谢产物具有广谱的抑菌活性和较好的稳定性。     

放线菌AF1发酵液提取物对病原微生物的抑菌作用和稳定性分析

对放线菌菌株AFI乙酸乙酯提取物的抑菌谱做了研究。抑菌活性试验表明:AF1发酵液提取物对8种植物病原真菌和10种革兰氏阳性病原菌都具有抑制活性,对4种革兰氏阴性致病菌无抑制作用。在供试的8种植物病原菌中,放线菌AF1发酵液提取物对香蕉枯萎病菌(fusarium oxysporum f.sp.cubense)和苦瓜枯萎病菌(fusarium oxysporum f.sp.momodicae)的抑菌率达到85%以上。稳定性试验结果表明:菌种AF1发酵液对紫外线、热和酸碱较稳定,室温至80℃时稳定,90℃时活性丧失,在pH 2~10范围内稳定,耐受紫外线照射。试验表明该菌株发酵液提取物对革兰氏阳性致病菌的抑制作用较好,有较强的稳定性,具有一定的开发价值。     

放线菌TL05-22菌株发酵液的抑菌谱及稳定性

[目的]研究放线菌TL05-22发酵液的抑菌谱及稳定性。以16种植物病原真菌和6种细菌为供试菌,采用菌丝生长速率法、杯碟法测定拮抗放线菌TL05-22发酵液的抑菌谱;以苜蓿尖镰孢根腐病菌为指示菌,杯碟法测定发酵液的传代稳定性、热稳定性、酸碱稳定性及紫外线稳定性。[结果]放线菌TL05-22发酵液对16种植物病原真菌和6种细菌均具有不同程度的抑菌活性,其中供试真菌以对苜蓿尖镰孢根腐病菌的抑菌效果最好,抑菌圈直径达33.68 mm;供试细菌中以对大白菜软腐病菌的抑菌效果最强,抑菌圈直径达29.12 mm。将发酵液于60~100℃处理30、60 min,抑菌活性没有明显变化;发酵液在pH值6~14时抑菌活性未发生明显变化,但在pH<6条件下抑菌活性明显下降;连续培养10代,发酵液抑菌活性无明显变化。[结论]放线菌TL05-22的代谢产物具有广谱抑菌活性和较强的稳定性,具有一定开发价值。     

侧柏内生真菌G21代谢产物稳定性及发酵条件优化

[目的]了解侧柏内生真菌G21代谢产物的稳定性,并对其发酵条件进行优化。[方法]不同p H值(2~12)或不同温度(20~120℃)处理G21发酵液,并利用生长速率法测定其抑菌活性变化。采用正交试验法及响应面法对G21发酵条件进行优化。[结果]G21发酵液具有广谱农用抗真菌活性,对苹果腐烂病菌及葡萄白腐病菌抑制作用显著;其发酵液在中性(p H 6~8)及较低温度(50℃)下稳定。优化G21发酵培养基组成为蛋白胨3.1 g/L、葡萄糖11.8 g/L、硫酸镁0.58 g/L、磷酸二氢钾1.0 g/L。[结论]G21发酵液处理过程应避免酸碱及高温,优化得培养基G21发酵产物抑菌活性显著提高。     

海洋解淀粉芽孢杆菌GM-1菌株发酵液抗菌谱及稳定性测定

[目的]研究海洋解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)菌株GM-1发酵液的抗菌谱及稳定性。[方法]以10种植物病原菌为供试菌,生长速率法测定GM-1菌株发酵液的抗菌谱;以油菜菌核病菌为指示菌,生长速率法测定发酵液在不同条件下的稳定性。[结果]GM-1菌株发酵液对供试的10种植物病原菌具有较好的抑制作用,抗菌范围较广,其中对葡萄白腐病菌(Coniella diplodiella)和小麦根腐病菌(Bipolaris sorokiniana)的抑菌率均达85%以上;其发酵液的抗菌作用有较好的热稳定性,在光照和紫外线照射下稳定性较好,在pH值6～8的条件下抗菌作用稳定,对蛋白酶不敏感。[结论]GM-1菌株具有广谱抗菌活性和较强的稳定性。     

长枝木霉THLJ菌株防治黄瓜枯萎病影响因素分析

[目的]为提高长枝木霉THLJ菌株对黄瓜枯萎病的防治作用。[方法]采用盆栽试验的方法研究了木霉菌株接菌方式、温度、湿度和枯萎菌含量对THLJ防治黄瓜枯萎病和促进黄瓜植株生长的影响。[结果]拌土法接种最利于THLJ防治黄瓜枯萎病和刺激幼苗生长,防效达67.05%,对茎叶和根系生长的促进率分别为52.07%和80.33%;25℃时防病效果和幼苗生长促进作用最佳;湿度对THLJ的防效影响不大,高湿有利于菌株促进茎叶生长而不利于根系发育;土壤中枯萎病菌的接种量越大,THLJ的防病作用和刺激植株生长作用越差。[结论]研究结果为进一步利用高效木霉菌株、预防和控制蔬菜土传病害提供理论依据。     

侧柏内生真菌G21抑菌活性及其鉴定

[目的]研究侧柏内生真菌菌株G21在不同培养基中发酵产物抑菌活性,并进行鉴定。[方法]利用生长速率法测定抑菌活性,结合形态分类及ITS-18S rDNA序列分析鉴定菌株。[结果]G21在所有不同培养基中的发酵产物对苹果腐烂病菌、白菜黑斑病菌、小麦纹枯病菌及番茄灰霉病菌均有不同程度的抑制作用;G21鉴定为异茎点霉属(Paraphoma),与菊异茎点霉菌(Paraphoma chrysanthemicola)处于同一分支。[结论]G21马丁培养基和淀粉铵盐培养基发酵产物活性值得进一步研究。     

植物病原真菌抑制杂草的活性筛选及高粱靶斑病菌的活性代谢产物

[目的]开发环保、高效的天然除草剂。[方法]对10种植物病原真菌进行液态发酵,经二氯甲烷对发酵液进行萃取,旋转蒸发后得到二氯甲烷粗提物。以双子叶杂草反枝苋(Amaranthus retroflexus)为靶标,通过种子萌发和幼苗生长抑制试验筛选目标菌株。对目标菌株发酵液粗提物进行分离纯化、结构鉴定并检测其除草活性。[结果]在100 mg/L质量浓度下,高粱靶斑病菌(Bipolaris sorghicola)发酵液二氯甲烷粗提物对靶标杂草种子萌发、胚根及胚芽生长均表现出良好的抑制作用,并从中分离鉴定出bis (2-ethylhexyl) terephthalate、ditryptophenaline和3-[(1H-indol-3-yl)methyl]-6-benzyl-1-methylpiperazine-2,5-dione 3个化合物。其中3-[(1H-indol-3-yl)methyl]-6-benzyl-1-methylpiperazine-2,5-dione抑制反枝苋胚根、胚芽生长的EC₅₀值分别为185.49、215.81 mg/L,对胚根的抑制效果优于药...     

防治蔬菜灰霉病解淀粉芽胞杆菌的分离鉴定及抑菌特性

[目的]为研制防治蔬菜灰霉病的新型生物农药,进行高效生防菌的分离筛选及抑菌特性研究。[方法]通过形态学、生理生化和16S rDNA序列分析,对拮抗菌进行鉴定;采用平板扩散法测定发酵液的抑菌特性。[结果]分离筛选出1株对黄瓜灰霉病具有高效拮抗作用解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens);该菌株在生长对数期产生抗菌物质,并在30-38 h达到最大值;产生的抗菌物质有很好的热、酸碱稳定性,紫外线照射不敏感,常温储存6个月活性保持在80%以上;抗菌谱测定表明其对黄瓜灰霉病菌(Botrytis cinerea)、番茄叶霉病菌(Fulvia fulva)、黄瓜炭疽病菌(Colletotrichum orbiculare)、番茄早疫病菌(Alternaria solani)等多种病原菌具有显著抑菌效果。[结论]该菌株所产抗菌物质性能稳定,抗菌谱宽,抑菌力强,具有开发成新型广谱生物农药的潜力。     

一株车前子内生细菌的抑菌和促生活性初步研究

为了筛选到具有农用生物活性新的微生物资源,本研究以一株车前子内生细菌R6为试验材料,对其抑菌活性和促生作用进行了研究。抑菌测定结果表明,R6菌株对棉花枯萎病菌、甜瓜枯萎病菌、小麦赤霉病菌、草莓灰霉病菌、苹果腐烂病菌、番茄早疫病菌均有较强的抑菌活性,并能产生挥发性的抑菌活性物质。促生作用结果表明,R6菌株发酵液对黄瓜种子萌发、生长期的鲜重、根冠比、叶绿素含量等指标均有一定促进作用。     

含酰胺结构的苯基苯并噻唑基酮类衍生物的合成及生物活性

[目的]设计、合成系列含酰胺结构的苯基苯并噻唑基酮类衍生物，以发掘活性优良的目标化合物用于防治小麦赤霉病、辣椒枯萎病和苹果腐烂病。[方法]将苯并噻唑引入二苯甲酮类杀菌剂的结构中合成不同取代基的衍生物，目标化合物的结构经过1H NMR、13C NMR、IR和元素分析进行表征。采用菌丝生长速率法测试目标化合物的离体抑菌活性，并通过盆栽试验测试化合物5f的活体保护和治疗活性。[结果]质量浓度为50 mg/L下化合物均表现出一定的抑菌活性，其中化合物5f对小麦赤霉病菌和辣椒枯萎病菌的抑制率为72.40%和70.20%，优于对照药剂霉灵；化合物5m对辣椒枯萎病菌和苹果腐烂病菌的抑制率为77.90%和74.20%，均比对照药剂霉灵高。在质量浓度300 mg/L下，化合物5f对对辣椒枯萎病的保护和治疗活性优于对照药剂霉灵。[结论]该类化合物具有一定的杀菌活性，可为二苯酮类杀菌剂的研究提供参考。     

一株拮抗辣椒疫霉的放线菌及其防治效果

[目的]为获得对辣椒疫霉(Phytophthora capsici)具有生防效果的放线菌。[方法]采用平皿对峙法从辣椒根际56份土样中,分离筛选出1株对辣椒疫霉具有明显拮抗作用的放线菌LY26,测定了其对14种植物病原菌的抑菌效果。[结果]菌株LY26对供试病原菌中的卵菌均具有较好的抑制作用,对辣椒疫霉的抑菌效果最佳,抑制率高达97.56%。离体接种试验和盆栽试验结果表明施用LY26发酵液对辣椒疫病具有良好的防效。形态学和16S rDNA序列表明菌株LY26为链霉菌(Streptomyces sp.)。[结论]链霉菌LY26对辣椒疫霉具有生防潜力,有进一步研究鉴定其抗菌活性物质的价值。     

Bacillus methylotrophicus菌株产抗菌蛋白性质及对人参锈腐病菌抑菌作用

[目的]菌株Bacillus methylotrophicus是一株对人参锈腐病菌(Cylindrocarpon destructans)有较强拮抗作用的细菌,为了有效防治人参锈腐病,进行了其产生抗菌蛋白的性质研究和抑菌效果试验。[方法]通过混菌法研究抗菌蛋白对紫外、热、酸碱、有机溶剂和蛋白酶的稳定性;采用生长速率法测定抗菌蛋白对锈腐病菌菌丝生长的抑制作用;平板对峙法测定其对锈腐病菌菌丝形态的影响;液培法测定其对锈腐病菌孢子萌发的抑制影响。[结果]抗菌蛋白具有很好的抗紫外线、耐热、耐酸碱和耐蛋白酶的稳定性,当质量浓度大于62.5 mg/L时,对人参锈腐病菌菌丝生长抑制率超过63.8%;显微镜观察其对菌丝生长有强烈的抑制作用,可以导致菌丝生长过程中分支增多、断裂和菌丝空洞,500 mg/L的抗菌蛋白对锈腐病菌孢子萌发的抑制率可达到100%。[结论]为人参锈腐病的防治提供新的生物防治资源。     

螺[四氢噻吩-3-醇]类化合物的合成及抗菌活性

[目的]发现具有潜在抑菌活性的化合物。[方法]通过串联反应合成了一系列螺[四氢噻吩-3-醇]类化合物。采用生长速率法分别测定该类化合物的抑菌活性。[结果]该类化合物对细菌及真菌都具有抑菌活性,化合物3d对小麦赤霉病菌、苹果树腐烂病菌具有很好的抑制活性,IC50值分别为3.40、0.92 mg/L,化合物3d的IC50值已接近阳性药的活性(IC50值为3.3、0.3 mg/L)。[结论]该合成方法收率高,操作简单,条件温和。化合物3可以作为先导化合物进一步设计合成农用杀菌剂。     

百里酚偶氮类衍生物的合成及其抑菌活性

[目的]寻找具有较高抑菌活性的百里酚偶氮类化合物。[方法]以百里酚为母体,采用组合优化原理合成系列百里酚偶氮类衍生物,并采用菌丝生长速率法对其抑菌活性进行了初步筛选,对抑菌活性较好的化合物测定EC50值。[结果]目标化合物结构经~1H NMR和HR-MS确证,化合物3a、3b、3c、3h、3i和3j为已知化合物,其余化合物3d、3e、3f、3g、3k为首次报道。目标产物3a和3d在100 mg/L对除番茄灰霉病菌外的所有供试病菌均表现出比阳性对照霉灵更高的抑菌活性。化合物3a对玉米大斑病菌和苹果腐烂病菌的EC50值远低于霉灵对2种病菌的EC50值,表现出较好的抑菌活性。[结论]百里酚偶氮类化合物表现出较好的抑菌活性,可在其结构基础上,进行多位点和基团的修饰,有望发现抑菌活性更高的广谱型抑菌化合物,为开发高效、低毒和对非靶标生物安全的新型杀菌剂提供理论参考。     

稻曲病生防菌的筛选与鉴定

[目的]为获得优良、高效的稻曲病生防菌株。[方法]通过对峙培养法、菌丝生长速率法和孢子萌发法,综合筛选对稻曲病菌具有拮抗作用的生防菌株,根据形态特征、生理生化特性和16S r DNA序列进行种类鉴定。[结果]筛选出2株抑菌活性较高的生防菌QYQN-3和ZHQN-6,抑菌圈直径分别为33.33、31.67 mm,30%发酵液的菌丝生长抑制率分别为56.06%和50.76%,孢子萌发抑制率分别为47.85%和74.85%。菌株QYQN-3具有广谱抑菌效果。QYQN-3为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis),ZHQN-6为短小芽孢杆菌(B. pumilus)。[结论]2株生防菌对稻曲病菌均有较高的抑制效果,拓宽了稻曲病生防菌的种类。     

橘绿木霉GF-11的哌珀霉素鉴定及活性研究

[目的]为将橘绿木霉GF-11应用于生防实践，研究了该菌的哌珀霉素及其生物活性。[方法]使用浸提法提取该菌的哌珀霉素，运用TLC及LC-MS/MS鉴定哌珀霉素，并采用稀释平板法和牛津杯法测定抑菌效果，应用染色法、电导率测定、核酸和蛋白质含量测定、DNA降解等指标初步分析了该粗提物对链格孢菌的抑菌机制。[结果]TLC和LC-MS/MS结果显示该粗提物有5种新的哌珀霉素；粗提物对链格孢菌、细极链格孢菌、高氏白粉菌的抑菌率分别为61.2%、58.2%、35.7%，对链格孢菌孢子萌发的抑制率为85%；对大肠杆菌等细菌抑制效果较弱。粗提物可改变链格孢菌丝形态、破坏细胞膜结构，致使胞内电解质及大分子物质外泄，降解基因组DNA。[结论]橘绿木霉GF-11粗提物中鉴定出5种新的哌珀霉素；该粗提物对真菌抑菌效果较好，对细菌抑菌效果较差，并可通过破坏病原菌细胞膜结构达到抑菌效果。     

拮抗性芽孢杆菌Y1的鉴定及其粗提物抗白色念珠菌特性的研究

目的：探讨并确定车前草组织内生拮抗性芽孢杆菌对白色念珠菌抗菌活性。方法：通过该菌株的形态特征、生理生化特征及16SrDNA序列分析对其进行分类鉴定;利用滤纸片法测试了该菌株发酵上清液对白色念珠菌的抑菌活性,在此基础上利用牛津杯法考查了发酵上清液抗菌物质粗提物特性及培养时间对抗菌活性的影响。结果：菌株Y1液体发酵液上清液对白色念珠菌具有明显抑制作用,平均抑菌圈直径达到（20.4±0.5）mm;根据形态特征、生理生化特征及16SrDNA序列比对,该菌株被鉴定为贝莱斯芽孢杆菌;抗菌物质粗提物经不同温度、pH及蛋白酶处理后其抑菌活性发生一些变化,当温度为90℃抑菌活性开始下降,到121℃完全丧失活性;pH>10.0时,粗提物抑菌活性降低;对蛋白水解酶的水解作用稳定性较好,培养到44 h抗菌活性最好。结论：拮抗性贝莱斯芽孢杆菌对白色念珠菌具有明显抑制活性,且其发酵液中存在相对稳定的抗菌活性成分,具有一定的开发潜力。     

缓释剂改性壳聚糖基锌配合物的原位合成及其抑菌活性

[目的]研究新型缓释剂改性壳聚糖基锌配合物的合成及其抑菌活性。[方法]采用微波辐射法将壳聚糖进行烷基化改性,然后在一定条件下把锌离子与改性壳聚糖进行原位螯合,形成一种新型缓释抑菌剂,并采用红外光谱、核磁等方法对中间产物及目标产物进行表征分析。并对目标产物以不同质量浓度进行抑菌试验,观察分析不同质量浓度下的菌种生长情况。[结果]在一定质量浓度条件下,菌种生长较为缓慢,该产物具有一定的抑菌效果,在几种病原菌的抑菌试验中,对苹果腐烂病菌的抑菌效果要突出一些,其10 g/L质量浓度的有机锌抑菌剂对苹果腐烂病菌的抑菌率达到了61.72%±3.48%,而对甘蔗凤梨病菌的抑菌作用弱一些。对其他致病菌的抑菌效果还有待研究观察。[结论]将壳聚糖与金属离子进行配位,对缓释剂研究具有一定的指导借鉴意义。     

N-苯磺酰基-3-酰基吲哚苯甲酰腙类化合物的抑菌活性

[目的]研究N-苯磺酰基-3-酰基吲哚苯甲酰腙类化合物中具有潜在应用价值的抑菌先导化合物。[方法]在0.1 g/L质量浓度下,采用菌丝生长速率法分别测定了21种N-苯磺酰基-3-酰基吲哚苯甲酰腙类化合物1~21对小麦赤霉病菌、白菜黑斑病菌、烟草赤星病菌、棉花枯萎病菌和水稻稻瘟病菌的室内抑菌活性。[结果]化合物1、2、4、10和17对5种植物病原真菌均表现出较好的抑菌活性;如化合物4,抑菌率分别为51.70%、63.20%、54.30%、44.10%和45.20%,表现出广谱抑菌活性;尤其是对白菜黑斑病菌的抑菌率高达63.20%,超过阳性对照霉灵(52.60%)的抑菌活性。[结论]化合物1、2、4、10和17对所测植物病原真菌均表现出较好的抑菌活性,初步拟定将5个化合物作为进一步衍生修饰的先导化合物。