钴（Ⅱ）对纤维蛋白原硝化损伤及活性的影响研究

以纤维蛋白原为研究对象,运用紫外分光光度法、三维荧光光谱溉、SDS-PAGE和Von-Clauss法研究了Co（Ⅱ）参与过氧亚硝酸根（ONOO^-）介导的纤维蛋白原硝化反应过程。结果表明,Co（Ⅱ）对ONOO^-硝化损伤纤维蛋白原存在明显的促进作用,并加剧了硝化损伤后纤维蛋白原凝聚活性的下降。     

半胱氨酸为还原剂从兔毛纤维中提取角蛋白

以L-半胱氨酸为还原剂从兔毛纤维中提取角蛋白,在最佳提取条件：pH=10.5,L-半胱氨酸浓度0.165mol/L、尿素浓度8mol/L、反应时间5h、反应温度75℃,兔毛纤维溶解率高达74.12%。溶解液通过透析、冷冻干燥后,得到的角蛋白回收率为69.23%,角蛋白质量分数高达99.38%。通过SDS-聚丙烯酰胺电泳（SDS-PAGE）测定兔毛角蛋白的相对分子质量主要集中在11kDa左右。利用XRD、FTIR、拉曼光谱以及差示扫描量热仪（DSC）表征分析角蛋白内部结构,结果表明,随着兔毛纤维的溶解,L-半胱氨酸破坏了兔毛大分子链中35%（摩尔分数）的二硫键,导致角蛋白的二级结构发生变化,α-螺旋结构含量减少,α-结晶区含量降低,β-折叠结构含量增加。     

水对离子液体溶解再生蚕蛹蛋白的影响

以蚕蛹粉为原料,考察了含水量对离子液体1-烯丙基-3-甲基咪唑氯([Amim]Cl)溶解再生蚕蛹蛋白的影响,并对再生蚕蛹蛋白的结构和热稳定性进行了分析.结果表明,水会破坏[Amim]Cl的氢键结构,降低对蚕蛹粉的溶解再生效率;不含水的[Amim]Cl溶解再生蚕蛹蛋白的效果最好,在溶解温度90℃、时间24 h、乙醇为再生剂的条件下,蚕蛹粉溶解率为86.5%,蚕蛹蛋白再生率达59.6%,再生物为蛋白质,并具有α螺旋、β折叠二级结构,且β折叠结构比例大于α螺旋结构;离子液体含水量对再生蛋白的结构没有明显影响,再生蛋白的热稳定性比蚕蛹粉稍有提高.     

FT-IR光谱法测定蔗糖酶的二级结构

研究用FT-IR光谱的酰胺I带和酰胺III带测定了蔗糖酶的二级结构。结果显示,两个谱带测定的α-螺旋和β-折叠的误差分别为1.9%和0.6%。     

重组戊型肝炎疫苗抗原P179表征分析

目的对重组戊型肝炎疫苗(recombinant hepatitis E virus,rHEV)抗原P179表征进行分析。方法取3批HPLC及电泳纯度均为100%的rHEV抗原P179原液,采用SDS-PAGE法检测相对分子质量及二聚体含量;OPA-FMOC全自动柱前衍生-Amino Quant氨基酸分析法测定氨基酸组分;电喷雾-四极杆-飞行时间串联质谱(electrospray ionizationquadrupole time-of-flight-mass spectrometry,ESI-Q-TOF2-MS)法分析C-末端、Edman降解法测定N-末端氨基酸序列;HPLC法进行肽图分析;毛细管等电聚焦电泳法测定等电点;圆二色光谱仪分析其二级结构;透射电镜负染法观察蛋白颗粒状态;双抗体夹心ELISA法检测抗原活性。结果 3批rHEV抗原P179相对分子质量在17 500~21 300之间;二聚体占总蛋白的85%以上;氨基酸组分、C-末端氨基酸序列、N-末端氨基酸序列、肽图、等电点等均与预期相符;3批rHEV抗原P179二级结构中,α螺旋4.8%~5.6%,β折叠34.8%~36.4%,β转角20.8%~22.2%及无规卷曲37.7%~38.0%;透射电镜观察可见大小均一,粒径约20 nm的蛋白颗粒;抗原活性比值在5.0×105~2.0×10~6CCU/mg范围内。结论 3批r HEV抗原P179结构特征均一,与设计相符,为该疫苗的产业化奠定了基础。     

L-半胱氨酸为还原剂从兔毛纤维中提取角蛋白

以L-半胱氨酸为还原剂从兔毛纤维中提取角蛋白,在最佳提取条件:p H=10.5,L-半胱氨酸浓度0.165mol/L、尿素浓度8 mol/L、反应时间5 h、反应温度75℃,兔毛纤维溶解率高达74.12%。溶解液通过透析、冷冻干燥后,得到的角蛋白回收率为69.23%,角蛋白质量分数高达99.38%。通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)测定兔毛角蛋白的相对分子质量主要集中在11 k Da左右。利用XRD、FTIR、拉曼光谱以及差示扫描量热仪(DSC)表征分析角蛋白内部结构,结果表明,随着兔毛纤维的溶解,L-半胱氨酸破坏了兔毛纤维大分子链中35%(摩尔分数)的二硫键,导致角蛋白的二级结构发生变化,α-螺旋结构含量减少,α-结晶区含量降低,β-折叠结构含量增加。     

女贞叶中一条糖基转移酶的基因克隆、生物信息学分析及原核表达

女贞叶化学成分复杂,糖苷类物质是其发挥药理活性的关键成分,糖苷的形成离不开糖基转移酶。利用cDNA末端快速扩增技术,对女贞叶中一条糖基转移酶编码基因LlUGT3进行了克隆;根据基因和蛋白质序列进行了生物信息学分析;通过基因工程技术使LlUGT3基因在大肠杆菌体内进行了异源表达。结果表明,LlUGT3基因cDNA全长1 684 bp,由85 bp 5′-UTR、159 bp 3′-UTR、1 440 bp ORF组成,其中ORF编码一条含479个氨基酸残基的酶蛋白,其相对分子质量、理论等电点和亲水性平均系数分别为54.8 kDa、5.86和-0.381;在LlUGT3酶蛋白一级结构中含有一段糖基转移酶高度保守的PSPG盒,但不含信号肽且无跨膜片段,在二级结构中含有α螺旋(42.59%)、β折叠(12.73%)和无规卷曲(44.68%),在三级结构中由肽链折叠形成α/β/α类Rossmann折叠区域,并且两者之间夹着一个底物结合腔;同源建模结果显示,LlUGT3酶蛋白与模板分子PaGT3序列相似度很高,而且系统发育树分析也表明两者亲缘关系最近;分子对接分析表明,LlUGT3酶蛋白的His1...     

铜离子对自养脱氮亚硝化工艺的影响及恢复策略

采用SBR反应器考察了Cu(Ⅱ)短期作用对亚硝化反应器的影响规律,结果表明,低浓度的Cu(Ⅱ)(≤10 mg/L)对亚硝化有促进作用,并且在3~10 mg/L范围内影响规律相似。高浓度的Cu(Ⅱ)(≥20 mg/L)抑制AOB的活性,同时诱导了NOB的活性。Cu(Ⅱ)≥30 mg/L时NOB也被抑制。Cu(Ⅱ)对AOB的半抑制质量浓度为21.8 mg/L。在短期作用后,污泥中的铜含量增加。AOB被Cu(Ⅱ)完全抑制后,通过向反应器中投加20 mg/L EDTA螯合提取污泥中的铜离子,可使亚硝化得到恢复,同时污泥中的铜减少。     

水溶性醇类对溶菌酶空间结构和折叠过程的影响

利用多角度激光光散射仪和圆二色谱仪研究小分子水溶性一元醇和多元醇对溶菌酶分子的稳定性以及对变性溶菌酶的空间构象和折叠复性的影响.发现在一元醇和二元醇溶液中溶菌酶分子的稳定性均随着醇浓度的增大而提高,而变性酶分子在醇溶液中形成过多的α螺旋和β折叠等二级结构不利于酶的折叠复性;只有较低浓度的多元醇和甲醇有辅助变性溶菌酶复性的作用,其中10％甲醇、20％甘油和30％乙二醇有利于促进酶的复性.     

丝素/羧甲基壳聚糖共混膜的结构与性能

利用丝素(SF)与羧甲基壳聚糖(CMCS)共混制取不同比例的SF/CMCS共混膜。研究了CMCS诱导的丝素构象转变行为,测试了共混膜的吸湿性、透湿性和保水性。当CMCS的质量分数为5%时,共混膜中丝素的构象以β-折叠为主;当CMCS的质量分数为10%时,共混膜中丝素的构象由β-折叠向α-螺旋发生转变;当CMCS的质量分数达到15%时,共混膜中丝素的构象向无规卷曲发生转变。当CMCS质量分数小于15%时,共混膜中SF与CMCS具有良好的相容性,溶胀度较小,吸湿性随CMCS含量的增加而迅速降低。     

重组人干扰素β1a的纯化及其理化性质

目的纯化重组人干扰素β1a(recombinant human interferonβ1a,rhIFNβ1a),并分析其理化性质。方法应用15 L生物反应器悬浮微载体培养表达rhIFNβ1a的重组CHO细胞,细胞培养收获液经超滤浓缩、蓝胶亲和层析、脱盐和CM离子交换层析纯化后,采用水泡性口炎病毒抑制法测定rhIFNβ1a的效价;Lowry法测定蛋白含量;等电聚焦电泳法测定其等电点;SDS-PAGE和高效液相色谱法测定其纯度;Western blot法分析其免疫活性;SDS-PAGE和质谱仪测定其相对分子质量;圆二色谱法分析其二级结构。结果共纯化了3批样品,纯化的rhIFNβ1a平均蛋白浓度为0.284 0 mg/ml,平均比活可达1.06×108IU/mg,纯度达95%以上,蛋白质平均回收率为58.36%,蛋白质相对分子质量为20 445.0,等电点约为6.6,免疫活性良好,二级结构与国家标准品基本一致。结论成功纯化了rhIFNβ1a,并检测了其理化性质,为建立大规模制备rhIFNβ1a的生产工艺和制造检定规程,实现产业化奠定了基础。     

3种咪唑桥联铜锌异双核配合物的模拟超氧化物歧化酶的研究

用核黄素光照法测定了3种咪唑桥联铜(Ⅱ)-锌(Ⅱ)异双核配合物[(dien)Cu imZn(tren)](ClO4)3、[(tren)Cu imZn(tren)](ClO4)3和[(trien)CuimZn(tren)](ClO4)3的超氧化物歧化酶活性。对各模型化合物活性和结构的关系进行了探讨。结果表明,它们均在10-6-10-7mol/L的浓度范围内有50%以上抑制率。     

乙酰胆碱酯酶抑制剂复合体的晶体结构

乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE,EC 3.1.1.7.)属α/β型丝氨酸水解酶,催化亚基是由14个α螺旋与12个β折叠组成的大小为45×60×65的椭球形分子,α螺旋、β折叠在晶体中的含量分别为15％、30％,β折叠位于椭球形分子的中央,α螺旋将其包围。AChE分子结构最显著的特点是在球形分子的表面有一向内凹陷的深而窄的谷(gorge),谷深达20,几乎是酶分子的一半,近谷底部逐渐变宽,AChE活性中心的催化三联体:Ser200、Glu327和     

聚乙二醇修饰重组人干扰素α1b的制备及其性质

目的制备聚乙二醇(PEG)修饰的重组人干扰素α1b(rhIFNα1b),并分析其部分性质。方法采用PEG修饰rhIFNα1b,通过离子交换层析分离纯化修饰混合物,单点修饰产物经超滤浓缩后,经Lowry法检测蛋白的浓度,SDS-PAGE和RP-HPLC检测蛋白的纯度,等电聚焦电泳检测蛋白的等电点,质谱法检测蛋白的相对分子质量,细胞病变抑制法检测蛋白的体外活性,ELISA法检测蛋白的抗原性。结果单点修饰产物的蛋白得率为33%;SDS-PAGE分析纯度为96.1%,RP-HPLC分析纯度为98.1%;等电点为6.22;相对分子质量为39946;比活为1.28×106IU/mg,活性保留率为14.4%;抗原性至少降至原来的1/625。结论制备的单点修饰rhIFNα1b药学性质获得改善,有望开发为安全、长效的新型干扰素。     

一种手性甾体酰胺化合物的蛋白结合特征研究

合成了一种具有手性的甾体酰胺化合物3β-乙酰氧基-17-氮杂-D-homo-5-雄甾烯-17-酮(AHAO);利用荧光猝灭原理研究了其与人血清白蛋白(HSA)的结合作用。结果表明,在模拟人体血液离子强度及酸度条件下,AHAO能与HSA有效结合;计算得到不同温度下二者结合反应的表观平衡常数和热力学常数;圆二色谱显示AHAO使HSA分子中α-螺旋结构减少,β-折叠、β-转角、无规卷曲结构增加。     

氨基酸铜配合物的抗氧化活性分析

采用氨基酸和醋酸铜为原料,设计合成4种不同配体结构的Cu(Ⅱ)金属配合物Cu L1~4,并用紫外分光光度计和傅里叶红外检测仪对其化学结构进行了分析。采用改进的氮蓝四唑还原法确定了氨基酸铜金属配合物抗氧化活性最强时对应的浓度,并讨论了在相同浓度下不同种类氨基铜酸配合物的抗氧化活性与其化学结构之间的关系。结果表明,L-α-丙氨酸铜配合物由于金属活性中心周围空间位阻较小,其抗氧化活性高于苯丙氨酸铜配合物。     

再生丝素蛋白水溶液稳定性的研究

研究了不同浓度的丝素蛋白水溶液在不同温度下的稳定性,发现随着溶液浓度和存放温度的升高,溶液的稳定性迅速下降。X衍射、红外光谱和拉曼光谱的分析结果认为,大部分丝素蛋白分子在水溶液中以无规卷曲的构象存在,当发生凝胶化后,部分丝素蛋白分子转变为β折叠或α螺旋结构,形成了silkI和silkⅡ晶体。     

胶原/明胶的结构(构象)与性能研究Ⅲ.从酸溶胶原(SLK)中分离出的四种不同构象的表征

本文以高纯α_1、α_2、β_(11)、β_(12)和γ为标准样品,测定了它们在SDS-PAGE电泳中的迁移距离,利用这些组份的分子量的对数log M_n与迁移距离的线性关系,对从酸溶胶原中分离出来的a、b,c、d、e和f六个不同级份进行了鉴定,表明从a到f的六个不同的分离级份是α__(1a),α_(1b),β_(11)和β_(12),α_z,和(α_1+β_(11))。这一分离是成功的。其中α_(1α)和α_(1b)是首次分离成功。     

海藻酸钠改性铝污泥功能球吸附Cu(Ⅱ)的研究

以铝污泥(AlS)和海藻酸钠(SA)为主要原材料,经过溶胶-凝胶法制备海藻酸钠改性铝污泥(SA-AlS)功能球,研究了温度、pH、初始浓度、吸附时间对Cu(Ⅱ)吸附过程所产生的影响。结果表明,SA-AlS功能球在Cu(Ⅱ)的吸附过程中最佳pH为5.5,吸附平衡时间为24 h,吸附过程为自发、吸热、熵增的过程,吸附等温线拟合结果表明,SA-AlS功能球对Cu(Ⅱ)的吸附行为更符合Langmuir模型,表明该吸附过程主要涉及单层吸附;拟一级和拟二级动力学模型研究表明,该吸附过程与拟二级动力学模型更符合,故SA-AlS功能球对Cu(Ⅱ)的吸附过程主要由化学吸附控制。吸附饱和的SA-AlS功能球可以用EDTA-2Na溶液很好地脱附,5次吸附-脱附后仍保持较好的吸附活性。     

蒙脱石负载铜(Ⅱ)配合物的制备及吸附性能研究

通过离子交换和络合作用合成蒙脱石负载铜(Ⅱ)-水杨醛缩-β-丙氨酸复合材料[Cu(Ⅱ)-L/MMT]。采用XRD和FT-IR对该复合材料进行了表征,并考察了其对结晶紫的吸附性能及影响因素。结果表明,铜(Ⅱ)配合物已成功插入蒙脱石层间;溶液p H、复合材料投加量、吸附时间及结晶紫的初始浓度对复合材料吸附去除结晶紫有较大影响。与原土相比,[Cu(Ⅱ)-L/MMT]对结晶紫的去除效果明显提高。该复合材料对结晶紫的吸附等温线符合Langmuir模型,吸附行为符合拟二级动力学模型。