屎肠球菌与酿酒酵母共发酵产γ-氨基丁酸条件优化及机制研究

为提高γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）产量,以产GABA屎肠球菌（Enterococcus faecium）AB157与酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）SC-125为研究对象,通过单因素实验和响应面法优化共发酵条件;同时分析最优条件下共发酵和单菌发酵体系谷氨酸脱羧酶（glutamate decarboxylase,GAD）的酶活力及通过添加无细胞上清液（cell-free supernatant,CFS）探究高产GABA机制。结果表明:当总接种量2%（V/V）,发酵温度为35 ℃、屎肠球菌AB157和酿酒酵母SC-125的接种比例为5:1（V/V）、L-谷氨酸钠浓度为12 g/L、发酵96 h时,共发酵体系GABA产量最高,达6.55 g/L,较单菌发酵体系产量提高到1.78倍;GAD酶活力分析表明,共发酵可显著提高GAD酶活;添加屎肠球菌AB157或酿酒酵母SC-125的CFS可显著提升GABA产量。本研究为屎肠球菌和酿酒酵母共发酵提高GABA产量及高产GABA机制的探讨提供了一定的理论参考。     

屎肠球菌BC-3产细菌素条件优化及其理化特性研究

从东北传统发酵酸菜中筛选到一株屎肠球菌BC-3,通过其代谢产生的细菌素来控制食品中的某些腐败菌和病原菌,开发其作为高效广谱食品生物防腐剂。通过滤纸片法对屎肠球菌BC-3产生细菌素发酵条件进行优化,结果表明,发酵时间为20 h、pH值为6.5、接种量为1.5%、温度为37.0℃时,抑菌圈直径最大,为17.87 mm。经硫酸铵粗提后,对肠球菌素E3生物学特性进行分析,结果表明其具有较高耐热性,在pH为2.0~10.0的范围内稳定性较好,可被蛋白酶降解,经有机溶剂处理后稳定性几乎不受影响。     

屎肠球菌发酵特性及其功能性研究

探讨了分离自新疆酸奶疙瘩的一株屎肠球菌在乳制品应用中具有的潜在益生价值。通过测定滴定酸度、丁二酮、乙醛、游离氨基酸等指标,研究了屎肠球菌在脱脂乳中的发酵特性以及发酵乳上清液具有的抗氧化与抑菌功能。结果表明,屎肠球菌产酸、产香和降解酪蛋白能力强,37℃发酵24h,滴定酸度为123.55°T,丁二酮含量为12.31μg/mL,乙醛含量高达90.12μg/mL,游离氨基酸含量为331.92μg/mL,活菌数最高可达1.10×1010cfu/mL。发酵乳上清液对常见病原微生物有抑制作用,且抑菌物质具有热稳定性、较宽的pH范围、对蛋白酶敏感的特点,对羟自由基清除率为96.84%,超氧阴离子自由基清除率为31.33%,具有抗氧化能力。     

屎肠球菌HY07产细菌素发酵条件的优化

对屎肠球菌HY07产细菌素的培养基组成和发酵条件进行了研究.通过单因素水平试验和正交试验,确定产细菌素的最佳培养条件为37℃培养24h,培养基初始pH为6.最佳培养基组成为:葡萄糖1％,鱼粉蛋白胨1.5％,牛肉膏1.5％,磷酸氢二钾0.2％,柠檬酸二铵0.2％,乙酸钠0.5％、硫酸锰0.025％,吐温-800.4％.在此条件下培养屎肠球菌HY07,所产细菌素抑菌圈可达12.60mm.     

产细菌素屎肠球菌E6的特性分析及发酵条件优化

研究了屎肠球菌E6抑菌活性的生物学特性,并通过响应面法优化其发酵条件.结果表明,屎肠球菌E6产蛋白质类细菌素,能够抑制单增李斯特氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌生长,在pH3.0～7.0条件下有明显抑菌活性,60～121℃热处理20min后仍具有抑菌活性.通过Box-Behnken实验设计优化屎肠球菌E6发酵条件为培养时间36.0h,培养温度31.0℃,培养基pH5.1.在此条件下,发酵上清液抑菌圈直径可达20.17mm,较优化前提高了27.2％.     

产细菌素屎肠球菌E6的特性分析及发酵条件优化

研究了屎肠球菌E6抑菌活性的生物学特性,并通过响应面法优化其发酵条件。结果表明,屎肠球菌E6产蛋白质类细菌素,能够抑制单增李斯特氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌生长,在pH3.0～7.0条件下有明显抑菌活性,60～121℃热处理20min后仍具有抑菌活性。通过Box-Behnken实验设计优化屎肠球菌E6发酵条件为培养时间36.0h,培养温度31.0℃,培养基pH5.1。在此条件下,发酵上清液抑菌圈直径可达20.17mm,较优化前提高了27.2%。      

屎肠球菌与植物乳杆菌共培养产γ-氨基丁酸条件优化及关键酶活性研究

为进一步提高γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)产量,以从泡菜中筛选获得的产GABA屎肠球菌(Enterococcus faecium)AB157与植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)BC112为研究对象,采用高效液相色谱法对菌株共培养发酵产GABA表达能力进行评估....     

产细菌素屎肠球菌的筛选鉴定及其抑菌特性

从采自四川红原的传统发酵酸乳中分离得到308株疑似乳酸菌,通过96孔板法初筛和平板打孔法复筛,筛选出l株具有明显抑菌作用的菌株SC-Y112.通过形态学观察、16S rDNA序列同源性分析和ropA管家基因序列同源性分析结合生理生化实验,鉴定该菌株为屎肠球菌(Enterococcus faecium).通过排酸及排除H...     

屎肠球菌B13产乳酸菌素的发酵条件优化

为提高屎肠球菌B13乳酸菌素的产量,以接种量、培养基初始pH值和发酵温度为考察因素,在单因素试验的基础上,利用Box-Behnken中心组和试验设计原理进行三因素三水平的响应面优化分析,优化后的最佳培养条件为:接种量4.4%、培养基初始pH 5.3、发酵温度33℃。在此条件下,乳酸菌素的抑菌效价达5.32×10^8 IU/mL,比优化前提高1.44倍,为屎肠球菌B13乳酸菌素的开发利用提供参考依据。     

高产γ-氨基丁酸植物乳杆菌的筛选、鉴定及益生特性

从东北酸菜和韩国泡菜中筛选高产γ-氨基丁酸的植物乳杆菌菌株,对其测序鉴定乳酸菌种类,并深入研究该菌株的益生特性。结果表明：通过16S rDNA 测序鉴定该菌株为植物乳杆菌,命名为Lactobacillus plantarum Lp3。该菌株有良好的生长和产酸能力,接种2～12 h 生长较快进入对数期,接种0～6 h 快速产酸。益生特性表明：L.plantarum Lp3 菌株对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌均有较好的抑制效果,对沙门氏菌抑菌圈直径达32.27 mm。当胆盐浓度为0.5%和pH 值为2.0 时,L.plantarum Lp3 菌株活菌数分别为7.12 lg（CFU/mL）和7.29 lg（CFU/mL）,说明其具有良好的耐胆盐及耐酸能力。同时,L.plantarum Lp3 菌株在胃肠道中表现出很好的生存能力,对常用的红霉素、氯霉素和四环素等抗生素具有一定的敏感性。     

乳酸乳球菌发酵生产γ-氨基丁酸的条件优化

通过对乳酸乳球菌的发酵培养基及发酵条件进行优化,得到有利十GABA产量的培养基组分为葡萄糖10g/L、混合氮15g/L、混合氮源(柠檬酸二三铵:硫酸铵)成分比例2:1、谷氨酸20g/L:有利于GABA产量的发酵条件为培养基仞始pH6.5、培养温度30℃、培养时间26h.在最佳培养基组合和发酵条件下,发酵液中GABA的产量达9.01g/L.     

益生屎肠球菌RS3的分离鉴定及增殖条件的优化

为筛选具有益生作用的乳酸菌,该研究从泡菜中筛选到1株细菌菌株RS3,经菌落形态观察、生化试验和16 S rRNA序列分析确定为屎肠球菌。为高效获得屎肠球菌RS3菌体,对其最佳增殖条件进行优化研究。利用单因素筛选和中心复合响应面试验对屎肠球菌RS3菌体增殖用液体培养基和增殖条件进行研究,优化的最佳培养基为乳糖15 g/L、胰蛋白胨25 g/L、初始pH值为8.2、培养温度37℃。与优化前培养条件相比,优化后培养条件下菌体生物量提高了54.9%,乳酸产量提高了53%,为后期规模化培养和益生菌剂开发奠定基础。     

发酵鸡肉肠中γ-氨基丁酸富集条件的优化

采用人工接种乳酸菌的方法,对发酵鸡肉肠中γ-氨基丁酸(γ-amino butyric acid,GABA)进行富集。首先鸡肉肠中分别添加不同来源的乳酸菌,筛选GABA富集的最佳发酵菌种;然后研究外源添加物L-谷氨酸(L-Glu)、VB_6和CaCl_2对鸡肉肠中GABA含量的影响,并采用Box-Behnken试验设计优化添加量。结果表明,3种不同来源的乳酸菌发酵鸡肉肠,其中酸奶乳酸菌与泡菜乳酸菌产GABA的能力较弱,均低于10 mg/100 g,耐久肠球菌产GABA能力最强,GABA含量达到62.14 mg/100 g,显著高于其他两种菌(P0.05);Box-Behnken设计得到发酵鸡肉肠富集GABA的最优外源添加物添加量为L-Glu 7.75 mg/100 g、VB_6 6.73 mg/100 g、Ca Cl2 8.35 mg/100 g,在此条件下鸡肉肠中GABA含量为68.32 mg/100 g,是未添加外源物含量的1.10倍,比普通鸡肉肠约提高10倍。方差分析表明,所建的回归模型能够很好地预测鸡肉肠中GABA含量的变化。其中,3种外源添加物的添加量均极显著影响鸡肉肠中GABA含量(P0.01),L-Glu和VB_6添加量的交互作用以及L-Glu和CaCl_2添加量的交互作用均显著影响鸡肉肠GABA含量(P0.05)。     

牦牛发酵酸奶中耐久肠球菌的筛选鉴定和益生特性

为从牦牛发酵酸奶中筛选出新的食源性益生菌株,通过培养分离、16S rRNA基因测序分析和生化实验鉴定出4株耐久肠球菌。这4株分离株与已报道的8株耐久肠球菌的同源性高达99.4%~99.9%,并且在系统发育树中单独聚为一支。其中耐久肠球菌SWUN5857的体外抗酸和抗胆盐能力最强,在体外可以有效抑制致病性大肠杆菌(抑菌圈直径(17.0±0.3)mm)和沙门氏菌(抑菌圈直径(18.0±0.2)mm)的生长,对常见的大多数抗生素都敏感,并且可以很好地与小鼠各段肠黏液产生黏附。短期喂服耐久肠球菌SWUN5857可以显著提高小鼠体质量(P0.01),促进动物脾脏和胸腺的发育,同时还可提升动物体液和细胞免疫水平(P0.01)以及肠道SIg A的表达水平(P0.01)。综上所述,分离得到的耐久肠球菌SWUN5857能很好地适应胃肠环境压力,有效提高动物的生长性能和免疫功能,可以作为候选的益生性菌株。     

产γ-氨基丁酸乳酸菌的分离鉴定及其发酵条件优化

以浆水作为菌株分离源,分离筛选产γ-氨基丁酸（GABA）乳酸菌,采用薄层层析法和高效液相色谱法定性定量分析GABA,并对筛选菌株进行形态学观察、生理生化试验及分子生物学种属鉴定、发酵特性分析及发酵条件优化。结果表明,共分离筛选出21株乳酸菌,具有产GABA能力的有6株,经鉴定其中5株为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）,1株为发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentans）。选取GABA产量最高的一株植物乳杆菌,编号为2,通过单因素试验及响应面试验确定其最适发酵条件为：初始 pH值5.8,发酵温度36 ℃,发酵时间60 h。在此优化条件下,GABA产量可达0.78 g/L,比优化前产量（0.22 g/L）提高约3.5倍。     

豆酱中产细菌素屎肠球菌的筛选及特性分析

从农家传统发酵豆酱中分离出164株疑似乳酸菌,其中有84株球菌。试验筛选到1株产细菌素的屎肠球菌R1并对其理化性质进行研究。该细菌素对金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌、大肠杆菌等具有较好的抑制作用,对酸和热稳定。经鉴定该细菌素种类为肠球菌素P。菌株R1在p H3.0模拟胃液中3 h存活率达86.35%,在模拟肠液中6 h存活率达87.72%,对人工消化液耐受性良好。药敏试验结果表明,菌株R1对青霉素、氨苄西林、环丙沙星、氯霉素和庆大霉素敏感,对诺氟沙星和红霉素不敏感,未检测出毒力因子,具有潜在安全性。     

自然发酵乳中粪肠球菌和屎肠球菌的4种鉴定方法的比较

采用传统生理生化鉴定方法,16S rRNA基因序列分析技术,16S-23S rRNA间区序列多态性分析技术,变性梯度凝胶电泳技术(DGGE),对分离于自然发酵乳中的9株粪肠球菌和6株屎肠球菌进行鉴定,并对4种鉴定方法进行比较和评价。结果表明,16S-23S rRNA间区序列多态性分析技术和DGGE技术不但可以快速、精确地区分粪肠球菌和屎肠球菌,而且能够将粪肠球菌和屎肠球菌种内的不同基因亚型区分开,而传统生理生化鉴定方法和16S rRNA基因序列分析技术较以上两种方法区分效果略差。     

豆汁源屎肠球菌DZ的发酵特性及其安全性评估

本文以豆汁源屎肠球菌DZ为研究对象,从生长曲线、产酸能力、产粘能力及模拟人体胃肠道耐受性等方面探究其特性;通过吲哚实验,溶血实验,硝酸还原酶检测等实验探究其安全性,并进一步探究其发酵产品的安全性。结果表明,屎肠球菌DZ在1h-4 h时菌落生长较快;在p H 3.0的人工胃液中可存活,之后进入肠道可增殖;豆汁接菌发酵16 h时,酸度值达43.69°T,接菌发酵的豆汁酸度值差异极显著(p0.01);发酵时间为16 h时,粘度值达5.50 mPa·s且差异极显著(p0.01);在安全性探究实验中,硝酸还原酶检测及吲哚实验均为阴性,溶血性实验表明屎肠球菌DZ为γ-溶血;其发酵产品均未检出黄曲霉毒素、呕吐毒素等有害物质。结论说明,屎肠球菌DZ具备在极低p H值情况下存活的能力,产酸能力良好,且具备一定的产粘能力;该菌不分解色氨酸,不溶血,其代谢产物中不含硝酸还原酶,具有一定安全性。     

Lactococcus raffinolactis Y-12产γ-氨基丁酸发酵条件优化

为提高乳球菌产γ-氨基丁酸的能力,采用响应面法优化棉籽糖乳球菌Y-12产γ-氨基丁酸发酵条件。在单因素试验结果基础上,选择发酵温度、发酵时间和初始p H为自变量,以GABA产量为响应值,运用Box-Behnken法设计3因素3水平响应面设计。结果表明,响应面模型与实际情况拟合良好,能够较好预测GABA产量。获得最佳发酵条件为接种量4%、发酵温度34℃、发酵时间73h和初始pH 6.0,在此条件下GABA产量为4.06 g/L,与理论值(4.153 g/L)相比,相对误差仅为2.29%。     

1株分泌细菌素屎肠球菌ZJ19的筛选和鉴定

从浙江大学医学院附属妇产科医院的健康初生婴儿粪便中分离获得76株乳酸菌,通过琼脂平板扩散法筛选到1株乳酸菌菌株,该菌不仅对革兰氏阳性菌,如单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌有抑菌活性,同时对大肠杆菌、沙门氏菌、副溶血性杆菌等阴性菌也有较好的抑菌活性。通过排除有机酸、过氧化氢等的干扰后,该菌发酵液离心后的上清液仍有较强的抑菌活性,用蛋白酶K、胰蛋白酶、胃蛋白酶分别处理后该上清液均失去抑菌活性,由此确定该乳酸菌产生的抑菌活性物质具有蛋白质属性,为1种细菌素。该细菌素具有热稳定性,在pH 3.75,121℃热处理30 min,抑菌活性仍保持在80%以上。经过生理生化试验和16S rDNA序列分析,鉴定菌株为屎肠球菌,命名为Enterococcus faecium ZJ19。