重庆市即食食品中单核细胞增生李斯特菌污染监测及初步风险评估

目的 了解重庆市市售即食食品中单核细胞增生李斯特菌(以下简称单增李斯特菌)的污染情况,进行初步风险评估,为预防食源性疾病提供科学依据。方法 2016—2019年对全市39个区县的市售即食食品中的单增李斯特菌进行监测,并用半定量微生物风险评估方法,初步评估重庆市即食食品中单增李斯特菌的风险。结果 重庆市2 680份即食食品中单增李斯特菌的检出率为1.77%;中式凉拌菜的单增李斯特菌检出率显著高于熟肉制品、生食水产品和即食豆制品(非发酵)(P＜0.05);超市、餐饮单位、农贸市场、便利店的即食食品中单增李斯特菌检出率大致相当(P＞0.05);第四季度单增李斯特菌检出率最高(P＞0.05);包装形式上,散装食品污染率最高(P＜0.05)。重庆市每年预计因食用熟肉制品、中式凉拌菜、生食水产品、即食豆制品(非发酵)引起每百万人口的李斯特菌病的发病例数分别为633.7例、126.1例、2.4例、31.5例。结论 重庆市即食食品中存在单增李斯特菌污染,其中熟肉制品致病风险最大。建议对即食食品加工后期采取有效的控制和监测措施,优先开展熟肉制品和中式凉拌菜中单增李斯特菌的定量风险评估研究,以降低潜在危害。     

即食食品中单增李斯特菌的FSO值确定

食品安全目标(FSO)值的设定是进行食品致病菌风险管理的重要方法之一。该文对FSO的基本概念和实施进行了介绍,对比了传统的和以FSO为基础的2种风险管理措施,综述了国际上主要国家和地区对即食食品中单增李斯特菌的限量标准要求,并在此基础上按照不同限量标准,结合指数型剂量效应模型,推测了某市易感人群因摄入即食食品中单增李斯特菌导致的病例数,由此建议我国即食食品中单增李斯特菌的FSO值为2(lgCFU/g),即食食品中单增李斯特菌的限量标准可定为100 CFU/g。     

即食食品中单增李斯特菌的半定量风险评估

开展某市即食食品中单增李斯特菌的半定量风险评估,参照微生物风险评估程序,对单增李斯特菌开展了危害识别、危害特征描述、暴露评估和风险特征描述。通过剂量反应关系推测易感人群和非易感人群由于摄入即食食品导致单增李斯特菌病的每年发病概率分别为3.71×10-7和3.39×10-9。基于2008~2011年监测各类生食蔬菜、生食水产品、菜肴(沙拉)等即食食品942组数据,构建了即食食品中单增李斯特菌的风险矩阵,由风险可能性和风险损失度计算得到易感人群通过摄入即食食品感染单增李斯特菌的风险等级属于五级风险等级中较小的一级,表明当地居民通过摄入即食食品感染单增李斯特菌病的风险较小。本文可为构建完整单增李斯特菌风险评估体系提供理论参考。     

即食食品中单核细胞增生李斯特菌的血清学分型和毒力基因分析

目的掌握即食食品中单核细胞增生李斯特菌(简称单增李斯特菌)的血清型、谱系和感染相关基因的分布。方法以全国食源性致病菌监测网中2007—2009年自即食食品分离的226株单增李斯特菌为研究对象,采用传统的血清学分型技术和等位基因特异性寡核苷酸PCR方法(ASO-PCR)研究其血清学分型,并采用PCR方法检测其与感染相关的基因。结果 226株单增李斯特菌血清学分型结果显示,1/2a、1/2b、1/2c、4b为主要血清型,比例分别为41.59%(94/226)、40.71%(92/226)、10.62%(24/226)和5.31%(12/226)。引起人类疾病的常见血清型1/2a、1/2b和4b菌株占87.61%(198/226)。谱系Ⅰ菌株为105株,谱系Ⅱ菌株为120株,谱系Ⅲ菌株为1株;我国绝大部分即食食品中单增李斯特菌分离株的感染相关基因缺失率较低,只有个别菌株缺失感染相关基因。结论本研究通过对分离自即食食品中的单增李斯特菌进行血清学分型、谱系分析和感染相关基因的检测,提示我国需要加强食品场所卫生管理,降低单增李斯特菌对即食食品的感染风险。     

冷链即食食品生产加工环境中李斯特氏菌属检测方法的建立与应用

目的 开发一种建立可用于冷链即食食品生产加工环境中李斯特氏菌属的分离与检测方法,应用于对生产企业中的环境进行监控。方法 本研究结合GB4789. 30-2016国标方法和美国美国食品药品监督管理局细菌学分析手册Food and Drug Administration Bacteriological Analytical Manual（FDA BAM ）FDA BAM 单增李斯特氏菌检测方法,通过制备冻干定量菌球模拟增菌实验,对增菌液中萘啶酮酸和吖啶黄素的添加时间、头孢曲松钠的添加浓度进行了研究,确定最佳增菌方式和头孢曲松钠浓度,并将其应用到实际冷链即食食品生产企业环境中李斯特菌属的分离检测中。,确认该方法的可行性。结果 3种李斯特氏菌属和背景菌的冻干菌球的浓度分别为102 CFU/球及103 CFU/球。通过模拟增菌实验,延后4小时 h使用添加剂,可使李斯特氏菌属及单增李斯特氏菌的检出率均提高10%,在此基础上头孢曲松钠添加量在6 μg/mL至~8 μg/mL时,李斯特氏菌属及单增李斯特氏菌的检出率均为100%。结论 以上该方法应用在生产企业实际环境监测中,可提高李斯特氏菌属的检出率。该方法可应用于为冷链即食食品生产企业中李斯特氏菌属的环境监控,为生产企业的环境监控提供了技术保障。     

基因探针快速检测食品中单增李斯特氏菌

应用AccuProbe基因探针方法快速检测食品中单增李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes),结果表明,采用该基因探针方法检测食品中单增李斯特氏菌特异性强,对食品中单增李斯特氏菌鉴定时间仅需30min,采用增菌肉汤检测低限为7.5×107cfu/mL。对206个样品检测结果表明,AccuProbe基因探针方法可快速准确地检测食品中单增李斯特氏菌。     

2005—2013年河北省即食食品中单增李斯特菌污染及耐药特征研究

研究2005—2013年河北省即食食品中单增李斯特菌污染状况及耐药特征。方法 单增李斯特菌检验参照(GB/T 4789.30),药物敏感性试验应用微量肉汤稀释法,对15种抗生素进行耐药检测。结果 单增李斯特菌总污染率为1.34%,凉拌菜及沙拉(2.62%)、生食水产品(2.51%)的检出率均高于所测其他食品。136株单增李斯特菌对15种抗生素耐药率为13.97%,以氯霉素耐药率最高(7.35%),其次是四环素和复方新诺明(均为4.41%),强力霉素和环丙沙星的耐药率均为2.94%,所有菌株对青霉素、亚胺培南、头孢噻吩、利福平、氨苄西林-舒巴坦酸敏感。结论 河北省即食食品中存在单增李斯特菌污染,分离菌株存在较严重的耐药情况,且耐药性有增长趋势,应加强即食食品的监管以保证食品安全及公众健康。     

我国零售食品单增李斯特菌污染的健康风险分级研究

目的对我国零售阶段食品中单增李斯特菌污染的健康风险进行评估和分级。方法利用全国污染物监测网中2010—2013年食品中单增李斯特菌污染水平监测数据、2002年中国居民营养与健康状况调查中的膳食消费量数据以及2011年中国统计年鉴资料,对李斯特菌病敏感人群通过5大类17小类食品暴露于单增李斯特菌的风险进行评估和分级。结果生食水产品是单增李斯特菌污染水平较高的食品类别,其次是散装熟肉制品。豆腐皮/丝是导致李斯特菌病每年发病风险最高的食品,散装熟肉食品导致的单增李斯特菌健康风险是定型包装的4~10倍。结论生食水产品和散装熟肉制品导致的每餐单增李斯特菌病发病风险最高,即食非发酵豆制品和熟肉制品是可能导致我国每年发生单增李斯特菌病的最主要食品。     

单核增生李斯特氏菌近红外快检方法建立与应用

目的建立一种近红外荧光免疫法快速检测单增李斯特氏菌的方法。方法采用近红外荧光染料Dylight800标记单增李斯特菌单克隆抗体,结合免疫侧向流技术制备单增李斯特菌快速检测试纸条。结果整个实验过程仅需45 min,对食品中单增李斯特氏菌最低检测限为500 CFU/mL,与其他5种食源性致病菌均无交叉反应。特异性为89.47%,敏感性为100%。采用近红外荧光免疫层析法和传统方法对30份食品进行检测,结果发现2种方法符合性达93.3%。结论所研制的单增李斯特菌的近红外快检试纸条具有特异性、敏感性较高的特点,适用于食品样本中单增李斯特菌的即时检测。     

免疫磁珠检测食品中单增李斯特菌的研究

免疫磁珠技术因其具有操作简便、高效快速等特点,目前已被广泛地应用于食品的快速分离纯化和检测领域中。本研究建立了单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)的免疫磁珠(Immune magnetic beads)检测方法,实现对单增李斯特菌的快速检测。通过对单增李斯特菌免疫磁珠添加量、免疫磁珠与菌液最佳反应时间、免疫磁珠分离单增李斯特菌的敏感性试验、特异性试验的研究,确定了单增李斯特菌抗体添加量50μg/mL、免疫磁珠添加量100μL,免疫磁珠与菌液最佳作用时间为30min。结果表明免疫磁珠法可快速特异地检测出食品中单增李斯特菌,检测灵敏度底限为10-7,相应的细菌浓度为14cfu/mL。该方法反应灵敏度高,特异性强,大大节省了检测时间和费用,可用于食品中单增李斯特菌的快速检测。因此研究食品中单增李斯特菌快速、准确检测方法以预防和控制食品安全事件的发生,具有重要的现实意义。     

Impact of nitrite on detection of Listeria monocytogenes in selected ready-to-eat (RTE) meat and seafood products

ABSTRACT:  The impact of sodium nitrite (NaNO₂) on detection and recovery of Listeria monocytogenes from select ready-to-eat (RTE) foods including smoked salmon, smoked ham, beef frankfurters, and beef bologna was assessed. Nitrite-containing (NC; 100 to 200 ppm NaNO₂) or nitrite-free (NF) foods were inoculated with a 5-strain cocktail of L. monocytogenes by immersion into Butterfield's buffer solution containing 5.4 to 7.4 × 10³ L. monocytogenes per milliliter. Inoculated products were vacuum-packaged and stored at 5 °C. A weekly comparative analysis was performed for presence of L. monocytogenes using 5 detection methods on products held at 5 °C for up to 8 wk. L. monocytogenes initially present at <100 CFU/g during the first 2 wk of storage increased throughout the study, attaining final populations of approximately 1 × 10⁴ to 1 × 10⁵ CFU/g. Lactic acid bacteria predominated throughout the study in all products. Exposure to NaNO₂ (100 to 200 ppm) resulted in 83% to 99% injury to the L. monocytogenes strains tested. The genetic-based BAX^® System (DuPont™ Qualicon, Wilmington, Del., U.S.A.) and modified USDA/FSIS methods detected 98% to 100% of Listeria -positive food samples and were consistently superior to and significantly different ( P < 0.05) from conventional cultural methods in recovering Listeria from NC samples. Data show that nitrite-induced injury adversely affects detection and recovery of L. monocytogenes from NC food, confirming earlier findings that nitrite-induced injury masks L. monocytogenes detection in NC RTE food products. Nitrite-injured Listeria can subsequently repair upon nitrite depletion and grow to high levels over extended refrigerated storage.     

食品中单核细胞增生李斯特菌株的分离及聚合酶链式反应鉴定

目的 建立单核细胞增生李斯特菌的聚合酶链式反应(PCR)检测方法,了解市售食品中单核细胞增生李斯特菌的污染情况.方法 采集成都市市售生畜肉、生禽肉、熟肉制品、水产品、生食蔬菜以及其他熟食等食品样品共135份,采用李氏增菌肉汤(LB1,LB2)进行初增菌,应用选择性分离培养基PALCAM和在TSA-YE平板上进行分离,利用单增李斯特显色平板进行鉴定;根据李斯特菌的特异性基因iap基因设计引物,采用PCR方法检测所有分离的李斯特菌株;根据单增李斯特菌的特异性基因hly基因和prfA基因设计引物检测单核细胞增生李斯特菌株.结果 135份样品中共检出李斯特菌17株,检出率为12.6％;其中单核细胞增生李斯特菌4株,检出率为3.0％.结论 本研究建立的PCR方法具有特异性,本市市售食品不同程度受到李斯特菌的污染.     

食品中单增李斯特菌快速检测技术研究进展

单核细胞增生性李斯特氏菌(简称单增李斯特菌)是一种广泛存在于自然界中可导致人畜共患病的病原菌, 同时也是一种常见的食源性致病菌。目前, 食品中单增李斯特菌的检测主要采用国标法, 传统检验方法虽然可操作性高, 但检验流程耗时过长。随着生活水平不断提高, 人们在饮食中摄入受单增李斯特菌污染的食品的风险增大, 如遇到食品安全突发事件, 传统检测不能及时得到检测结果, 无法保障人们的饮食安全。本文概述了基于分子生物学和免疫学发展起来的快速检测方法, 包括PCR法、实时荧光定量PCR法、环介导等温扩增法、酶联免疫吸附法、免疫层析试纸条, 其中环介导等温扩增法已经应用于食品致病菌的检测。通过分析对比以上快速检测方法, 为探索更灵敏高效且适用于基层食品检验的检测方法提供参考。     

环介导等温扩增技术快速检测奶粉中的单增李斯特菌

环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种在等温条件下特异、灵敏、快速的新型基因扩增技术。试验以单增李斯特菌为研究对象,根据其特有的hlyA基因设计了一套特异性引物,进行LAMP扩增。结果表明,LAMP检测单增李斯特菌的灵敏度为2.45×101cfu/mL,其对人工感染奶粉样品的检出限为7.32×101cfu/mL。对其它食品病原菌进行检测,结果均未出现目的条带,特异性强。表明LAMP法适合于食品中污染单增李斯特菌的快速检测。     

食品中单核细胞增生李斯特菌DNA环介导恒温扩增快速检测方法的建立

基于单核细胞增生李斯特菌胞壁质水解酶iap基因,设计两对特异性引物,利用DNA环介导恒温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,以扩增副产物焦磷酸镁实时浊度为判定标准,建立食品中单核细胞增生李斯特菌LAMP快速检测方法。结果显示,本LAMP方法特异性强,经过对29株细菌进行检测,所试单核细胞增生李斯特菌均为LAMP阳性,其他菌株为阴性;本LAMP方法对单核细胞增生李斯特菌纯培养菌的检测灵敏度为8CFU/管,对污染食品中单核细胞增生李斯特菌的检测灵敏度为12CFU/管。本研究建立的LAMP检测方法简便快速、结果判断直观。     

Effect of gamma irradiation on Listeria monocytogenes in frozen,artificially contaminated sandwiches

Gamma irradiation has been shown to effectively control L monocytogenes in uncooked meats but has not been extensively studied in ready-to-eat foods. The presence of Listeria in ready-to-eat foods is often due to postprocess contamination by organisms in the food-manufacturing environment. Because gamma irradiation is applied after products are packaged, the treated foods are protected from environmental recontamination. Currently, a petition to allow gamma irradiation of ready-to-eat foods is under review by the Food and Drug Administration. This study was conducted to determine if gamma irradiation could be used to control L. monocytogenes in ready-to-eat sandwiches. Ham and cheese sandwiches were contaminated with L. monocytogenes, frozen at -40 degrees C, and exposed to gamma irradiation. Following irradiation, sandwiches were assayed for L. monocytogenes. A triangle test was performed to determine if irradiated and nonirradiated sandwiches differed in sensory quality. We found that the D10-values ranged from 0.71 to 0.81 kGy and that a 5-log reduction would require irradiation with 3.5 to 4.0 kGy. The results of a 39-day storage study of sandwiches inoculated with 10(7) CFU of L monocytogenes per g indicated that counts for nonirradiated sandwiches remained fairly constant. Counts for sandwiches treated with 3.9 kGy decreased by 5 log units initially and then decreased further during storage at 4 degrees C. Sensory panelists could distinguish between irradiated and nonirradiated sandwiches but were divided on whether irradiation adversely affected sandwich quality. Our results suggest that manufacturers of ready-to-eat foods could use gamma irradiation to control L. monocytogenes and improve the safety of their products.     

单增李斯特菌分子检测标记的数据挖掘

本研究采用生物信息学手段对微生物基因组进行研究,通过对单增李斯特菌和其它微生物的基因组数据的比对分析,获得了种内相似度高于99% 的未被用作检测标记的单增李斯特菌种特异性序列区段4 个和编码序列4个,较之传统的检测标记的挖掘方法更简单快捷,为建立食源性致病菌检测标记挖掘策略进行了有益的试。     

Reduced detectability of Listeria monocytogenes in the presence of Listeria innocua

Recent foodborne crises have demonstrated the importance of monitoring food safety. In terms of microbiological criteria, food safety requires the reliable detection of pathogens such as Listeria monocytogenes along the food chain by appropriate analytical methods. However, indications exist that accompanying Listeria innocua strains suppress the growth of L. monocytogenes during selective enrichment, which may cause reduced or even inhibited detection. To study these effects, the limit of detection of L. monocytogenes was investigated in the presence of L. innocua using the International Organization for Standardization standard method ISO 11290-1 and the VIDAS LDUO system, an automated method based on enzyme-linked fluorescence technology. The challenge was to provide low initial Listeria concentrations at sufficient precision to quantify the influence on the probability of detection of L. monocytogenes. The application of reference materials appropriate for quantitative test methods and a standardized dilution procedure were necessary to ensure accurate CFU levels of defined proportions of mixtures of both Listeria species. During selective enrichment, overgrowth of L. monocytogenes by L. innocua could be confirmed, leading to high rates of false-negative results. Moreover, with both methods, a significant decrease in the detectability of L. monocytogenes could be quantified at ratios of 2:1 at very low concentrations representative of natural contamination levels often found in foods and environments. It is concluded that there is a need to improve existing procedures with respect to selective enrichment, as well as the detection techniques.