迷迭香提取物对自由基诱导鱼肝油氧化及模拟消化过程中脂质氧化的抑制作用研究

该试验分别采用FeSO4/VC和偶氮二异庚腈[2,2''-azobis（2,4-di-methylvaleronitrile）,AMVN]诱导鱼肝油氧化,研究迷迭香提取物对鱼肝油脂质氧化的抑制作用,同时测定迷迭香提取物在胃肠道消化过程中对鱼肝油氧化的抑制作用。结果表明：迷迭香提取物（终浓度为10 μg/mL～500 μg/mL）能够显著抑制FeSO4/VC和AMVN诱导的鱼肝油氧化（p＜0.05）;与FeSO4/VC和AMVN诱导鱼肝油氧化模型组相比,添加终浓度为500 μg/mL的迷迭香提取物（rosemary extract,RE）可使丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量分别下降93.47%和60.16%。此外,经过模拟胃肠道消化后,迷迭香提取物同样能够抑制鱼肝油氧化,且抑制效果随其浓度的升高而增强。     

辣椒碱对生物大分子氧化损伤的保护作用

本文分别采用Cu~(2+)/H_2O_2、AAPH体系诱导BSA氧化和羰基化损伤、Hemin/nitrite/H_2O_2诱导BSA硝基化损伤;Fe~(2+)/Vitc、AMVN诱导亚油酸(LA)过氧化及AAPH诱导鲱鱼精DNA氧化损伤的模型,研究了辣椒碱对生物大分子在羟自由基和烷氧自由基攻击下发生氧化损伤的保护作用。结果表明:50μM~1000μM的辣椒碱能显著抑制自由基诱导的蛋白质氧化损伤;10μM~1000μM的辣椒碱能显著抑制羟自由基诱导的蛋白羰基化、蛋白氧化应激产生的硝基化以及脂质过氧化终产物TBARS的生成,100μM~1000μM的辣椒碱能显著抑制烷氧自由基诱导的蛋白羰基化和DNA的氧化损伤。得出结论:辣椒碱对不同自由基诱导的生物大分子氧化损伤有显著的保护作用,且其保护作用在一定浓度范围内与辣椒碱浓度呈正相关。本研究为辣椒碱在食品抗氧化剂以及功能食品中的开发与应用提供了基础依据。     

芫荽对生物大分子氧化损伤的保护作用及自由基清除能力

研究芫荽对生物大分子氧化损伤的保护作用及自由基清除能力,采用福林酚法检测芫荽的多酚含量,利用2,2'-偶氮二异丁基脒二盐酸盐(2,2'-azobis-2-methyl-propanimidamide,AAPH)作为体外氧化诱导剂,采用凝胶电泳检测芫荽对DNA和蛋白质的氧化损伤保护,用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)法检测芫荽自由基清除率,用氧化自由基吸收能力(oxygen radical absorbance capacity,ORAC)分析检测芫荽的抗氧化能力值。结果表明,芫荽里的多酚类物质质量分数为4.054μg/mg;芫荽对DNA氧化损伤的最低保护质量浓度为4.0μg/m L,对牛血清蛋白的损伤保护质量浓度为125.0μg/m L;芫荽提取物对DPPH·的IC_(50)值为0.17μg/μL,芫荽提取物的ORAC值为485.3。综上所述,芫荽提取物具有较好的抗氧化活性。     

血根碱清除自由基及抑制生物大分子氧化的作用

目的：评价血根碱的体外抗氧化活性,为血根碱作为天然抗氧化剂的应用提供理论依据。方法：采用DPPH自由基清除法测定血根碱的体外抗氧化能力;采用Cu2+/H2O2和AAPH体系诱导牛血清白蛋白（bovine serum albumin,BSA）氧化损伤和羰基化损伤模型,研究血根碱对上述损伤的保护作用;采用TBA法分别测定血根碱对FeSO4诱导的大豆卵磷脂氧化损伤的抑制作用,及AAPH诱导的鲱鱼精DNA氧化损伤的抑制作用。结果：血根碱可有效清除DPPH自由基,且呈浓度依赖性,在100 μmol/L时清除率为85.94%;1～100 μmol/L的血根碱可显著保护Cu2+/H2O2及AAPH体系诱导的BSA损伤;10～100 μmol/L的血根碱可显著保护由Cu2+/H2O2体系诱导的BSA蛋白羰基化,当浓度为0.1～100 μmol/L时可显著保护由AAPH诱导的BSA蛋白羰基化;血根碱浓度在6.25～100 μmol/L范围内均可显著抑制由FeSO4及AAPH诱导的大豆卵磷脂及鲱鱼精DNA的氧化损伤。结论：血根碱可有效清除自由基及保护蛋白氧化损伤和羰基化损伤,亦可显著抑制脂质及DNA氧化损伤。     

菊苣酸对蛋白质氧化损伤的作用

目的：评价菊苣酸对自由基诱导蛋白质氧化损伤的影响。方法：采用Cu2＋/H2O2和2,2’-偶氮二（2-甲基丙 基咪）二盐酸盐（2,2’-azobis(2-methylpropionamidine)dihydrochloride,AAPH）两种不同的自由基诱导体系,分别 诱导牛血清白蛋白（bovine serum albumin,BSA）、小鼠肝脏蛋白和脑蛋白氧化损伤,研究菊苣酸对蛋白氧化损 伤的影响;通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白免疫印迹法检测蛋白氧化损伤程度。结果：菊苣酸在 100～1 000 μmol/L浓度范围内能够抑制Cu2＋/H2O2诱导的BSA氧化损伤;低浓度菊苣酸对Cu2＋/H2O2诱导的小鼠肝脏 蛋白和脑蛋白氧化损伤具有保护作用,但在高浓度时表现出促氧化作用;在AAPH诱导体系中,菊苣酸对3 种蛋白 模型均具有保护作用,且菊苣酸浓度越高保护效果越好。结论：在Cu2+/H2O2和AAPH两种诱导体系中,菊苣酸对蛋 白质氧化损伤表现出不同的作用效果。     

超声波辅助提取金柚柚皮中柚皮苷的工艺优化及其抗氧化能力研究

以金柚柚皮为对象,采用超声波辅助浸提法,优化提取金柚柚皮中的柚皮苷,对其在体外水平及细胞水平的抗氧化能力进行分析与讨论。选取时间、超声波功率与料液比为主要参数进行单因素试验,随后采用响应面模型对其提取条件进行优化。结果表明:提取金柚柚皮中柚皮苷的最佳时间为71 min,超声波功率为600 W,料液比为1∶28(g/mL),在该条件下通过验证试验得到提取率为(3.8±0.4)%。此外,不同浓度柚皮苷提取物的体外抗氧化能力在自由基体系中均具有较为理想的效果。通过经2,2-偶氮二(2-甲基丙基咪)二盐酸盐(2,2'-azobis-2-methylpropanimidamide,AAPH)诱导的红细胞溶血模型,探究柚皮苷提取物在细胞水平上的抗氧化能力,结果发现柚皮苷提取物在浓度为5.35μg/mL时,红细胞的溶血率与AAPH组相比,显著降低,为(6.2±1.4)%,表明得到的柚皮苷提取物能有效保护红细胞免受AAPH自由基的攻击,从而显著性降低红细胞在氧化应激条件下的红细胞溶血率。     

五种药食同源花提取物体外协同抗氧化作用

通过1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除试验和2,2-偶氮二(2-甲基丙基咪)二盐酸盐(2,2-azobis-(2-amidinopropane)dihydrochloride,AAPH)诱导红细胞溶血试验评价菊花、金银花、槐花、代代花、白扁豆花水提物和水提物的复配物(菊花50%,槐花18%,白扁豆花15%,代代花12%,金银花5%)的抗氧化性,并讨论五种药食同源花的协同抗氧化作用。结果表明五种药食同源花的提取物及其复配物均具有一定程度的抗氧化能力。在DPPH体系中,根据自由基的半数清除率(IC₅₀值),各提取物抗氧化能力大小顺序为复配物(IC₅₀=97.83 μg/mL) > 槐花(IC₅₀=98.63 μg/mL) > 菊花(IC₅₀=140.79 μg/mL) > 金银花(IC₅₀=146.35 μg/mL) > 代代花(IC₅₀=692.24 μg/mL) > 白扁豆花(IC₅₀=701.51 μg/mL),复配物表现出明显的协同抗氧化效果。AAPH诱导红细胞溶血体系中,复配物和槐花提取物表现出很强的溶血抑制作用,而金银花、菊花、代代花以及白扁豆花提取物仅表现出较弱的抑制作用。剂量在50~300 μg/mL时槐花提取物对红细胞的溶血抑制率小于复配物,当剂量达到300 μg/mL时,槐花提取物和复配物对红细胞的溶血抑制率分别为77.83%±1.85%和80.94%±1.46%,这说明五种药食同源花提取物之间存在协同抗氧化作用。     

红曲多糖的提取工艺优化及其对蛋白氧化损伤的保护作用

目的:优化红曲胞外多糖的提取工艺,首次探讨其对蛋白质氧化损伤的保护活性。方法:采用单因素实验和正交实验设计方法优化提取工艺;以2,2’-偶氮二异丁基脒二盐酸盐(2,2’-azobis-2-methyl-propanimidamide,AAPH)作蛋白损伤诱导剂,采用凝胶电泳检测红曲多糖对蛋白损伤的保护活性。结果:单因素实验及正交实验得出,在以料液比1:24(g:mL),提取时间2 h,提取温度100℃时,粗多糖的提取率为2.86%,含量为41.20%。抗氧化实验发现红曲多糖提取物对蛋白氧化损伤具有保护活性,其最小保护浓度为200μg/mL。     

枇杷叶科罗索酸抑制人低密度脂蛋白氧化修饰及保护血管内皮细胞氧化损伤作用

从枇杷叶中提取分离制备科罗索酸,采用体外Cu~(2+)诱导低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)氧化损伤的体外化学反应模型及2,2’-偶氮二(2-甲基丙基咪)二盐酸盐(2,2’-azobis-2-methyl-propanimidamide dihydrochloride,AAPH)诱导人主动脉内皮细胞(human aortic endothelial cells,HAECs)氧化损伤的细胞模型,考察枇杷叶科罗索酸对LDL氧化过程的抑制作用及对动脉血管内皮细胞氧化损伤的保护作用。体外实验结果表明,枇杷叶科罗索酸在体外10~100μmol/L剂量范围内能有效延长LDL氧化过程中的迟滞期,降低反应动力学曲线的曲线下面积以及降低脂质过氧化物的生成,表明科罗索酸在体外能有效抑制Cu~(2+)诱导的LDL氧化。细胞实验结果表明,在2~10μmol/L剂量范围内能有效降低AAPH所致HAECs的乳酸盐脱氢酶漏出量,维护细胞结构的完整性;提高受损细胞的超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性,从而提升内皮细胞抵抗氧化应激的能力;降低细胞处于sub-G1/G0状态的比例,减少AAPH所致细胞的坏死或凋亡。表明枇杷叶科罗索酸能在细胞水平有效保护HAECs免受AAPH氧化应激损伤。     

过氧自由基氧化对米糠蛋白体外胃蛋白酶消化性质的影响

采用不同浓度的2,2'-盐酸脒基丙烷(AAPH)有氧热分解产生的过氧自由基氧化米糠蛋白,研究过氧自由基氧化对米糠蛋白体外胃蛋白酶消化和消化产物抗氧化性质的影响。结果表明:随着AAPH浓度的增加,米糠蛋白体外胃蛋白酶消化率和初始消化速率先上升后下降,在AAPH浓度为1 mmol/L时达到最大值;过氧自由基氧化米糠蛋白体外胃蛋白酶消化产物中分子质量分布在500～1 500 u的肽含量呈现先上升后下降的趋势,在AAPH浓度为1 mmol/L时达到最大值25.19%。随着AAPH浓度的增加,过氧自由基氧化米糠蛋白体外胃蛋白酶消化产物清除ABTS~+·、DPPH·、·OH、O_2~-·的能力以及金属螯合能力、还原能力均先上升后下降,最大值均出现在AAPH浓度为1 mmol/L时。结果表明,过氧自由基轻度氧化可提高米糠蛋白体外胃蛋白酶消化率和消化产物的抗氧化性,而过度氧化则降低米糠蛋白体外胃蛋白酶消化率和消化产物的抗氧化性。     

氧化对兔肉肌原纤维蛋白结构、乳化性和凝胶性的影响研究

为探讨氧化对兔肉肌原纤维蛋白结构的氧化修饰及对肌原纤维蛋白乳化性质和凝胶质构特性的影响,本文利用0~10.0 mmol/L 2,2'-盐酸脒基丙烷(2,2'-azobis(2-amidinopropane)dihydrochloride,AAPH)热解产生的烷过氧自由基对兔肉肌原纤维蛋白进行氧化处理。结果表明,随着AAPH浓度的增加,兔肉肌原纤维蛋白游离巯基含量、内源性荧光强度和蛋白乳化稳定性不断减小,而羰基含量、二聚酪氨酸含量、蛋白粒径、乳化活性显著增加(P<0.05),表面疏水性则呈现先增后减再增的趋势。聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)结果显示,低浓度AAPH(0~1.0 mmol/L)和高浓度(10.0 mmol/L)分别诱导了蛋白的聚集和裂解,这些结构的改变引起了肌原纤维蛋白凝胶性质的改变。适度的氧化改性(AAPH 0~1.0 mmol/L)能提高兔肉肌原纤维蛋白凝胶的质构特性,而进一步氧化(AAPH 1.0~10.0 mmol/L)则显著降低了凝胶的性能(P<0.05)。因此,烷过氧自由基的氧化修饰能显著影响兔肉肌原纤维蛋白的结构和乳化凝胶性质(P<0.05)。     

Antioxidant activity of sugarcane molasses against 2,2′-azobis(2-amidinopropane) dihydrochloride-induced peroxyl radicals

Sugarcane molasses is a rich source of antioxidant materials with peroxyl radical scavenging effects. To explore the potent antioxidant activity of sugarcane molasses against 2,2′-azobis(2-amidinopropane) dihydrochloride (AAPH)-induced peroxyl radicals, 7 methanolic fractions of sugarcane molasses (F1–F7) were separated via bioassay-guided fractionation and evaluated by oxygen radical absorbance capacity (ORAC), cellular antioxidant activity (CAA), and oxidative DNA damage protective activity assays. The ORAC values of sugarcane molasses fractions ranged from 4399 to 6266 μmol TE/g, whilst the EC₅₀ values for CAA ranged from 3.7 to 5.9 μg/ml. Moreover, it was found that sugarcane molasses fractions, particularly F6 and F7, could protect against oxidative DNA damage caused by peroxyl radicals at an effective concentration of 100 μg/ml. Ten phenolic constituents were identified in the fractions, including known antioxidative compounds, viz., schaftoside, isoschaftoside, ferulic acid, p-coumaric acid, and p-hydroxybenzaldehyde.     

羊栖菜褐藻糖胶对AAPH诱导的斑马鱼氧化应激模型的保护作用

目的:探究羊栖菜褐藻糖胶（SFPS）对2, 2-偶氮二（2-甲基丙基咪）二盐酸盐（AAPH）诱导氧化应激斑马鱼模型的保护作用。方法:通过检测SFPS对2, 2'-联氮-双-（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（ABTS）及1, 1-二苯基-2-苦基肼（DPPH）自由基的清除能力,来评价及验证SFPS的体外抗氧化能力,优化AAPH诱导斑马鱼氧化应激模型,并分别以三个表型指标胚胎存活率、卵黄囊大小和心跳速率以及斑马鱼体内细胞死亡率和活性氧（ROS）生成率来评价SFPS的体内抗氧化活性。结果:SFPS主要由75.30%±1.77%的总糖、21.39%±1.07%的硫酸根,1.78%±0.19%的蛋白质以及1.47%±0.02%的多酚组成,对DPPH、ABTS自由基清除的IC₅₀值分别为0.59、0.69 mg/mL。此外,SFPS在50~200 μg/mL范围内对斑马鱼胚胎无毒性,并对AAPH诱导引起的斑马鱼氧化损伤起到保护作用,且呈剂量依赖型。其中,在最优浓度200 μg/mL显著提高斑马鱼胚胎存活率（100%,P<0.05）, 显著降低心跳速率（101.37%,P<0.05）和卵黄囊大小（111.80%,P<0.05）,对斑马鱼体内细胞死亡和活性氧生成的抑制率最高分别可达70.55%和50.68%。结论:SFPS具有较强的体外抗氧化作用,并对AAPH诱导氧化损伤的斑马鱼表现出优越的体内抗氧化能力及氧化损伤修复能力,这表明SFPS作为天然抗氧化剂在保健食品及化妆品领域具有广泛应用前景。     

利用斑马鱼模型研究琼胶寡糖抗氧化机制

为进一步实现琼胶寡糖的高值化利用,探究琼胶寡糖(Agaro-oligosaccharides,AOS)对2,2-偶氮二(2-甲基丙基咪)二盐酸盐(AAPH)诱导损伤后斑马鱼的抗氧化作用及机制。采用高效液相色谱法对酸法制备的琼胶寡糖组分进行分析。优化建立AAPH诱导的斑马鱼模型,并以斑马鱼胚胎存活率、活性氧生成率和细胞死亡率评价不同浓度琼胶寡糖的抗氧化活性。结果表明,琼胶寡糖主要由琼二糖(51.60%)、琼四糖(28.40%)和琼六糖(14.50%)组成,对斑马鱼胚胎添加琼胶寡糖浓度低于200 μg/mL时无致畸、致死毒性;琼胶寡糖(25、50、100 μg/mL)对最优AAPH诱导浓度(15 mmol/L)引起的氧化应激损伤斑马鱼模型有保护作用,且呈剂量依赖性。其中最优浓度100 μg/mL 琼胶寡糖能显著提高斑马鱼胚胎存活率(96.88%,p<0.05),显著降低AAPH引起的斑马鱼体内活性氧生成率(100.53%,p<0.05)和细胞死亡率(101.69%,p<0.05)。本研究通过斑马鱼模型首次揭示了琼胶寡糖可通过清除体内大量活性氧生成和阻止细胞死亡损伤的抗氧化机制实现提高其体内抗氧化活性,为其作为保健功能食品等应用提供了理论基础。     

核桃青皮提取物的多酚含量、体外抗氧化和抗菌活性的评价

本研究测定了核桃青皮乙醇提取物中多酚的组成及含量,分析了该提取物的体外抗氧化能力、抗菌活性及潜在抑菌机理。结果表明,核桃青皮提取物中总酚含量为（21.71±0.98）mg/g,总黄酮含量为（22.16±0.45）mg/g。通过超高效液相色谱/串联质谱和高效液相色谱鉴定出9种主要化合物,分别为槲皮苷、扁蓄苷、紫云英苷、金丝桃苷、异槲皮素、槲皮素、咖啡酸、阿魏酸和胡桃醌。核桃青皮提取物对偶氮二异丁脒盐酸盐（2,2’-azobis-2-methylpropanimidamide dihhydrochloride,AAPH）诱导的生物大分子氧化损伤具有保护作用。1 mg/mL核桃青皮提取物对牛血清白蛋白氧化损伤有明显的保护作用;0.5 mg/mL核桃青皮提取物能保护质粒DNA免受氧化损伤。核桃青皮提取物对大肠杆菌具有抑制作用,其通过增加细菌细胞膜的通透性,破坏细菌完整性,进而导致细胞内核酸和蛋白质泄漏。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明,核桃青皮提取物对细菌蛋白合成的损伤是其可能的抗菌机制。此外,核桃青皮提取物抑制了大肠杆菌的呼吸,核桃青皮提取物和磷酸三钠的呼吸叠加抑制率最低,明显降低...     

菊苣酸对活性氧诱导脂质和DNA氧化损伤的影响

目的：探讨菊苣酸对脂质和DNA氧化损伤的影响。方法：通过Cu2+/H2O2和2,2’-偶氮二（2-甲基丙基咪） 二盐酸盐（2,2’-azobis(2-amidinopropane)dihydrochloride,AAPH）分别诱导小鼠肝匀浆和脑匀浆、鲱鱼精DNA和 pBR322质粒DNA,建立脂质和DNA氧化损伤模型,研究菊苣酸对脂质和DNA氧化损伤的影响;通过硫代巴比妥酸 法检测脂质过氧化程度和鲱鱼精DNA氧化损伤程度;采用琼脂糖凝胶电泳检测pBR322质粒DNA氧化损伤程度。结 果：在Cu2+/H2O2诱导体系中,菊苣酸在一定浓度范围内对脂质和DNA具有较强的保护作用,但高浓度菊苣酸对小 鼠肝匀浆和脑匀浆以及鲱鱼精DNA的保护作用减弱,100 μmol/L菊苣酸对pBR322质粒DNA表现出促氧化作用;在 AAPH诱导体系中,菊苣酸在实验浓度范围内能明显抑制脂质和DNA的氧化损伤。结论：菊苣酸对脂质和DNA具有 明显保护作用,但高浓度菊苣酸对羟自由基诱导脂质和DNA氧化损伤具有促进作用。     

扇贝性腺多糖提取物的抗氧化及免疫调节活性

通过酶解法制备扇贝性腺多糖提取物(SGP),研究其抗体外氧化及免疫调节活性。采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼DPPH体系反应、Fenton反应和还原反应测定SGP的抗氧化活性;3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法测定SGP 对活性氧叔丁基脂氢过氧化物(tBOOH)致细胞氧化损伤及淋巴细胞增殖活性的调节作用;分光光度法测定SGP 对补体活性的影响。结果表明：SGP具有DPPH自由基清除能力(IC50=9.92mg/mL)和羟自由基清除能力(IC50=7.31mg/mL)及还原能力(AC20=7.74mg/mL);0.2μg/mL的SGP可明显改善tBOOH致RAW264.7细胞的氧化损伤作用,还可显著提高脾淋巴细胞的增殖活性及补体经典途径活性。