过氧化氢抗坏血酸法制备小分子量鲍鱼脏器多糖工艺研究

目的 采用过氧化氢抗坏血酸法制备小分子量鲍鱼脏器多糖。方法 利用过氧化氢抗坏血酸氧化法降解鲍鱼脏器多糖,通过单因素实验考察反应体系中过氧化氢浓度、反应时间和反应温度对多糖水解率的影响,在单因素实验基础上,结合Box-Behnken响应面分析法对影响多糖水解率的3个主要因素：过氧化氢浓度、反应时间和反应温度进行优化;利用葡聚糖凝胶层析法分离纯化降解后的多糖组分,并通过高效液相色谱法测定多糖分子量。结果 各因素对多糖水解的影响大小为：过氧化氢浓度>温度>时间。在过氧化氢浓度0.2%、反应时间3 h、反应温度60℃条件下,多糖水解率最高,为69.85%。分离纯化后的小分子量鲍鱼脏器多糖为单组分,通过高效液相色谱法测得该多糖分子量为4011 Da。结论 采用过氧化氢抗坏血酸法降解鲍鱼脏器多糖,可进一步为鲍鱼脏器深加工提供参考。     

卡拉胶海藻多糖硫酸酯化技术研究

利用微波辐射法制备特定分子量多糖(MW 1 000—20 000Da)并进行硫酸酯化修饰,从而提高其生物活性或降低毒副作用。优化后的卡拉胶酸解条件为:溶液浓度5%、制备量600mL、pH 2.0、微波功率750W。当目标产物分子量为1 000—3 000Da时,最适微波处理时间为30min;当为5 000—8 000Da,最适处理时间为20min;10 000—12 000Da时,最适处理时间为12min。考察酯化反应温度、酯化剂浓度等对硫酸根取代度的影响,确定较优反应条件,得到特定分子量及硫酸根取代度的卡拉胶多糖。本项研究为进一步针对卡拉胶多糖的抗流感病毒活性研究奠定了基础。     

酶法制备大豆肽的相对分子量分布及降压作用研究

目的:为了研究双酶复合酶解大豆分离蛋白制备大豆肽的相对分子量分布及活性片段对实验性高血压大鼠的降压效果。方法:通过单因素实验优选,采取正交实验优化复合酶的酶解工艺,以酶解液对血管紧张素转换酶(ACE)抑制率为指标优选最佳工艺;通过超滤、纳滤后得到最佳分子量片段,应用左硝基精氨酸(L-NNA)诱导大鼠高血压模型,分别给予不同剂量的活性片段进行实验。结果:双酶复合酶解的最佳条件为:在料液比为1:20 g/mL的情况下,酶解温度50℃,酶底比3.0%,酶解pH7.0条件下先用菠萝蛋白酶酶解2 h后,再以酶底比4.0%加入胰蛋白酶,控制温度为40℃、酶解pH为8.0条件下酶解4 h,大豆分离蛋白的水解度35.31%。经过高效液相对酶解液的相对分子量分布得出,大豆分离蛋白原液含有的蛋白质及多肽的相对分子质量主要区间在5000~1.0×105 Da,在双酶复合酶解下,酶解液的蛋白质及多肽的相对分子质量主要区间均在500~4000 Da;通过超滤得出最佳活性片段为1000~3000 Da,药理实验表明,与模型对照组相比各组血压均有降低,且大豆肽剂量组有显著性差异(p<0.05);其中大豆肽高剂量组和卡托普利组相当。结论:双酶复合酶解制备的大豆肽相对分子量较小,活性片段对高血压大鼠模型降压作用显著。     

胡芦巴中性多糖酸水解工艺优化的研究

本文对胡芦巴中性多糖酸水解的工艺条件进行研究。以还原糖得率为指标,采用L9(34)正交设计对酸浓度、反应时间、反应温度的参数进行优选。结果表明,从水解产物低聚糖产量考虑,6mol/L盐酸浓度,100℃反应温度,1h反应时间为最佳工艺条件,此时低聚糖的得率为43.97%,低聚糖的分子量约为500～1000Da;以获得较小分子量的低聚糖为目的,则6mol/L盐酸浓度,90℃反应温度,2h反应时间为最佳实验条件,此时低聚糖的分子量约为300～750Da,得率为13.52%。     

发芽糙米中粗多糖的纯化及分子量测定

本文对发芽糙米粗多糖进行纯化,通过比较活性炭吸附法、过氧化氢氧化法、大孔树脂吸附法三种方法的脱色效果,以及Sevage法、三氯乙酸法、酶与Sevage结合方法三种方法的脱蛋白效果,筛选出发芽糙米粗多糖脱色、脱蛋白的最佳方法。分别比较了DEAE-Sepharose CL-6B、DEAE Fast Flow、DEAE Sepharose 52三种柱层析填料对糙米粗多糖的层析纯化效果,筛选出最优填料。并对纯化后的发芽糙米多糖各组分进行分子量的测定。结果表明:大孔树脂AB-8对发芽糙米粗多糖脱色效果最佳,脱色率为86.57%,多糖损失率为28.96%。酶-Sevage法脱蛋白效果较好,且多糖损失率低,脱蛋白率为74.36%,多糖损失率为14.09%。对发芽糙米多糖进行柱层析的最佳填料为DEAE-Sepharose CL-6B。根据线性回归方程计算其平均分子量,水洗多糖组分的平均分子量为1.47×105 Da,盐洗多糖组分的平均分子量分别为9.62×105、5.59×106、3.15×105 Da。结论:确定了针对发芽糙米粗多糖的去除蛋白质和脱色的方法,并筛选出最佳的柱层析填料,分离出四个组分发芽糙米多糖,为发芽糙米粗多糖的提取、纯化、分离逐渐转变为工业化生产提供了理论基础。     

酸催化水解处理甘蔗叶提取木糖的研究

为了从蒸汽爆破预处理后得到的甘蔗叶中提取木糖,采用酸催化水解法处理甘蔗叶研究了提取木糖过程中各因素对木糖溶出量的影响。结果表明,木糖得率随硫酸浓度先增大后减小,随液料比增大而增大,随反应时间延长先增大后减小,随水解温度增高,先增大后减小。最佳酸解工艺条件是,硫酸浓度2%,反应时间2 h,反应温度100℃,液料比是11:1(v/w)。     

广东虫草多糖脱蛋白及凝胶渗透色谱法表征其分子量分布的研究

通过比较蛋白脱除率和多糖损失率,研究Savage法、三氯乙酸(TCA)法及盐酸法对广东虫草多糖(CGP)脱蛋白的效果,并利用凝胶渗透色谱法(GPC)测定虫草多糖组分的保留时间tR、重均分子量Mw、数均分子量Mn、峰位分子量Mp、多分散性PD以及各细分的相对含量,以表征广东虫草多糖的分子量分布.结果表明:采用Savage法脱蛋白总体效果较好,处理次数3次为宜;GPC谱图分析结果表明,CGP含有三个不同分子量级别的多糖组分,其重均分子量Mw分别为2.57×106、3.84×104及5.00×103.     

低氯丙醇小麦面筋蛋白水解液的酸解工艺优化

以水解度、鲜味氨基酸(天门冬氨酸和谷氨酸)等为指标,利用盐酸、优质谷朊粉制备小麦面筋蛋白水解液,并优化各酸解条件,包括盐酸浓度、水解时间及料液比。同时对酸解植物蛋白过程中易生成的3-氯-1,2-丙二醇的含量进行测定,并组织感官鉴评小组对不同条件下水解液进行感官鉴评,选出综合指标较优的制备条件。在单因素试验基础上,采用响应曲面的3水平设计(Box-Behnken设计),以水解度和谷氨酸含量为指标优化了盐酸浓度、水解时间及料液比等工艺参数。得到最佳酸解工艺条件为盐酸浓度1.6 mol/L,料液比14(g/mL),水解时间4h。还比较了活性炭吸附前后3-氯-1,2-丙二醇的含量,预期得到适合工业大批量生产的优质、安全、鲜味高的低氯丙醇小麦面筋蛋白水解液。     

核桃粕中多肽的酶法制备工艺

探索生物酶法水解核桃蛋白制备核桃多肽的工艺。以酶解蛋白的水解度和氮溶指数作为考察指标,单因素筛选核桃蛋白水解酶、反应底物的液料比、酶解时间等条件,优化酶水解核桃蛋白及制备核桃多肽的提取的工艺参数。选用胰蛋白酶作为核桃蛋白的水解酶,酶解条件为:pH 7.0,温度45℃,液料比10∶1 (mL/g),酶解时间240 min,添加量4 000 U/g。该条件下改性后的核桃蛋白氮溶指数为69.61%,水解度为39.31%,提取的多肽分子量小于1 450 Da的含量为36.33%。基于酶水解法,此次试验的提取工艺合理可行,为核桃多肽的提取提供了理论依据。     

低分子量岩藻聚糖制备工艺及其抗菌活性的研究

采用超声波辅助过氧化氢的方法降解岩藻聚糖,采用膜分离制备分子量50 ku和50 ku 2个组分的低分子量岩藻聚糖组分,并以未降解的岩藻聚糖为对照测定其抗菌活性。通过多糖降解率、硫酸基团保留率和抗菌生物学活性的比较研究证明,超声波辅助降解2 h时的降解效果较好,此时的水解率为30.73%,硫酸基团保留率在24.71%,抑菌圈直径为25 mm。此条件下所制备的低分子量岩藻聚糖具有较好的理化性质及抗菌生物学活性。     

低分子量褐藻多糖的制备及其活性分析

利用抗坏血酸协同过氧化氢法降解褐藻多糖,以DPPH自由基清除率为指标,通过工艺优化得到最佳降解条件,然后用超滤技术将降解产物进行分级,获得不同分子量组分,并分析其DPPH自由基清除率、保湿效果,酪氨酸酶抑制率等活性。正交试验结果表明,最佳降解条件为H₂O₂-V_C浓度20 mmol/L、降解温度45 ℃、降解时间3 h,在此条件下获得的降解产物的DPPH自由基清除率达到61.23%,降解产物得率为73.16%。电泳结果表明,降解后的褐藻多糖的条带明显出现在低分子量区。利用超滤系统将降解产物分级为<5 kDa、5~10 kDa、10~30 kDa、>30 kDa四个不同分子量段的组分,研究发现各分子量段之间的活性存在显著差异（P<0.05）,尤其<5 kDa组分（其主要成分为2.140×103 Da,占比29.6%）的活性最好,其DPPH自由基清除率为59.27%,60 h后保湿率为75.75%,酪氨酸酶抑制率为65.28%。与褐藻多糖相比,其糖醛酸含量稍有下降。本研究结果可为褐藻多糖在功能性食品等领域的应用提供理论依据。     

基于代谢组学研究绣球菌多糖对高脂血症大鼠的降血脂作用

目的：从代谢组学的角度探讨绣球菌多糖对高脂血症大鼠血脂的影响及其血清代谢物的变化。方法：对高脂血症模型大鼠分别灌胃不同剂量的绣球菌多糖8 周后,研究其对大鼠血清脂质生化指标的影响,采用气相色谱-质谱联用技术对大鼠血清中的代谢物进行检测,筛选绣球菌多糖对高脂血症大鼠作用的差异代谢物,分析其涉及的代谢通路并对其中影响最大的通路进行验证。结果：与正常对照组相比,高脂血症模型组血清的总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和总胆汁酸浓度显著升高（P＜0.05）,高密度脂蛋白胆固醇浓度显著降低（P＜0.05）;与高脂血症模型组相比,绣球菌多糖高剂量组血清的总胆固醇浓度显著降低（P＜0.05）,异亮氨酸、酪氨酸、甘氨酸、苏氨酸、丝氨酸、丙氨酸、葡萄糖、甘油、琥珀酸、胆固醇、棕榈酸等14 种代谢物表达量均发生显著变化（P＜0.05）,它们通过谷氨酸与谷氨酰胺代谢,缬氨酸、亮氨酸与异亮氨酸合成,苯丙氨酸、酪氨酸与色氨酸合成,甘油磷脂代谢等8 条代谢通路发挥降血脂作用;其中谷氨酸与谷氨酰胺代谢影响最大。与正常对照组相比,高脂血症模型组血清的谷氨酸水平显著降低（P＜0.05）;与高脂血症模型组相比,绣球菌多糖低剂量组血清的谷氨酸浓度显著升高（P＜0.05）,中、高剂量绣球菌多糖组血清的谷氨酸和谷氨酰胺水平显著升高（P＜0.05）。结论：绣球菌多糖能够改善高脂血症大鼠的血脂异常,通过代谢组学分析其作用机理可能与机体内的氨基酸代谢和脂质代谢有关,尤其是谷氨酸与谷氨酰胺代谢。     

平菇多糖硫酸酯制备工艺优化及抗氧化活性研究

以取代度为考察指标,研究了浓硫酸加入量、反应温度和反应时间等因素对平菇多糖硫酸化的影响;在单因素的基础上,通过L9(34)正交试验优化平菇多糖硫酸酯的制备工艺条件;采用FT-IR光谱仪对平菇多糖和平菇多糖硫酸酯进行结构鉴定,并通过测定还原力、DPPH自由基、超氧阴离子自由基和羟自由基清除率探索了平菇多糖硫酸酯的抗氧化活...     

蛹虫草多糖的纯化及其分子量的测定

以蛹虫草子实体为材料,对水提醇沉、硫酸锌盐去蛋白后获得蛹虫草粗多糖（CP）进行分离纯化。采用膜分离技术、DEAE．52柱层析及SephadexG-100柱层析对CP进行分离纯化,并使用高效凝胶渗透色谱法（HPGPC）测定各组分多糖分子量,以表征不同路径所得多糖的分子量分布。结果表明：CP经膜过滤、DEAE-52柱层析及SephadexG-100进一步柱层析得到多糖组分CP2-c2-s2,经HPGPC法鉴定,CP2-c2-s2为均一多糖组分,其平均分子量为20200Da。     

酸水解冬虫夏草胞外多糖的分子质量变化及动力学研究

以冬虫夏草胞外多糖为研究对象,通过凝胶渗透色谱分析酸水解多糖的分子质量、分子质量降解率(MWDR)和多分散指数(MW/Mn)的变化规律,并在此基础上探讨酸水解动力学。结果表明：酸水解可得到高分子质量和低分子质量两个多糖组分,高分子质量多糖组分的含量、分子质量和MW/Mn均随酸解时间的增加而减小,而MWDR呈线性增加趋势。低分子质量多糖组分含量随酸水解时间的增加而增加,分子质量基本维持在3.0kD;MWDR在0.5h内呈线性增加趋势,大于0.5h后基本维持在0.25。胞外多糖的酸水解模式为中心链断裂,符合假一级反应动力学方程,反应速率常数为3.24×10-2min-1,远小于随机链断裂的反应速率常数。     

碱提西番莲叶多糖的分离、鉴定及生物活性

以热水提取后的西番莲叶残渣为原料,利用NaOH碱溶液提取多糖(APEL),通过离子交换层析进行分离,测定多糖的理化性质,同时采用红外光谱、高效液相色谱、凝胶渗透色谱法对多糖进行分析,并研究了西番莲叶中多糖组分的体外降血糖及抗凝血活性。结果表明:APEL经DEAE-52纤维素离子交换层析法分离得到3种组分:APEL-1、APEL-2、APEL-3,APEL及其分离组分均具有多糖的典型特征峰,主要由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸组成,APEL、APEL-1、APEL-2和APEL-3的分子量分别为4.277×10⁶,4.276×10⁶,4.203×10⁶,4.111×10⁶ Da。APEL及其组分对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶均有显著抑制作用,并能显著延长活化部分凝血活酶时间、凝血酶原时间和凝血酶时间,具有明显的体外降血糖和抗凝血活性。     

响应面法优化白首乌多糖超声辅助提取工艺及其结构表征

为了提高白首乌多糖的得率,本文采用超声波辅助法提取白首乌中非淀粉多糖。在单因素实验基础上结合响应面法对超声波辅助法提取白首乌多糖工艺进行优化。结果表明,最优提取工艺参数为:液料比为22:1 mL/g、超声时间为44 min、超声功率为350 W及超声温度为52 ℃,在此条件下的多糖得率为1.35%±0.02%。该条件下提取的多糖的重均分子量集中在1.71×107 、1.15×106、5.93×104 Da ,由岩藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖、核糖、半乳糖醛酸以及葡萄糖醛酸组成,含量分别为0.17%、1.66%、7.40%、10.51%、74.41%、0.79%、0.85%、0.36%、3.28%、0.57%,具有一般多糖的红外光谱吸收峰以及良好的溶解性, 为日后白首乌多糖的结构解析以及工业应用提供一定的参考。     

超声-微波协同提取柚子皮多糖工艺优化及单糖组成、结构和抗氧化活性分析

以柚子皮为原料,采用超声-微波协同提取技术提取柚子皮多糖,优化最佳提取工艺,对其进行脱色、脱蛋白处理,对其单糖组成、结构和抗氧化活性进行分析。结果表明,超声-微波协同提取柚子皮多糖最佳工艺为:微波功率400 W,提取时间34 min,液料比39∶1(mL∶g),提取液pH 9.0,多糖得率为10.41%。紫外光谱分析表明无蛋白质及核酸残留,凝胶渗透色谱法测定柚子皮多糖平均分子质量为2.4×10^4 Da。液相色谱-质谱联用仪测定结果表明,柚子皮多糖是一种酸性杂多糖,由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖组成,摩尔比为0.502∶0.960∶0.295∶6.331∶40.673∶10.732∶7.923。扫描电镜和红外光谱分析表明,柚子皮多糖主要为不规则碎片结构,伴有小的不规则颗粒,碎片表面粗糙,所得多糖呈不规则形状,表明柚子皮多糖具有非晶态结构,为吡喃型糖苷环骨架。抗氧化活性结果表明,柚子皮多糖具有较好的自由基清除效果,在质量浓度为1.0 mg/mL时,对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基、羟自由基和2,2′-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸[2,2′-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS]自由基清除率分别为55.58%、46.32%、40.25%。该实验结果为柚子皮多糖的进一步分离纯化、结构解析、生物活性研究及开发具有潜力的功能性食品提供依据。     

酵母细胞壁多糖分子量分布和结构的初步分析

以啤酒酵母细胞壁多糖为研究对象,比较了Sevage法和三氯乙酸(TCA)法脱蛋白效果,利用凝胶渗透色谱法(GPC)测定了细胞壁多糖的分子量分布,用葡聚糖凝胶G-100对多糖进行了纯化,最后用红外光谱法分析了多糖组分D的结构,结果表明:Sevage法脱蛋白效果较好,GPC测定结果得出酵母细胞壁多糖有5个组分,其重均分子量为1.31745×105、7.0863×104、3.6988×104、1.8277×104、8.342×103。红外光谱分析得出多糖组分D在890.51cm-1和808.48cm-1有特征吸收,为β-D-吡喃型结构,在844cm-1处没有吸收峰,不含有或含有少量的α-型糖苷键。