抗菌肽Jelleine-I对采后柑橘果实绿霉病的控制作用

研究抗菌肽Jelleine-I对指状青霉（Penicillium digitatum）生长的影响及可能的作用机理,并采用损伤接种的方法评价Jelleine-I对柑橘果实采后绿霉病的控制效果。结果表明,Jelleine-I能明显抑制P. digitatum的生长,其最小抑菌浓度和最小杀菌浓度分别为6.25 mmol/L和12.5 mmol/L;同时,其能有效控制柑橘果实采后绿霉病的发生。经Jelleine-I处理后的P. digitatum菌丝体细胞膜通透性增加,细胞间隔膜损坏,细胞内绿色SYTOX Green荧光强度增加,细胞间蓝色Calcofluor White荧光减少。此外,经Jelleine-I处理后的P. digitatum菌丝体胞外电导率以及胞内核酸物质泄漏量均显著增加（P＜0.05）。综上,Jelleine-I通过破坏P. digitatum细胞膜结构完整性,引起胞内物质泄漏,加速P. digitatum死亡,从而有效控制柑橘果实采后绿霉病的发生。     

食品内外部因素对金属抗菌肽SIF4抑菌活性影响及生物相容性分析

为阐明食品内外部因素对金属抗菌肽SIF₄抑菌活性的影响规律,以金黄色葡萄球菌为指标菌,考察了温度、pH、金属阳离子、蛋白酶、反复冻融和化学试剂等因素对抑菌活性的影响,并研究了SIF₄的生物相容性。结果表明,金属抗菌肽SIF₄具有较好的热稳定性和pH稳定性,121℃仍可保持（92.68±0.40）%抑菌活性,pH 2～8可保持（99.45±0.40）%以上抑菌活性;Ca²⁺、Mg²⁺、K⁺和Na⁺等金属阳离子对抑菌活性无显著影响（P>0.05）;胃蛋白酶、胰蛋白酶和蛋白酶K处理后仍可保持较高抑菌活性,具有较好的酶耐受性;6次冻融处理后抑菌活性仍高达（99.00±0.81）%,表明具有较好的冻融稳定性;EDTA和Tween-80处理对抑菌活性无显著影响（P>0.05）;低浓度十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate, SDS）和尿素处理对抑菌活性无显著影响（P>0.05）,高浓度处理后抑菌活性稍有下降...     

黄粉虫抗菌肽的分离纯化及生物活性研究

本研究以黄粉虫为试材,采用碱性蛋白酶酶解黄粉虫蛋白制备获得了抗菌肽,并对其进行分离纯化,比较了不同组分及纯化后抗菌肽的抑菌活性、热稳定性及分子量。结果表明:大孔吸附树脂对蛋白酶酶解液动态吸附并梯度洗脱后得到5个组分,抑菌试验表明无水乙醇洗脱组分的抑菌活性最强。采用制备型HPLC对无水乙醇洗脱组分进一步纯化,得到两个组分(H-1,H-2),其中组分H-2对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌均表现出较强的抑菌活性,且其最小抑菌浓度(MIC)为0.512 mg/m L。热稳定性试验表明,H-2具有较好的热稳定性,121℃加热20 min仍能保持较高活性。液质联用(LC-MS)结果表明,H-2的分子量为756.82u。本研究为黄粉虫抗菌肽的高效分离和纯化提供了科学依据,为黄粉虫抗菌肽在食品防腐中的应用提供了基础数据。     

苯并噻二唑处理对柑橘果实采后病害控制效果及机制分析

以‘丰脐’柑橘果实为试材,研究了不同浓度苯并噻二唑（benzothiadiazole,BTH）和青霉菌 （Penicillium italicum）、绿霉菌（Penicillium digitatum）、炭疽菌（Colletotrichum gloeosporides）同孔、异孔接 种对柑橘果实青霉病、绿霉病、炭疽病的控制效果,筛选出针对这3 种病害控制效果最适宜的BTH浓度,在此浓 度下考察打孔和浸泡处理对果实果皮内源水杨酸含量和抗病性相关酶活力的影响。实验结果表明：0.25、0.50、 1.00 mmol/L 3 种浓度的BTH与P. italicum、P. digitatum、C. gloeosporioides同孔或异孔接种均可以降低果实青霉病、 绿霉病、炭疽病的病斑直径,其中,0.50 mmol/L的BTH效果最好;在病害发病率方面,3 种浓度的BTH处理均在果 实发病初期有效果,后期效果不显著,相比之下,0.50 mmol/L的BTH效果较好。最适浓度下,通过对果实果皮内源 水杨酸含量和抗病性相关酶活力的研究发现,BTH损伤接种能增加果皮内源水杨酸的含量,BTH浸泡处理对果皮内源 游离态水杨酸含量无显著影响,但能促进果皮内源结合态水杨酸含量的积累;BTH损伤接种和浸泡处理均能增加柑橘 果皮β-1,3葡聚糖酶、几丁质酶、苯丙氨酸解氨酶、过氧化物酶和多酚氧化酶的活力。由此推测,BTH处理诱导柑橘果 实提高了其采后抗病性。     

产抗菌肽乳酸菌筛选及抗菌肽的分离纯化与特性研究

目的筛选得到产抗菌肽菌株,对抗菌肽进行分离纯化及理化性质研究。方法利用琼脂扩散法筛选产抗菌肽的菌株,运用细胞吸附解吸和阳离子交换层析法纯化抗菌肽,从热稳定性、酸碱稳定性和蛋白酶敏感性3方面研究抗菌肽的理化特性。结果筛选得到7株产抗菌肽的菌株,其中菌株4121具有较广的抑菌谱,命名为鼠李糖乳杆菌4121。对抑菌物质进行分离纯化和理化性质测定,电泳结果显示抗菌肽的分子量约为11 kDa,最终获得的抗菌肽比活力为12379.11 AU/mg,最终纯化倍数为91.99倍。该抗菌肽的抑菌能力在20~80℃及偏酸条件下具有很好的稳定性。同时该抗菌肽对蛋白酶K和α-胰凝乳蛋白酶敏感。结论筛选出的鼠李糖乳杆菌4121所产生的抗菌肽热稳定性及酸稳定性良好,具有广谱抑菌能力,并建立了有效的抗菌肽分离纯化法—细胞吸附解吸-阳离子交换层析法。     

酒糟大黄鱼抗菌肽FAH34的抑菌活性及热稳定性

副溶血性弧菌为常见的食源性致病菌，是影响海洋食品安全性的主要危害因子。本研究从酒糟大黄鱼中鉴定一种抗菌肽FAH34(氨基酸序列为KTISFILK)，研究其对副溶血性弧菌的抑菌活性及热稳定性。结果表明，肽FAH34对副溶血性弧菌的最低抑菌浓度(MIC)值为7.80 μg/mL，在FAH34作用3 h后，细菌数从5.06 lg (CFU/mL)降至0 lg (CFU/mL)，显示出很强的抑菌活性。透射电镜观察发现，肽FAH34是通过破坏细菌细胞膜结构，使胞内物质外渗，从而达到杀菌的效果。经80 ℃、30 min及121 ℃、15 min处理后，肽FAH34仍能保持原有的抑菌活性，对人体LO₂细胞活力(>90%)无显著影响。FAH34应用在鱼肉及腌制液中，可将其中副溶血性弧菌数量控制在0~0.40 lg(CFU/mL)范围。结论:FAH34是一种对溶血性弧菌具有热稳定性的新型抗菌肽，可作为生物防腐剂应用于水产腌制食品中。     

新型牛乳铁蛋白衍生肽KW-WK的生物活性及其稳定性

以牛乳铁蛋白肽片段LFcinB18-28为母肽,在保留其高电荷、强疏水性的基础上,依据对称结构设计理念,引入精氨酸和色氨酸替换,设计出新型抗菌肽KWRRWQWRRWK-NH2（KW-WK）。采用圆二色谱法、微量稀释法、噻唑蓝法等方法分析KW-WK的二级结构、抑菌活性、溶血活性、细胞毒性及稳定性。结果表明,KW-WK肽在模拟水环境中呈无规卷曲状,在模拟细胞膜环境中,则呈α-螺旋结构;KW-WK肽的抑菌性强,最小抑菌浓度为4～128?μmol/L;溶血率低,当肽浓度为256?μmol/L时,其溶血率小于5%;细胞毒性小;治疗指数为9.14,细胞选择性高;热稳定性好,100?℃处理1?h后仍保持较强的抑菌活性,酶稳定性较LFcinB18-28母肽有极大的提高。因此,新型抗菌肽KW-WK在食品、医药和畜牧等领域都显示出巨大的应用潜力。     

带鱼蛋白抗菌肽抑菌效果的影响因素

以舟山带鱼为原料,采用复合酶解法制备带鱼蛋白抗菌肽,探究温度、pH值、胰蛋白酶、β-内酰胺酶、反复冻融和金属离子对带鱼蛋白抗菌肽抑菌效果的影响。结果表明：带鱼蛋白抗菌肽具有较强的热稳定性;在pH值为4.8时,带鱼蛋白抗菌肽的抑菌活性最高,达到45.12%,在pH值为8.8时出现最低值40.08%;此抗菌肽在胰蛋白酶和β-内酰胺酶的作用下,依然保持了原有的抑菌活性;随着冻融次数的增多,抗菌肽的抗菌效力呈下降的趋势,但在冻融6次之后,也只下降到90.28%,;带鱼蛋白抗菌肽对Na+、K+、Ca2+、Mg2+具有较强的稳定性,抑菌活性基本不受影响;但是对Zn2+、Fe2+和Fe3+表现出较低的耐受性,其相对抗菌效力分别降低至86.25%、76.38%和74.97%,应当避免带鱼蛋白抗菌肽与这些离子的接触。该抗菌肽在各因素条件下稳定性较好,在作为天然抗菌剂上有一定的应用前景。     

花椒籽蛋白抗菌肽的抑菌作用及其稳定性研究

本研究采用菌落计数法对花椒籽蛋白抗菌肽的抑菌效果及稳定性进行了研究。结果表明:抗菌肽对大肠杆菌、沙门氏菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌均具有抑制作用;抗菌肽的抑菌活性随浓度的升高而增强;经不同温度、加热时间处理后,抗菌肽的抑菌活性与对照相比无显著差异(p0.05);抗菌肽在经p H 2.0~12.0处理后仍有抑菌活性,p H 2.0时的抑菌率最低(58.13%),p H 12.0时的抑菌率最高(79.17%);随着金属离子浓度的增加,经K+、Ca2+和Fe3+处理后的抗菌肽的抑菌活性分别呈降低、增加、变化平缓的趋势,经0.1 mol/L K+处理后的抗菌肽的抑菌活性明显增强;经有机溶剂处理后,抗菌肽的抑菌活性有所降低;经吐温20、吐温80处理后,抗菌肽的抑菌活性极显著增强(p0.01),SDS对抑菌活性的增加不显著。因此,抗菌肽具有很好的热、酸碱、金属离子和有机溶剂稳定性,而表面活性剂(吐温20、吐温80)能使抗菌肽的抑菌活性显著增强。     

毛织物用酶与纺织助剂的配伍性研究

研究了毛织物防毡缩用碱性蛋白酶、中性蛋白酶与纺织助剂的配伍性能,通过相对活性法与减量法相结合,对无机助剂、表面活性剂和染料进行了研究,研究发现:Na~+、K~+、NH_4~+、Mg~(2+)、Ca~(2+)盐低浓度时对酶具有激活作用;非离子型表面活性剂对酶具有激活作用;Cu~(2+)、Fe~(3+)、Mn O_4~-金属盐、离子型表面活性剂和染料对蛋白酶的活性具有明显的抑制作用;Na~+、K~+、NH_4~+、Mg~(2+)、Ca~(2+)对中性蛋白酶的激活作用比碱性蛋白酶激活作用更显著,离子型表面活性剂和染料对碱性蛋白酶的抑制作用更为显著。这一研究对酶在毛纺工业上的应用可提供理论指导。     

食品加工、贮藏对乳杆菌源抗菌肽抑菌活性的影响及安全性评价

为明确乳杆菌源抗菌肽粗提粉在食品加工、贮藏过程中的应用,先测定其抑菌谱,然后以白假丝酵母菌为指示菌,从最低抑菌浓度(MIC)、温度、pH、盐浓度、反复冻融以及贮藏时间等方面对粗提粉进行相对抑菌活性评估,然后进行安全性评价。结果表明,乳杆菌源抗菌肽粗提粉具有广谱抑菌性;其热稳定性良好,121 ℃处理20 min仍可保持79.68％的相对抑菌活性;在pH 2~6处理4 h后,可保持90％以上的相对抑菌活性,pH 10~12处理4 h后,几乎完全失活;盐的质量浓度达到0.8 mg/mL时,相对抑菌活性显著降低(P＜0.05);在不同温度、不同贮藏时间,相对抑菌活性无显著变化(P＞0.05);经-20 ℃反复冻融5次后的相对抑菌活性同样无显著性差异(P＞0.05)。安全性评价证实粗提粉属无毒、安全级别。结论:乳杆菌源抗菌肽粗提粉稳定性好,适用范围广,可作为生物防腐剂应用于食品领域。     

产抗菌肽肠球菌的筛选及其抗菌肽生物学性质

利用牛津杯琼脂扩散法从新生儿粪便中筛选到一株产广谱抗菌肽的乳酸菌菌株,经菌体形态观察、生理生化分析、全自动微生物基因指纹鉴定系统和16S r DNA序列分析确定该菌株为屎肠球菌(Enterococcus faecium)。经过氧化氢酶处理后,发酵上清液仍具有抑菌活性,而胃蛋白酶、胰蛋白酶和蛋白酶K处理后,抑菌活性基本消失,说明该抑菌物质为蛋白类似物,即抗菌肽。该菌株所产抗菌肽在p H2.0~5.0范围内保持活性,45~100℃处理1 h后抑菌活性基本不变。发酵液中的抗菌肽经液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)和数据库APD比对得出3条不同的抗菌肽氨基序列,具有重要的研究价值。     

核桃谷蛋白抗菌肽的分离纯化及抑菌稳定性分析

目的：以核桃粕谷蛋白为原料生产抗菌肽,研发一种新型抗生素的替代品。方法：通过菌酶协同固态发酵法（枯草芽孢杆菌和碱性蛋白酶协同）从核桃粕谷蛋白中制备抗菌肽,通过超滤、凝胶层析过滤、液相色谱-串联质谱（liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）和分子对接对核桃粕谷蛋白抗菌肽（walnut glutelin antimicrobialpeptide,WGP）进行分离、纯化和筛选。以对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌性保持率为指标,研究抗菌肽的抑菌稳定性。结果：经超滤、凝胶层析分离后,WGP-ⅢA和WGP-ⅢC组分均具有较强抗菌活性;LC-MS/MS结合虚拟筛选,从2种组分中共鉴定得到6条多肽,分子对接筛选得到3个肽段,分别为WGP-ⅢA组分的LAEAYNIPDTIARRL和WGP-ⅢC组分的SHSVIYVIR、APQLLYIVK;分子对接结果显示,WGP-ⅢC组分的抑菌活性更强;抑菌稳定性分析表明,核桃谷蛋白抗菌肽在高温热处理、紫外线、不同pH值下和不同蛋白酶处理后均表现出较好的稳定性。结论：核桃粕谷蛋白抗菌肽在食品抑菌防腐...     

乳杆菌源抗菌肽的代谢条件优化及其特性研究

探讨乳杆菌代谢产抗菌肽的条件及其生物学特性。通过琼脂扩散法分析嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌和发酵乳杆菌抑菌活性差异,采用正交实验分析获得干酪乳杆菌代谢产抗菌肽的最佳条件为:装液量20%、接种量2%、培养温度30℃,静置培养42h。研究发现该抑菌物质热稳定性好,在低p H条件下能够保持较好的抑菌活性,可被胰蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解而不被胃蛋白酶酶解。进一步的研究发现,该抑菌物质的作用方式为杀菌,且抑菌谱广,可抑制或杀灭多种革兰氏阴性菌和部分革兰氏阳性菌,对多种食源性病原菌有较强的抗性,其可开发为食品防腐剂和用于畜禽养殖的饲料添加剂。     

卵白蛋白源抗菌肽的分离纯化与结构鉴定

以卵白蛋白为原料,采用胃蛋白酶水解制备具有抑菌活性的蛋白肽。通过超滤和Superdex peptide 10/300凝胶色谱分离技术获得高抑菌性组分,以抗菌肽对大肠杆菌和沙门氏菌的抑菌性为试验指标,筛选最佳抑菌性组分,再进行反相高效液相色谱分离,测定分离得到的9个组分抑菌活性,发现C3组分的抑菌活性和得率最高,其中大肠杆菌及沙门氏菌抑菌圈直径分别为(19.32±1.45),(18.74±1.27)mm。最后采用高效液相色谱—电喷雾—质谱鉴定抗菌肽的结构,显示氨基酸序列为GlyLeu-Glu-Pro-Ile-Asn-Phe-Gln(GLESINFQ)。该肽经固相合成纯度为95.84%,其抑菌活性与C3组分无显著性差异(P0.05),从而证明卵白蛋白源抗菌肽发挥抑菌活性的成分主要是肽段GLESINFQ。     

含抗菌肽基因的天然质粒在枯草杆菌中的表达

侧孢短芽孢杆菌抗菌肽具有高效、广谱、稳定的抗菌活性,该抗菌活性与其内源质粒密切相关。为研究侧孢短芽孢杆菌含抗菌肽基因质粒异源表达的可行性,本研究中将侧孢短芽孢杆菌S62~-9的天然质粒电转枯草芽孢杆菌Wb800受体细胞,筛选阳性转化子并对其表达产物性质进行研究。得到了产生抗菌活性产物菌株Z4,发酵6 h后开始产生抗菌物质,12~20 h产量达到最大,达620.96 AU/m L。Tricine~-十二烷基硫酸钠~-聚丙烯酰胺凝胶电泳看到S62~-9质粒在枯草芽孢杆菌中得到了成功的表达,反相高效液相色谱分析Z4表达产物含有与侧孢短芽孢杆菌抗菌肽相同物质。该物质抑菌谱广,稳定性好:对于G~+、G~-和真菌均有抑菌活性,而且对于G~+菌株的抑菌效果优于G~-菌株和真菌,121℃处理20 min后的效价保留率约为90%,100℃处理60 min后仍有81%的活性保留;p H 2~12的范围内效价保留率基本不发生变化;对蛋白酶较为敏感,胰蛋白酶和蛋白酶K处理后抗菌肽的效价保留率为60%左右,其他3种蛋白酶处理后也有一定程度的降低。本研究获得了抗菌肽的异源表达菌株Z4,为进一步工业生产抗菌肽提供支持,而且为该抗菌肽遗传基因定位于质粒上提供了证明。     

玉米抗氧化肽Leu-Pro-Phe抗氧化稳定性研究

以从玉米蛋白粉中分离纯化得到的玉米抗氧肽Leu-Pro-Phe为研究对象,探讨温度、p H、食品配料、金属离子和胃肠道消化酶对Leu-Pro-Phe清除DPPH和ABTS自由基能力的影响。结果表明:玉米抗氧化肽LeuPro-Phe具有较好的热稳定性,在100℃下处理5 h仍能保持较好的自由基清除活性。Leu-Pro-Phe具有良好的耐酸、耐碱性,酸性和碱性环境均未破坏其结构,其中碱性环境有助于其清除ABTS自由基。食品配料对LeuPro-Phe的抗氧化活性影响显著,其中蔗糖、Na Cl和柠檬酸能极显著(P0.01)地提高其DPPH自由基清除活性。常见的金属离子对Leu-Pro-Phe抗氧化活性的影响不一,K+、Ca2+、Mg2+、Zn2+和Cu2+均能显著(P0.05)影响LeuPro-Phe的DPPH自由基清除活性,而其ABTS自由基清除活性仅对Cu2+敏感,高浓度的Cu2+能显著(P0.05)抑制其清除活性。体外消化试验表明:Leu-Pro-Phe具有一定的抗消化能力,经胃蛋白酶和胰蛋白酶消化后仍保持较高的自由基清除活性。     

柑橘采后青霉菌的侵染及产毒机制的研究进展

柑橘是中国的第一大水果作物,柑橘采后青霉病是影响柑橘品质安全的重大病害之一,还会造成果品霉菌毒素污染的风险。目前研究主要集中于P.digitatum的侵染机制,而重点青霉菌对柑橘的感染和产毒机制有着密切的联系,产生的真菌毒素会对食品安全造成严重威胁,基于此,本文针对柑橘采后主要青霉菌,综述其侵染和致病机制、产毒机制,分析目前柑橘产业采后青霉病的研究趋势和方向,以期降低真菌毒素污染风险,推动柑橘产业“提质增效”,为柑橘品质提升和产业发展提供研究新思路。     

抗菌肽结构优化与改造策略研究进展

抗菌肽（AMPs）是一类具有抗菌活性的生物活性肽,由于热稳定性好、细胞选择性强、对哺乳动物细胞毒副作用少和不易产生耐药性等优势,成为近年来生物活性肽领域重要的研究热点。该文简要介绍了抗菌肽的分类,综述了抗菌肽的一级结构与空间结构特点,并从改变净正电荷数量与分布、调整抗菌肽α-螺旋度、提高抗菌肽蛋白酶耐受性、改变疏水性及平均疏水矩大小、改变两亲性、改变氨基酸残基位置及肽链长度、构建杂合抗菌肽、降低哺乳动物细胞毒性和制备金属抗菌肽提升抗菌活性与拓展抗菌谱等方面阐述抗菌肽的结构改造策略,并对抗菌肽结构优化策略研究进行了展望,旨在为抗菌肽结构优化策略的选择提供理论参考。     

一株具有抗菌活性芽孢杆菌HN-7的分离及抗菌活性研究

研究采用琼脂平板扩散试验,以单核增生李斯特氏菌（Listeria monocytogene）54002为指示菌,从湖南传统发酵豆制品中筛选 出1株对其具有明显抑制作用的芽孢杆菌（Bacillus sp.）HN-7,通过酸碱稳定性、酶敏感性、热稳定性及紫外稳定性试验,可初步推测 该抑菌物质是脂肽。 研究结果表明,菌株HN-7所产抗菌肽抑菌谱较宽,耐热、耐酸性强,对单增李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）、 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大肠杆菌（Escherichia coli）、藤黄微球菌（Micrococus luteus）,枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis） 都具有抑制作用,并在121 ℃处理20 min、pH 2.0～12.0条件下仍具有抑菌活性。