氯化钙结合季也蒙毕赤酵母（Meyerozyma guilliermondii）对抑制芒果采后炭疽病效果的影响

研究氯化钙（CaCl2）结合季也蒙毕赤酵母（Meyerozyma guilliermondii）处理对由炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）引起的芒果采后炭疽病的抑制效果,同时分析CaCl2对病原菌和酵母拮抗菌生长以及果实抗病性的影响。结果显示：40 g/L CaCl2可有效提升拮抗菌M. guilliermondii对芒果采后炭疽病的生防效果,其中40 g/L CaCl2与1×108 CFU/mL M. guilliermondii悬浮液的复合处理比单一处理更能有效地抑制芒果果实采后炭疽病的发生。此外,40 g/L CaCl2对C. gloeosporioides菌丝的生长具有抑制作用,并能够促进拮抗菌M. guilliermondii在芒果果实伤口处的增殖。与此同时,该复合处理显著诱导了芒果果实抗病相关酶活性的升高。结果表明,40 g/L CaCl2可以直接通过抑制病原菌的生长和促进拮抗酵母的增殖、以及间接诱导果实抗病性来提升拮抗菌M. guilliermondii对芒果果实采后炭疽病防治效果。     

具有拮抗胶孢炭疽菌活性酵母菌的分离和筛选

从芒果果皮、叶片和芒果园土壤中分离筛选得到具有拮抗胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)活性的酵母菌,研究其对芒果中胶孢炭疽菌的抑制作用。采用平板对峙法和活体实验进行筛选,采用形态学及r DNA-ITS序列分析等方法进行鉴定。通过平板对峙和活体实验筛选发现,菌株T18对芒果炭疽病病原菌胶孢炭疽菌的拮抗作用明显。抑菌实验表明,当T18菌悬液浓度为1×108cfu/m L时,对胶孢炭疽菌的抑菌半径为14.33mm。活体实验中,经T18处理的芒果果实炭疽病病斑直径仅为1.58mm,具有较强抑菌效果。通过菌落和菌体形态、生理生化、ITS序列分析对菌株T18进行鉴定,最终确定为尼泊尔德巴利酵母(Debaryomyces nepalensis)。     

枯草芽孢杆菌QDH-1-1对采后苹果青霉病的抑制效果

目的研究一种从番茄叶面分离获得的拮抗菌--枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)QDH-1-1对苹果采后青霉病的防治效果.方法通过拮抗菌的不同处理、使用浓度及与钙配合等方法研究了枯草芽孢杆菌对青霉病的抑制作用.结果表明拮抗菌使用浓度明显地影响苹果中病斑发生和病斑扩展,且使用浓度越大,其抑病效果越好.当拮抗菌的使用浓度达到109CFU/mL时,可完全抑制接种在苹果上的青霉菌(Penicillium expansum,104CFU/mL)的侵染.用108～109CFU/mL的拮抗菌与2%CaCl2配合对苹果采后青霉病的抑制效果明显地好于单独使用相同剂量的拮抗菌或2%CaCl2.拮抗菌的不同处理对病原菌孢子萌发的抑制效果与体内试验结果一致.结论枯草芽孢杆菌QDH-1-1主要通过营养和空间竞争作用抑制病原菌生长.     

拮抗酵母对西兰花黑斑病及品质的影响

黑斑病是西兰花最常见的采后病害,利用不同浓度拮抗酵母菌悬液可抑制黑斑病,但抑菌效果及对西兰花品质影响尚不清楚。离体试验结果表明,在105~108浓度范围内,随酵母菌悬液浓度增加,黑斑病菌受抑制效果越明显。108 CFU/mL拮抗酵母菌悬液对病原菌菌落生长抑制率最高,为87.9%,对病原菌孢子24 h后的萌发和芽管生长抑制率分别为90.97%,84.05%。活体试验结果表明,西兰花接种105 CFU/mL拮抗酵母菌悬液后,无论是单独存在还是和病原菌同时存在,都能在西兰花伤口处快速繁殖。108CFU/mL拮抗酵母菌悬液处理7 d后西兰花的病斑直径和发病率分别为4.70 mm和21.27%,效果明显好于较低浓度酵母菌处理的西兰花。不同浓度拮抗酵母菌悬液可有效保持西兰花贮藏期间叶绿素、Vc和可溶性糖含量,减缓PPO酶活性升高的趋势,并维持POD酶活性,而108 CFU/mL拮抗酵母菌悬液处理的各项指标优于其他处理组,其保鲜效果最好。因此,拮抗酵母菌可抑制黑斑病菌生长和繁殖,以108 CFU/mL拮抗酵母菌悬液效果为最好,对西兰花PPO酶活性有抑制作用外,对花球其它生理活性无明显影响。     

一株防治花生采后黄曲霉污染的拮抗菌的筛选及其防控效果

为预防花生储藏过程中的黄曲霉污染,从农田土中分离出2株拮抗芽孢杆菌,通过平板对峙法优选出1株作为研究对象,研究其对黄曲霉的抑制效果及对花生采后黄曲霉污染的防控效果。采用平板对峙法检测拮抗菌的抑菌广谱性并绘制生长曲线,并通过生理生化实验、形态特征观察及16S rDNA序列分析对该菌株进行鉴定。结果表明：优选出拮抗菌B419作为研究对象,其可有效抑制黄曲霉的生长,在拮抗菌浓度为1.0×10⁶ CFU/mL,黄曲霉孢子浓度为1.0×10³ CFU/mL时,黄曲霉孢子萌发抑制率达到98%;相比拮抗菌无菌发酵滤液和拮抗菌细胞悬浮液,拮抗菌发酵液防治花生黄曲霉污染效果最好;该菌株对互隔交链孢霉、枝孢霉、青霉、拟盘多毛孢等多种霉菌都有抑制作用,对大肠杆菌、酵母菌也有抑制作用;该菌株在培养4 h后进入对数期,14 h达到最大,26 h后进入衰亡期;该菌株被鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。综上,分离的拮抗菌B419对多种微生物都有抑制作用,不仅可以用来预防花生储藏过程中的真菌污染,在防治植物微生物病害方面也具有良好的应用潜力。     

采后芒果炭疽病拮抗酵母菌的分离和筛选

从海南昌江芒果园果树根际土壤中分离出71株酵母菌,采用平板对峙法筛选出对胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)拮抗作用最明显的酵母菌为LW,其抑菌带宽为12.25 mm。活体防效试验表明,经1×10~8 cfu/m L浓度的LW菌悬液处理的芒果果实(红玉品种)炭疽病病斑直径仅为11.67mm,显著低于对照组的29.63 mm,拮抗效果明显。LW对芒果自然发病的抑制试验表明,在25℃下,1×108 cfu/m L浓度的LW处理芒果,20 d后果实炭疽病病情指数仅为9.2;在15℃下,LW处理24 d后果实炭疽病病情指数仅为9.87。通过菌落和菌体形态及26 srDNA序列分析鉴定,确定LW为美极梅奇酵母(Metschnikowia pulcherrima)。     

草莓灰霉病拮抗酵母菌的筛选鉴定及对采后草莓品质的影响

从南京市马群草莓生产基地的草莓果实、叶片上分离筛选到一株对灰霉病具有明显抑制效果的拮抗酵母菌N1,结合生理生化特性及26S rDNA D1/D2区序列分析鉴定其为季也蒙毕赤酵母(Pichia guilliermondii)。通过用不同浓度N1菌悬液处理打孔后的草莓,发现菌悬液浓度越高,抑制效果越好,最佳浓度为5×108CFU/mL,其病斑直径比对照组小了32.3%。拮抗菌N1处理后果实于(2±1)℃、相对湿度(RH)90%～95%下冷藏,结果表明,拮抗酵母N1菌对果实酸含量无显著影响,但能保持草莓果实的光泽和硬度,维持VC含量和可溶性固形物含量,并显著减小了失重率,提高了草莓的冷藏品质,从而显著延长草莓的贮藏寿命。由此推测,该拮抗酵母菌具有很好的商业应用前景。     

一株拮抗酿酒葡萄灰霉病的枯草芽孢杆菌T3筛选、鉴定及抑菌分析

为筛选出对酿酒葡萄灰霉病具有良好抑制作用的拮抗菌,从酿酒葡萄根际土壤进行微生物分离,以灰葡萄孢(Botrytis cinerea)为靶标菌株,采用牛津杯法对拮抗菌进行筛选,通过形态学、生理生化特征以及16S rDNA进行鉴定分析,对拮抗菌进行生长特性及抑菌分析。结果表明:筛选出一株对灰葡萄孢(Botrytis cinerea)具有显著抑制作用的T3菌株,经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),培养24~48 h T3菌株进入稳定期,最适的生长温度为37 ℃,最适pH为7.0。T3菌株对灰葡萄孢(Botrytis cinerea)MIC为3.6×105 CFU/mL,MBC为3.6×106 CFU/mL,3.6×109 CFU/mL T3菌株对灰葡萄孢(Botrytis cinerea)抑菌直径为31.6±0.2 mm(P<0.05),抑菌效价为158.0±1.0 mm/mL(P<0.05)。扫描电镜观察T3菌株造成灰葡萄孢(Botrytis cinerea)菌丝畸形、扭曲、顶端膨大、原生质收缩、孢子稀松,抑制菌丝生长及孢子萌发。本实验为酿酒葡萄灰霉病的生物防治提供新的微生物资源,具有进一步研究价值。     

拮抗酵母对西兰花黑斑病及生理品质的影响

黑斑病是西兰花最常见的采后病害,利用不同浓度拮抗酵母菌悬液可抑制黑斑病,但抑菌效果及对西兰花品质影响尚不清楚。离体试验结果表明,在 105~108浓度范围内,随酵母菌悬液浓度增加,黑斑病菌受抑制效果越明显。108 CFU/m L 拮抗酵母菌悬液对病原菌菌落生长抑制率最高,为 87.9%,对病原菌孢子 24 h 后的萌发和芽管生长抑制率分别为 90.97%,84.05%。活体试验结果表明,西兰花接种 105 CFU/m L 拮抗酵母菌悬液后,无论是单独存在还是和病原菌同时存在,都能在西兰花伤口处快速繁殖。108 CFU/m L 拮抗酵母菌悬液处理 7 d 后西兰花的病斑直径和发病率分别为 4.70 mm 和 21.27%,效果明显好于较低浓度酵母菌处理的西兰花。不同浓度拮抗酵母菌悬液可有效保持西兰花贮藏期间叶绿素、Vc 和可溶性糖含量,减缓 PPO 酶活性升高的趋势,并维持 POD酶活性,而 108 CFU/m L 拮抗酵母菌悬液处理的各项指标优于其他处理组,其保鲜效果最好。因此,拮抗酵母菌可抑制黑斑病菌生长和繁殖,以 108 CFU/m L 拮抗酵母菌悬液效果为最好,对西兰花 ppo 酶活性有抑制作用外,对花球其它生理活性无明显影响。     

拮抗酵母对西兰花黑斑病及生理品质的影响

黑斑病是西兰花最常见的采后病害,利用不同浓度拮抗酵母菌悬液可抑制黑斑病,但抑菌效果及对西兰花品质影响尚不清楚。离体试验结果表明,在 105~108浓度范围内,随酵母菌悬液浓度增加,黑斑病菌受抑制效果越明显。108 CFU/m L 拮抗酵母菌悬液对病原菌菌落生长抑制率最高,为 87.9%,对病原菌孢子 24 h 后的萌发和芽管生长抑制率分别为 90.97%,84.05%。活体试验结果表明,西兰花接种 105 CFU/m L 拮抗酵母菌悬液后,无论是单独存在还是和病原菌同时存在,都能在西兰花伤口处快速繁殖。108 CFU/m L 拮抗酵母菌悬液处理 7 d 后西兰花的病斑直径和发病率分别为 4.70 mm 和 21.27%,效果明显好于较低浓度酵母菌处理的西兰花。不同浓度拮抗酵母菌悬液可有效保持西兰花贮藏期间叶绿素、Vc 和可溶性糖含量,减缓 PPO 酶活性升高的趋势,并维持 POD酶活性,而 108 CFU/m L 拮抗酵母菌悬液处理的各项指标优于其他处理组,其保鲜效果最好。因此,拮抗酵母菌可抑制黑斑病菌生长和繁殖,以 108 CFU/m L 拮抗酵母菌悬液效果为最好,对西兰花 ppo 酶活性有抑制作用外,对花球其它生理活性无明显影响。     

生防菌KD-16J的鉴定及其对番茄灰霉病的抑制作用

通过离体和活体筛选,确定一株生防菌KD-16J对果实灰霉病的抑制效果.经形态学鉴定、生理生化试验和内源转录间隔区序列分析鉴定,确定其为膜醭毕赤酵母菌(Pichia membranifaciens)属.在平板抑菌试验中发现,在105 CFU/mL～108 CFU/mL之间,酵母菌的应用浓度越高,对灰葡萄孢菌的抑制效果越好...     

3种致病菌多重real-time PCR检测方法的建立及其在散装即食肉制品中的应用

建立一种同时快速检测沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌的三重实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)方法.以沙门氏菌invA基因、金黄色葡萄球菌Sa442基因和蜡样芽孢杆菌Cereolysin AB基因为靶基因设计引物和TaqMan探针...     

基于荧光微球的免疫层析法结合免疫磁珠分离技术快速定量检测鼠伤寒沙门氏菌

为了建立一种能快速、灵敏、特异检测鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium,ST)的方法,本研究以荧光微球(FM)为标记物建立了荧光微球免疫层析检测法(FM-ICA),将羧基化的磁性微球与抗体偶联制备了抗-ST免疫磁珠(IMB),并将FM-ICA与IMB联合用于富集和检测三种食品样本中的ST。在优化条件下,FM-ICA检测的线性范围为3.16×10~6~2×10~9 CFU/m L,回收率为80%~120%,变异系数均小于5%。当菌液浓度大于1×10~8 CFU/m L时,结果显示与同属沙门氏菌的交叉反应;而当菌液浓度小于或等于1×108CFU/m L时,常见的12株非目标菌检测结果为阴性,特异性较好。FM-ICA+IMB联合检测三种模拟食品时的回收率为38%~55%,其中,西红柿对回收率影响较小,鸡蛋和猪肉影响较大。然而,联合检测的灵敏度可达到1×10~5 CFU/m L,比单一FM-ICA方法提高了30倍,同时,整个检测过程可在2 h内完成。本检测方法的建立对于快速筛查鼠伤寒沙门氏菌具有重要意义。     

流式分析技术快速定量检测牛乳中大肠杆菌O157:H7

建立一种基于流式分析技术的快速定量检测牛乳中大肠杆菌O157:H7的方法。用偶联有异硫氰酸荧光素的大肠杆菌O157单克隆抗体对大肠杆菌O157:H7进行特异性标记,通过优化抗体反应条件,建立流式检测方法,然后对磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffer saline,PBS）和人工污染牛乳样品中不同浓度的大肠杆菌O157:H7进行定量检测。本研究建立的流式检测方法的在PBS中的检测范围为2.57×103～1.12×108?CFU/mL,灵敏度达到2.57×103?CFU/mL。将所建立的流式检测方法应用于牛乳样品检测,当人工污染牛乳样品中大肠杆菌O157:H7的浓度在2.31×104～1.48×108?CFU/mL之间时,流式检测方法与平板计数方法检测结果基本一致,方法的灵敏度为2.31×104?CFU/mL,检测时间为35?min。该方法能快速、定量地检测出牛乳样品中的大肠杆菌O157:H7,在食源性致病菌的快速筛查和监控中具有重要的应用价值。     

基于磁性金属有机框架分离的纳米金比色法检测单核细胞增生李斯特菌

以磁性金属有机框架复合材料作为捕获探针,免疫功能化纳米金作为信号探针,建立一种纳米金比色法快速检测单核细胞增生李斯特菌的方法。结果表明：在最适条件下,单核细胞增生李斯特菌的可视化检出限为1.2×10³ CFU/m L,紫外光谱检测结果在1.2×10¹～1.2×10⁸ CFU/mL范围内有良好的线性关系(Y=0.519-0.043X,R²=0.978),检出限低至0.45 CFU/mL,各浓度梯度的批内变异系数在0.31%～1.30%之间。将单核细胞增生李斯特菌接种到鸡胸肉上进行检测,其加标回收率在91.1%～108.7%之间,变异系数不高于7.4%,且结果与平板计数法一致。本方法具有准确、灵敏、快速等特点,在食源性致病菌检测方面具有较好的应用前景。     

解淀粉芽孢杆菌NCPSJ7对采后脐橙绿霉病的防治作用及机制

为了阐明解淀粉芽孢杆菌NCPSJ7对采后脐橙绿霉病的防治作用以及潜在抑菌机理,以NCPSJ7发酵原液为实验材料,采用牛津杯以及果实打孔接种的方法,测定脐橙果实在贮藏过程中发病率、抗病性相关酶活力、抗氧化能力等指标。体外实验结果表明,高浓度的NCPSJ7显著抑制指状青霉（Penicillium digitatum）的生长（P＜0.05）。当NCPSJ7浓度达到1×108 CFU/mL时,其抑菌圈的直径为3.50 cm,是1×105 CFU/mL处理组（1.75 cm）的2 倍。体内实验结果表明,NCPSJ7在接种24 h时可定植到脐橙表皮伤口处,通过抢占空间和营养来抑制指状青霉的生长。在室温（25 ℃）条件下贮藏,与对照组和指状青霉单一处理组相比,NCPSJ7和指状青霉复合处理明显降低了脐橙的发病率和病斑直径,提高了果实中多酚氧化酶、过氧化物酶、几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活力,促进果实的总酚含量、总黄酮含量、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清能力和还原力的增加。综上所述,解淀粉芽孢杆菌NCPSJ7可作为一种有效防治采后脐橙绿霉病的微生物拮抗剂。     

川西高原发酵牦牛乳中降解亚硝酸盐乳酸菌的筛选与耐受性研究

以川西高原发酵牦牛乳中分离出的195株乳酸菌为研究对象,采用比色法测定其亚硝酸盐降解能力,从中筛选出亚硝酸盐降解能力极强的菌株。将这些优势菌株分别在人工胃液、人工肠液、胆盐和高盐4个模拟人工胃肠道消化环境中进行培养,测其耐受力。结果表明:这195株乳酸菌亚硝酸盐降解率范围为35.79%~96.51%,其中降解率在80%~90%的菌株占54.87%,仅有1.54%的菌株亚硝酸盐降解率在50%以下,有3株亚硝酸盐降解能力极强的菌株(降解率大于95%)。这3株菌在人工胃液中的活菌数随培养时间的延长而减少,培养3 h后,菌株5、26、150在pH5.5时的活菌数分别为3.7、3.6、4.1×108 CFU/mL;在人工肠液中培养4 h后,菌株5、26、150的活菌数分别为4.3、6.8、5.3×108 CFU/mL;在不同胆盐梯度的培养基中培养24 h后,3株菌的活菌数随胆盐浓度增大而减少,且均保持在108 CFU/mL以上;在高盐环境中培养24 h后的活菌数随盐质量浓度的增加而降低,活菌数均在108 CFU/mL以上。结论:川西高原发酵牦牛乳中分离出的195株乳酸菌降解亚硝酸盐的能力存在较大差异,其中降解亚硝酸盐能力极强的菌株对体外模拟消化环境具有较好的耐受力,为其在医药,食品和生物领域的应用提供了理论依据。