胶红酵母Rhodotorula mucilaginosa CICC 33013胞外多糖的分离纯化及抗氧化活性研究

研究胶红酵母Rhodotorula mucilaginosa CICC 33013菌株胞外多糖的初级结构与抗氧化活性。分离纯化得到胞外多糖的单一组分REPS2-A,分析其分子质量分布及自由基清除活性。结果表明,多糖组分REPS2-A的分子质量为7. 125×106Da,质量浓度为8 mg/m L时,DPPH自由基清除率为49. 1%,ABTS自由基清除率为51. 2%,还原力为0. 352。该文为了解胶红酵母菌的胞外多糖结构与功能提供了新的数据依据,为后续胶红酵母菌胞外多糖的构-效关系研究提供了实验基础。     

根瘤菌多糖的发酵优化及抗肿瘤活性

优化根瘤菌(Rhizobium NG10)产多糖的培养条件,提高胞外多糖(extracelluar polysaccharides of Rhizobium,REPS)产量,并探究其抗肿瘤活性。通过单因素实验、Plackett-Burman实验和Box-Behnken实验等对根瘤菌产胞外多糖发酵培养基配方进行优化,并采用MTT法检测多糖对人肝癌细胞的抑制作用。最终优化得到的最优培养基配方为:麦芽糖22. 5 g/L,大豆蛋白胨9. 5 g/L,Mg SO4·7H2O 0. 2 g/L,KH2PO40. 41 g/L,Na Cl 0. 1 g/L,此时胞外多糖产量为5. 05 g/L,相比原始提高了45. 95%; REPS对肝癌细胞Hep G2的抑制呈一定的量效关系,培养时间为48 h时IC50为393. 3μg/m L,肝癌细胞抑制率达到56. 74%。     

乳酸菌胞外多糖对结肠癌HT-29细胞增殖的影响

从15株大连工业大学大连市益生菌功能研究重点实验室保藏植物乳杆菌中筛选出对人结肠癌细胞HT-29抑制率最高的乳杆菌胞外多糖,对其进行分离纯化并研究多糖对HT-29细胞增殖的影响。通过苯酚硫酸法测定15种乳酸菌胞外多糖产量、3-(4,5-二甲基吡啶-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,MTS]测定不同浓度的粗多糖对HT-29细胞的抑制率,最终筛选出高产胞外多糖、对HT-29细胞增殖抑制率高的菌株Lactobacillus plantarum12所产胞外多糖,其胞外多糖的糖含量为54%、蛋白含量为3.6%。对其胞外多糖进行DEAE-Sepharose Fast Flow离子柱和Sepharose CL-6B凝胶柱的分离纯化,得到中性多糖组分EPS12-1和酸性多糖组分EPS12-2,2个多糖组分的糖含量分别为31.82%和35.21%,通过MTS法测定L. plantarum12菌所产粗多糖、多糖组分EPS12-1和EPS12-2分别在50、100、250、500μg/mL浓度时对HT-29细胞的抑制率,发现多糖浓度为250μg/mL时,对HT-29细胞增殖达到了最佳抑制效果,抑制率分别为27.58%、7.11%、12.00%。当多糖浓度为250μg/mL时,HT-29细胞凋亡率、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、caspase 8活性,均处在较高水平。L. plantarum12胞外多糖通过增加ROS酶活和激活caspase 8来抑制HT-29增殖。     

黄参多糖对癌细胞HepG2和P388增殖抑制与细胞凋亡的影响

目的：探索黄参提取物黄参多糖(SGP)对肝癌细胞HepG2和淋巴白血病细胞P388增殖的抑制与诱导细胞凋亡的效应,并初步探讨其对生命延长的作用。方法：应用SGP与肝癌细胞HepG2和淋巴白血病细胞P388共培养,采用MTT比色法测定不同剂量SGP对HepG2和P388细胞增殖的抑制;通过对小鼠皮下移植性肿瘤HepG2生长抑制实验,用流式细胞术分析SGP诱导细胞凋亡和细胞周期分布的变化;探讨SGP对荷淋巴白血病小鼠生命延长的作用。结果：SGP可明显抑制体外培养HepG2和P388细胞的增殖,200mg/(kg ·d)剂量作用48h,对HepG2的抑制率可达37.05%(P＜0.01),而150、200mg/(kg ·d)剂量作用P388细胞48h后抑制率均超过38%(P＜0.01);SGP在小鼠体内也能明显抑制HepG2移植性肿瘤生长,其抑制率超过40%;可诱导移植性肝癌HepG2细胞凋亡,并使细胞时相分布在G1期发生阻滞;对荷P388(腹水)小鼠生命有延长作用,延长率达10%。结论：SGP对小鼠有良好的抗癌变效果以及对小鼠原发性肝癌和淋巴白血病的良好抑制作用。     

藏灵菇源干酪乳杆菌KL1胞外多糖抑制人结肠癌细胞增殖的研究

分离纯化藏灵菇源干酪乳杆菌KL1胞外多糖(EPS),研究EPS纯品对HCT-8人结肠癌细胞的增殖抑制和诱导细胞凋亡作用。利用Sepharose CL-6B凝胶柱探讨干酪乳杆菌KL1菌株EPS粗品的纯化条件,应用紫外全波长扫描及苯酚-硫酸法鉴定EPS纯度;采用CCK-8法和Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒研究EPS对HCT-8人结肠癌细胞的增殖抑制和凋亡作用。结果表明:在0.02～0.12mol/L磷酸盐缓冲液梯度洗脱、流速3mL/min、样品上样质量浓度15.0mg/mL、样品上样量2.0mL的纯化条件下获得EPSa和EPSb两个单一组分的胞外多糖,其纯度分别为91.67%和82.86%。EPSa处理HCT-8人结肠癌细胞体外实验发现,EPSa对HCT-8细胞的增殖有抑制作用,以及诱导细胞凋亡的发生,且细胞生长抑制率呈时间-剂量依赖性。提示藏灵菇源干酪乳杆菌KL1菌株的EPSa有抑制结肠癌细胞增殖的生物活性。     

虫草多糖对环磷酰胺诱导微核的抑制作用

研究了虫草胞内、胞外多糖对环磷酰胺诱导的蚕豆根尖细胞微核的影响,结果表明,虫草胞内、胞外多糖可有效抑制环磷酰胺诱导的蚕豆根尖细胞微核的产生,其抑制作用随着虫草胞内、外多糖浓度的增大而增强,当多糖浓度为100μg/mL时,环磷酰胺诱导的蚕豆根尖细胞微核率最低,分别为7.333‰和7.556‰;抑制率达到最高,分别为53.52%和52.11%。     

盐酸哈尔酚骆驼蓬碱对人肝癌细胞生长的影响与自噬诱导作用的研究

目的探讨低剂量盐酸哈尔酚骆驼蓬碱(harmol hydrochloride dihydrate,HHD)对肝癌细胞株HepG2生长的影响及其自噬诱导作用。方法用不同浓度的HHD作用于肝癌细胞株HepG2 24 h后四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)法检测细胞活力,用流式细胞仪检测细胞凋亡,用Hoechst和PI双重染色方法观察细胞凋亡,用蛋白质印迹(western blotting, WB)的方法检测LC-3Ⅱ表达水平。结果 MTT检测结果显示不同浓度的HHD作用于HepG2细胞24h后,细胞活力随HHD浓度升高而降低,差异均有统计学意义(P0.05)。0、0.005、0.01 mg/mL HHD作用于HepG2细胞24 h后,细胞凋亡率均明显高于空白对照组(P0.05)。0.01 mg/mL的HHD处理HepG2细胞24 h后,凋亡小体的形成明显增多(P0.05)。Western blotting法检测发现0.01 mg/mL HHD作用细胞24 h后自噬标记蛋白LC-3Ⅱ表达显著升高。结论 HHD抑制肝癌细胞株HepG2在体外生长,其诱导细胞自噬可能是抑制作用机制之一。     

海湾扇贝多肽混合物对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

采用CCK-8（Cell Counting Kit-8）法检测海湾扇贝多肽混合物对体外培养的人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用,利用倒置显微镜及流式细胞仪观察、分析其对HepG2细胞的形态和细胞凋亡的影响。结果表明：不同质量浓度海湾扇贝多肽混合物（4、6、8、10、12 mg/mL）能够抑制人肝癌HepG2细胞的生长,且抑制率随海湾扇贝多肽混合物质量浓度的增加而升高。经12 mg/mL海湾扇贝多肽混合物处理后,HepG2细胞的形态发生了明显改变,表现为细胞皱缩、透明度降低、细胞核固缩等,并出现了凋亡小体。海湾扇贝多肽混合物可诱导HepG2细胞凋亡。     

乳酸菌胞外多糖发酵条件优化及抗肿瘤活性的研究

该研究以胞外多糖产量为评价指标,采用单因素试验及响应面试验对副干酪乳杆菌副干酪亚种（Lactobacillus paracasei subsp. paracasei）M5L产胞外多糖的发酵条件进行优化,并采用噻唑蓝（MTT）法及实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-FQPCR）研究胞外多糖的抗肿瘤活性。结果表明,乳酸菌M5L产胞外多糖的最优发酵条件为发酵温度37 ℃、发酵时间12.8 h、初始pH值7.7、菌体浓度108 CFU/mL,在此最优发酵条件下,胞外多糖产量达到最大,为167.2 mg/mL,是优化前的1.3倍。当质量浓度为500 μg/mL的胞外多糖对Caco-2细胞处理72 h时,抑制作用最佳,抑制率达19.5%,显著增加胞内Caspase-3、Bax基因且降低Bcl-2基因的表达量,说明该胞外多糖可通过影响凋亡相关蛋白的表达来促进Caco-2细胞凋亡。     

肉苁蓉抗衰老功能的研究进展

为了探讨肉苁蓉总苷（total glycosides of Cistanche deserticola,TG）对HepG2细胞的抑制作用及其机制研究。采用不同浓度（0、3.5、10.5、21、31.5、42 μg/mL）TG处理HepG2细胞24 h后,使用CCK8法检测细胞存活率;应用Hoechst 33342/PI双染法及Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡;并通过细胞迁移试验检测细胞迁移现象;同时采用流式细胞仪检测细胞周期进展变化;通过Western blot法测定α-甲胎蛋白（α-fetoprotein,AFP）、β-连环蛋白（β-catenin）、蓬乱蛋白（Dishevelled,Dsh）、糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）的表达量。结果发现,TG可以降低HepG2细胞的增殖能力,且有浓度依赖性,当TG为42 μg/mL时,细胞存活率仅有31.04%;此外,TG可以破坏细胞结构,诱导细胞凋亡,AV/PI检测后细胞凋亡率可高达32.44%;还可促使细胞坏死,限制细胞迁移,处理后的组别与对照组之间存在显著差异（P<0.05或P<0.01） ;同时,高浓度TG可以阻滞HepG2细胞在S期和G₂/M期;与对照组相比,TG处理之后,β-catenin、Dsh表达下降,而GSK-3β表达量升高。由此可知,肉苁蓉总苷通过影响细胞周期进展、促进细胞凋亡、限制细胞迁移等方面抑制HepG2细胞增殖,其作用机制可能是通过Wnt/β-catenin信号通路,激活GSK-3β降解β-catenin来实现肝癌抑制作用的。     

猴菇菌醇提物对胃癌大鼠肿瘤细胞凋亡的干预作用

探究猴菇菌醇提取物对胃癌大鼠肿瘤细胞凋亡的干预效果及作用机制。选取60只SD大鼠,10只作正常组,其余50只建立胃癌模型,分为胃癌组、药物对照组、低、中、高浓度猴菇菌组,分别干预。观察各组大鼠细胞增殖、凋亡、周期分布,检测胃动素、胃泌素及Bcl-2、Bax、caspase3表达。研究结果显示,高浓度猴菇菌组大鼠胃动素、胃泌素水平分别为140.62 pg/mL、85.39 pg/mL,肿瘤组织细胞凋亡率为50.25%、G1期细胞比例为55.61%、Bax表达量为0.76,均高于模型组、药物对照组、低、中浓度猴菇菌组;高浓度猴菇菌组大鼠肿瘤组织细胞增殖率为11.52%,Bcl-2、caspase3表达分别为1.35、1.32,均低于模型组、药物对照组、低、中浓度猴菇菌组(p0.05)。猴菇菌醇提取物能够改善胃癌大鼠胃功能,调控胃癌组织细胞增殖、凋亡及周期分布,为胃癌的临床治疗提供一定的理论依据。     

绿茶富硒蛋白对肝癌HepG2细胞的抑制作用

本研究探讨了绿茶富硒蛋白对肝癌HepG2细胞的抑制作用.采用DEEM培养基培养对数生长期的肝癌HepG2细胞,并将其作为对照组,将浓度分别为0.11 g/L、0.18 g/L、0.25 g/L、0.50 g/L的绿茶富硒蛋白为实验组;将添加二甲基亚砜(DMSO)的DMEM培养基作为参考组.通过光密度值计算抑制率,采用流...     

宾川葡萄籽原花青素纯化及对HepG2细胞增殖的影响

目的:研究云南大理宾川葡萄籽原花青素纯化及对肝癌HepG2细胞增殖的影响.方法:考察了上样液质量浓度、pH、流速、乙醇体积分数等对葡萄籽原花青素吸附及解析的影响,研究AB-8型大孔吸附树脂纯化云南大理宾川葡萄籽原花青素的条件.将纯化过程中乙醇梯度洗脱得到的不同极性葡萄籽原花青素作用于HepG2细胞,采用CCK8法检测不...     

Effects of phenolic compounds in blueberries and muscadine grapes on HepG2 cell viability and apoptosis

Although blueberries and muscadine grapes have high contents of polyphenols, few studies have been conducted to assess their potential effects on cancer cells. The objective of this study was to systematically evaluate the effects of different fractions of phenolic compounds in blueberries and muscadine grapes on HepG2 liver cancer cell viability and apoptosis. Three cultivars of blueberries (‘Briteblue’, ‘Tifblue’ and ‘Powderblue’) and four cultivars of muscadine grapes (‘Carlos’, ‘Ison’, ‘Noble’, and ‘Supreme’) were assessed in this study. Polyphenols were extracted and further separated into phenolic acids, tannins, flavonols, and anthocyanins using a HLB cartridge and LH-20 column. The major compounds of different fractions were characterized. The phenolic acid fractions of muscadine grapes and blueberries showed a 50% inhibition of HepG2 cell population growth at the level of 1–2 mg/mL. The greatest inhibitory effects were observed from the anthocyanin fractions with 50% inhibitions of cancer cell population growth at concentrations of 70–150 and 100–300 μg/mL in blueberries and muscadine grapes, respectively. The flavonol and tannin fractions showed intermediate activities. In addition, DNA fragmentation was measured by using a Cell Death Detection ELISA kit to assess the induction of apoptosis. The anthocyanin fraction resulted in a two- to fourfold increase in DNA fragmentation compared to control in both muscadine grapes and blueberries. These findings of inhibition of cancer cell growth and induction of apoptosis suggest that blueberries and muscadine grapes may contribute to reduction in liver cancer risk.     

泥鳅体表粘液多糖诱导SGC—7901细胞凋亡机理研究

探讨泥鳅体表粘液多糖（PML）对人胃癌SGC-7901细胞凋亡作用和机制。采用Sevege法对PML进行分离、纯化,用紫外分光光度法、凝胶色谱法和高效液相色谱法对其鉴定后作用于SGC-7901细胞中。采用MTT法鉴定PML对该细胞的抑制作用,光显下观察细胞形态结构变化,流式细胞术检测细胞周期及凋亡,Western Blot检测Bax、Bcl-2蛋白表达变化。结果表明,用Sevege法提取PML纯度高、成分单一。MTT法,10～270μg/mL PML处理SGC-7901细胞24、48、72h,抑制作用随PML浓度和时间增加而逐渐增强。流式细胞术检测细胞凋亡,凋亡率随PML浓度和作用时间增加而逐渐增高。Western Blot检测,细胞经10～270μg/mL PML处理24、48h后Bcl-2和Bax蛋白表达随浓度和时间增加分别增强和减少,说明PML对SGC-7901细胞凋亡有促进作用,其机理与对Bcl-2与Bax基因的调控有关。      

稠李属三种果实花色苷对HepG2细胞的增殖抑制作用比较

目的:比较稠李属三种果实花色苷对人肝癌HepG2细胞增殖抑制作用。方法:质量浓度为0.05～1.2mg/mL的稠李属三种果实花色苷分别作用于HepG2细胞24、48、72h,采用胎盘蓝染色法和MTT法绘制生长曲线以及检测对HepG2细胞生长抑制率。结果:0.05mg/mL的紫叶稠李花色苷促进细胞增殖,而山桃稠李、稠李在试选浓度范围内均对HepG2细胞具有抑制作用,且随浓度增加及作用时间延长抑制率增大。在紫叶稠李、山桃稠李、稠李作用HepG2细胞48h时,IC50值依次为1.07、0.82、0.64mg/mL,显示抑制HepG2细胞增殖的大小关系为:稠李>山桃稠李>紫叶稠李。结论:稠李属的果实花色苷能够有效抑制肝癌HepG2细胞的增殖。      

北极海洋红球菌B7740（Rhodococcus sp.）产类胡萝卜素和类异戊二烯醌的抗氧化、抗增殖活性

本实验旨在研究来自北极海洋红球菌B7740类胡萝卜素和类异戊二烯醌提取物（B7CIQE）的体外抗氧 化活性（通过β-胡萝卜素漂白测定、脂质和蛋白质氧化抑制实验、DNA氧化断裂抑制实验）、抗增殖活性（通过 抗人肝癌细胞HepG2和人口腔癌细胞KB增殖实验）和细胞内抗氧化效果。实验中使用日常饮食常见高等植物来 源类胡萝卜素（β-胡萝卜素、叶黄素、番茄红素）作为对照组,评价B7CIQE的生物活性：β-胡萝卜素氧化抑制 率为B7CIQE（70.20%）＞2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚（66.70%）＞表没食子儿茶素没食子酸酯（17.80%）＞番茄 红素（1.90%）;油脂开始氧化的温度顺序为B7CIQE（175 ℃）＞β-胡萝卜素（165 ℃）＞叶黄素（162 ℃）＞ 番茄红素（160 ℃）;蛋白质氧化抑制率为B7CIQE（25.75%）＞β-胡萝卜素（24.97%）＞叶黄素（17.94%）＞ 番茄红素（10.40%）;HepG2细胞抗增殖实验半最大效应浓度为叶黄素（20.86 μg/mL）＜β-胡萝卜素 （124.88 μg/mL）＜B7CIQE（126.34 μg/mL）＜番茄红素（139.24 μg/mL）;KB细胞抗增殖实验半最大效应浓度为 B7CIQE（25.14 μg/mL）＜叶黄素（64.29 μg/mL）＜番茄红素（69.87 μg/mL）＜β-胡萝卜素（149.16 μg/mL）。结 果表明,与植物源类胡萝卜素相比,B7CIQE具有相对更优异的抗氧化和抗增殖活性。     

不同产地腌渍萝卜化学成分分析及抑菌活性比较

利用高效液相色谱（HPLC）法分析不同产地腌渍萝卜的化学成分,使用牛津杯法对腌渍萝卜提取物进行了抑菌实验,并采用 噻唑蓝（MTT）比色法检测提取物对人正常肝细胞（LO2）和肝脏肿瘤细胞（HepG2）增殖的抑制作用。 结果表明,甲醇、乙醇、乙醚、丙 酮及乙酸乙酯提取物中分别有5种、6种、12种、11种、12种抑菌活性成分,其中乙酸乙酯提取物的抑菌活性最强。 30种提取物中,6个对 酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）有抑制效果（抑菌圈直径9.11～12.76 mm）;16个对大肠杆菌（Escherichia coli）有抑制效果（抑菌 圈直径10.84～31.92 mm）;24个对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）有抑制效果（抑菌圈直径11.11～32.23 mm）。 在提取物的质 量浓度为50 μg/mL的条件下,22种提取物对LO2细胞无毒,对HepG2细胞的抑制率在22.60%～63.63%,表明腌渍萝卜提取物中可能 存在抗癌活性成分。